田丹
- 作品数：18 被引量：60H指数：4
- 供职机构：遵义医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”贵州省国际科技合作计划更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学哲学宗教更多>>
- 推行免疫学实验教学改革 提高学生科研兴趣被引量：1
- 2013年
- 免疫学实验教学不仅有利于学生更好地理解和掌握免疫学基础理论、基本知识和基本技能,还能使学生的实践能力和创新能力得到提高,同时加强学生的科研兴趣。本文对免疫学实验教学方法改革做了研究,这些教改方案大大提高了学生的科研兴趣。
- 刘白南罗军敏杨鸣田丹郑静
- 关键词：免疫学实验教学教学改革
- 多系统萎缩患者TCR α链CDR3谱系的荧光定量PCR溶解曲线被引量：1
- 2010年
- 目的:利用荧光定量PCR溶解曲线分析技术检测1例多系统萎缩患者TCRα链CDR3谱系。方法:提取1例多系统萎缩患者和1例正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的总RNA,逆转录成cDNA,以32个人TCRα链胚系可变区基因家族(TRAV)设计上游引物,共同的TCRα链恒定区基因家族(TRAC)设计下游引物,荧光定量PCR(FQ-PCR)扩增32个TRAV基因各家族CDR3谱系,溶解曲线法分析各家族CDR3谱系的单、寡、多克隆增生,挑选单克隆进行PCR扩增,扩增产物行普通琼脂糖凝胶回收后测序分析。结果:多系统萎缩患者和正常人PBMC的32个TCRα链TRAV家族CDR3谱型的FQ-PCR产物的各家族相对定量表达不一;正常人的32个TCRα链TRAV家族CDR3谱型的溶解曲线图表现为多个峰型的高斯分布,多系统萎缩患者的TRAV10、TRAV15、TRAV29家族CDR3谱型的溶解曲线表现为单峰的克隆性增生,其他家族为多峰、寡峰的多克隆及寡克隆增生,未出现缺失的家族,对单峰的TRAV15家族的测序得到的CDR3区的氨基酸组成为:SAIYFCAEDRDSTLTFG。结论:该多系统萎缩患者的PMBC中,存在TCRα链CDR3谱系漂移。
- 田丹孙永萍汤贤英马锐姚新生
- 关键词：多系统萎缩互补决定区荧光定量PCR
- 基于SYBR Green Ⅰ的茎-环Real-time PCR定量检测miRNA-7方法的建立被引量：5
- 2015年
- 目的本研究旨在利用常规荧光燃料SYBR GreenⅠ,通过茎-环法设计原理,建立有效检测微小RNA-7(miR-7)的Real-time PCR方法。方法利用miRBase数据库获得miR-7的成熟体序列,分别设计1条miR-7特异性反转录引物,以及Real-time PCR上游和下游引物;观察不同退火温度和不同引物浓度对扩增miR-7的Ct值影响,选择最优的退火温度和引物浓度;测定不同稀释度RNA下Real-time PCR扩增miR-7的效果;并利用该方法检测小鼠4个器官中miR-7的灵敏性和特异性。结果在基于SYBR GreenⅠ的茎-环Real-time PCR检测法中,miR-7扩增的最优退火温度为60℃,最优引物浓度为10μmol/L;在不同稀释度RNA下miR-7的Ct值线性关系较好,且在模板RNA低于100 pg的条件下,该方法仍可有效检测miR-7分子;最后有效检测出小鼠4个不同器官中miR-7的差异性表达。结论成功建立基于SYBR GreenⅠ的茎-环Real-time PCR定量检测miRNA-7的方法,可为后续研究miR-7的生物学功能提供了重要工作基础。
- 赵娟娟徐华林陶弋婧郭萌萌周涯陈超秦娜琳郑静田丹徐林
- 关键词：SYBR
- 过表达microRNA-7通过下调CGG结合蛋白1的表达抑制人肺癌细胞生长被引量：16
- 2014年
