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HIV-1DNA疫苗发酵及纯化工艺研究: DNA疫苗既可以诱导细胞免疫反应又可以诱导体液免疫反应还能够诱导长期的免疫记忆，被誉为第三代疫苗。大规模制备临床级质粒DNA的工艺逐渐受到关注。本课题组前期研究中已经构建完成了针对中国主要流...; 王贻杰; 文献传递

共表达不同水平的IL-12对于HBV DNA疫苗质粒免疫原性的影响被引量：1: 2010年; 目的在HBsAg DNA疫苗质粒中共表达IL-12佐剂分子,研究IL-12的表达水平对于HBV DNA疫苗质粒免疫原性的影响.方法构建携带来源于中国地区C型HBV参照序列CHN-HBV07-C经密码子优化的preS2-S基因的DNA疫苗质粒pHBV,并将3个不同IL-12表达水平的佐剂分子表达盒序列分别克隆入该疫苗质粒中,通过瞬时转染293T细胞以检测重组质粒IL-12分子及乙肝表面抗原的表达情况.将不同IL-12表达水平的疫苗质粒免疫BALB/c雌性小鼠,IFN-γ的ELISPOT方法检测HBsAg抗原特异性的细胞免疫应答,化学发光定量ELISA法检测HBsAg特异的抗体水平.结果成功构建3个不同IL-12表达水平的HBV DNA疫苗质粒,293T细胞转染结果显示：不携带IL-12分子表达盒的对照疫苗质粒pHBV的HBsAg表达水平可达70 ng/ml;低表达IL-12的疫苗质粒pHBV-12l的HBsAg表达水平为18 ng/ml;而高表达IL-12的重组疫苗质粒pHBV-12h的HBsAg表达水平仅为6 ng/ml.BALB/c小鼠的免疫结果表明：高表达IL-12分子的疫苗质粒pHBV-12h所诱导的细胞免疫及体液免疫水平相对于对照疫苗质粒pHBV均显著降低了.低表达IL-12分子的疫苗质粒pHBV-12l所诱导的抗体水平也显著降低了,但其细胞免疫应答水平却显著提高了.结论在同一疫苗质粒中,高表达IL-12分子的质粒可能会影响到抗原蛋白的表达,而低表达IL-12分子的疫苗质粒却能增强细胞免疫应答.因此,平衡好佐剂分子及抗原蛋白的表达水平对于诱导高水平的免疫应答是个重要的因素.; 李鼎锋王贻杰王欢王维龙吉春史洪娜刘新颖沈林刘勇; 关键词：IL-12 乙型肝炎病毒免疫原性

季铵盐Gemini表面活性剂杀菌活性及其与分子结构的关联被引量：50: 2003年; The bactericidal activities of two series of quaternary Gemini surfactants have been examined by the suspension quantitative germicidal tests against Escherchia, Staphylococcus aureus and Candida alibicans respectively, the dodecyltrimethylammonium bromide(C 12TABr) was used for comparison. All of the quaternary Gemini surfactants showed superior bactericidal activities to C 12TABr due to higher densities in both headgroup charge and alkyl chains.; 赵剑曦毛宁游毅王贻杰; 关键词：杀菌作用大肠杆菌金黄色葡萄球菌白色念珠菌

HIV-1 CN54 Gag P55和P24蛋白的高效表达、纯化和鉴定被引量：7: 2004年; 目的　探讨HIV 1中国株CN5 4GagP5 5和P2 4重组蛋白的高效表达并纯化 ,为研究HIV疫苗和诊断试剂创造条件。方法　分别将CN5 4GagP5 5和P2 4基因克隆至 pBV2 2 0和 pThioHisC载体 ,构建非融合表达载体 ;将重组质粒转化大肠杆菌BL2 1codonplus RIL ,对工程菌进行诱导表达。Western Blot检测目的蛋白 ,用DEAE SeparoseFF阴离子交换层析柱纯化目的蛋白 ;纯化的P5 5和P2 4抗原蛋白分别包被酶标板作ELISA检测。结果　P5 5以包涵体的形式表达 ,表达量占菌体总蛋白的 30 % ,P2 4实现了可溶性表达 ,表达量占总菌体总蛋白的4 0 % ;纯化后P5 5纯度达到 80 % ,P2 4纯度超过 90 %。Western Blot和ELISA检测均显示了良好的的灵敏度和特异性。结论　HIV 1CN5 4GagP5 5和P2 4抗原蛋白可在大肠杆菌中高效表达 ,纯化的抗原蛋白具有良好抗原性。; 王道毅刘勇郝彦玲马民强傅晶晶李海山王贻杰陈静娴邵一鸣

Real-time PCR检测核酸疫苗中宿主基因组残留DNA被引量：8: 2007年; 目的建立Real-time PCR方法,用于定量检测核酸疫苗中宿主基因组的残留DNA。方法以Lightcycler平台为基础,选择大肠杆菌23S核糖体RNA基因为靶标基因设计扩增引物,建立基于SYBR GreenⅠ荧光染料的Real-time PCR检测方法,并用于核酸疫苗纯化过程中间产物的检测。结果整个检测过程可在30min内完成,特异性强,检测灵敏度可达10fg/μl,其标准曲线的相关系数为-0.99。结论该方法可用于核酸疫苗中宿主基因组残留DNA的检测。; 李亮助刘勇王贻杰程海孙茂盛邵一鸣; 关键词：REAL-TIME PCR 核酸疫苗

HIV-1中国株CN54 Gag蛋白在毕赤酵母中的表达纯化和鉴定被引量：1: 2005年; 目的　利用毕赤酵母表达系统高效表达HIV 1中国株CN5 4的Gag蛋白,初步确立发酵和纯化工艺。方法　PCR扩增CN5 4Gag基因,插入毕赤酵母表达载体pPS1 0 ,电转化毕赤酵母菌株GS115 ,G4 18筛选高表达工程菌,利用5L发酵罐进行高密发酵,通过SPSepharoseFF和DEAESeparoseFF柱层析,用HIV 1阳性血清和p2 4抗原检测试剂盒对纯化后的Gag蛋白进行免疫学性质的鉴定。结果　构建了高效表达CN5 4Gag蛋白的毕赤酵母工程菌株,发酵罐培养的菌体密度吸光度(A6 0 0 值)超过30 0 ,Gag蛋白表达量达到12 0mg L。纯化后的Gag蛋白纯度高于90 % ,p2 4检测强阳性并能够与HIV 1阳性血清发生特异的抗原抗体结合反应。结论　本研究在毕赤酵母中高效表达了HIV 1中国株CN5 4的Gag蛋白,并进行了纯化和鉴定,为针对我国新一代HIV蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础。; 郝彦玲马民强傅晶晶李海山王贻杰刘颖吴岚刘勇邵一鸣; 关键词：GAG蛋白 HIV-1 中国株 SEPHAROSE GAG基因免疫学性质

两种系列新型季铵盐Gemini表面活性剂的杀菌活性被引量：6: 2004年; 考察系列季铵盐Gemini表面活性剂C12-S2En-C12·2Br(n=1