- 目的探讨过表达microRNA-7(miR-7)对人肺癌细胞体内外生长的作用和可能机制。方法利用真核表达载体pcDNA3.1(-)-pri-miR-7(p-miR-7),体外瞬时转染95D人肺癌细胞,MTT法和克隆形成实验检测95D细胞的增殖变化;免疫荧光技术检测95D细胞Ki-67和CGG结合蛋白(CGGBP1)的表达;建立人肺癌裸鼠肿瘤模型,肿瘤局部注射p-miR-7真核表达载体,测量肿瘤大小并观察小鼠生存时间;实时PCR检测肿瘤组织中miR-7表达水平;免疫组织化学技术检测组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达。结果过表达miR-7可明显抑制肺癌细胞的体外增殖(P<0.05),Ki-67和CGGBP1的表达显著减少(P<0.05);体内实验结果显示,局部注射p-miR-7组中miR-7表达水平明显增加,同时荷瘤裸鼠的肿瘤生长缓慢,生存时间明显延长(P<0.05)。肿瘤组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达量均显著减少(P<0.05)。结论过表达miR-7可显著抑制人肺癌细胞的体内外生长,可能与其下调肿瘤生长相关蛋白CGGBP1的表达有关。
- 胡燕廖珍媛陈超秦娜琳郑静田丹李永菊朱顺飞罗军敏徐林
- 关键词：肺癌细胞生长
- TTF-1启动子调控miR-7表达对人肺癌95D细胞体外凋亡的影响被引量：3
- 2017年
- 目的观察甲状腺转录因子-1(TTF-1)启动子调控miR-7表达对人肺癌细胞体外凋亡的影响,并探讨其意义。方法将前期构建的TTF-1启动子调控miR-7真核表达载体(命名为p-T-miR-7)与对照载体p-cont分别体外瞬时转染人肺癌95D细胞,采用FCM法检测95D细胞凋亡比例;TUNEL法检测95D细胞凋亡情况;Western blot检测各组中磷酸化Caspase3和磷酸化Caspase9的蛋白的表达;共聚焦显微技术检测miR-7靶分子CGGBP1和EGFR蛋白的表达;最后,采用Western blot检测各组中磷酸化Akt和Erk蛋白的表达。结果体外转染48h后,与p-cont转染组相比,转染p-T-miR-7组细胞凋亡比例明显增加(P<0.05);磷酸化Caspase3和磷酸化Caspase9蛋白水平均显著增加(P<0.05),同时EGFR和CGGBP1蛋白表达均明显降低,且细胞中磷酸化Akt和Erk蛋白水平亦显著降低(P<0.05)。结论 TTF-1启动子调控miR-7表达可导致人肺癌细胞的凋亡。这为后续基于miR-7的人肺癌基因靶向治疗策略的开发提供了前期实验依据。
- 卢佳陈超廖珍媛崔盼盼雷良玉徐华林田丹郑静徐林
- 关键词：启动子肺癌
- 内侧前额叶的小清蛋白神经元调控抑郁样行为被引量：4
- 2018年
- 目的探讨前额叶小清蛋白神经元对抑郁样行为的影响。方法应用病毒注射,在小鼠内侧前额叶小清蛋白神经元上表达光敏感通道(ChR2)。免疫荧光和离体脑片电生理实验检测病毒的表达和光敏感通道在小清蛋白神经元的特异性表达。在体调控内侧额叶的小清蛋白神经元后,通过悬尾实验和糖水偏好实验来检测抑郁样的行为。旷场试验用来检测小鼠的运动能力。结果病毒可以在内侧前额叶小清蛋白神经元上特异性地表达。离体激活表达光敏感通道的神经元可以诱导出电流及电位。在体特异性地激活内侧前额叶小清蛋白神经元可快速诱导小鼠抗抑郁样的行为。小鼠悬尾实验中挣扎的时间增加(F=12.98,P=0.002 6),糖水偏好增加(F=5.35,P=0.039),而小鼠的运动能力并没有变化(F=1.67,P=0.33)。结论前额叶小清蛋白神经元发挥着抗抑郁样的效应,加深了对抑郁样行为的细胞机制的认识,有助于理解情感紊乱的病理学机制,并为功能性干预提供一个可能的新靶点。
- 耿飞陈远寿罗芸田丹卢癸凤
- 关键词：小清蛋白前额叶抑郁
- 甲型副伤寒特异性转移因子的制备和检定被引量：1
- 2010年
- 目的初步制备甲型副伤寒特异性转移因子(PA-STF),为临床提供紧急预防或辅助治疗甲型副伤寒的新型生物制剂。方法体内免疫法制备PA-STF,采用紫外分光光度计对PA-STF进行多波长扫描,以苔黑酚法和改良Lowry法分别检测PA-STF的核糖及多肽含量,并进行无菌试验、热原质试验和安全试验等,以免疫保护性试验检定其免疫学活性。结果 PA-STF的理化性状符合《中国生物制品》(2000版)的要求标准;免疫保护性试验中,灌服PA-STF的小鼠存活率均明显高于灌服nTF和NS的小鼠的存活率(P<0.05)。结论成功制备了PA-STF,该制剂可转移针对甲型副伤寒沙门菌的特异性免疫应答,增强小鼠抗甲型副伤寒沙门菌的免疫力。
- 周建伟罗军敏孙万邦马锐田丹
- 关键词：甲型副伤寒特异性转移因子检定
- 遵义地区汉族人群流行性出血热相关等位基因的分布
- 2011年
- 目的:从基因水平调查遵义地区汉族人群与流行性出血热(EHF)相关的人类白细胞抗原(HLA)-A*31、B*40、B*58、DRB1*16等位基因分布状况。方法:应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法对遵义汉族200名健康个体进行HLA-A、B、DR位点基因分型,筛选出HLA-A*31、B*40、B*58、DRB1*16阳性标本,进一步做高分辨基因亚型分型,进而对遵义汉族人群的这几组等位基因与其他不同人群的分布情况做比较。结果:遵义地区汉族HLA-A*31、B*58、DRB1*16基因各检出1种亚型,HLA-B*40共检出4种等位基因亚型,其中B*4001、B*4002、B*4006为常见亚型,B*4063为罕见基因亚型。遵义汉族人群所检出的等位基因频率大部分与我国其他地区的相接近,而与日本人比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:本研究获得了遵义汉族人群与EHF相关的HLA等位基因分布特征,为HLA与疾病相关性及本地区群体遗传学等方面的研究提供了重要依据。
- 秦娜琳田丹兰惠琴孙万邦张忆雄罗军敏
- 关键词：流行性出血热HLA抗原基因频率多态现象
- 基于RGSE模式的本科免疫学实践教学改革的初探被引量：1
- 2013年
- 教育部在＂十一五＂教育规划纲要中明确提出,高等医学教学的主要目的是培养基础理论扎实、实践操作熟练和创新意识突出的复合型人才。这需要相关教学理论、教学模式和内容的不断改革和创新,以适应当前社会对医学人才的需求[1]。
- 徐林罗军敏秦娜琳田丹覃明陈富超郑静
- 关键词：实践教学改革免疫学本科高等医学教学
- miRNA-126真核表达载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用被引量：4
- 2013年
- 目的:构建miRNA-126的重组真核表达载体,研究其对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖和迁移的影响。方法:设计合成miRNA-126的正义和反义寡核苷酸,构建真核表达载体pcDNA6.2-miR-126,体外瞬时转染至4T1细胞,荧光显微镜下观测转染效率。Real-time PCR检测4T1细胞中miRNA-126的表达,MTT法和克隆形成实验检测4T1细胞的增殖和克隆形成能力,划痕法观察4T1细胞的体外迁移。结果:成功构建pcDNA6.2-miR-126真核表达载体,其可在4T1细胞中有效表达miR-126。与转染空质粒组(pcDNA6.2-Ctrl)相比,瞬时转染72 h后,pcDNA6.2-miR-126转染组4T1细胞的体外增殖能力受到明显抑制[(0.30±0.03)vs(0.51±0.04),P<0.05];瞬时转染48 h后,pcDNA6.2-miR-126组4T1细胞迁移能力也受到明显抑制[(8.17±2.30)vs(28.33±2.16)个,P<0.05]。结论:miRNA-126过表达可抑制乳腺癌4T1细胞的增殖及迁移。
- 廖珍媛秦娜琳李永菊陈超田丹罗军敏徐林
- 关键词：MIR-126真核表达乳腺癌增殖迁移
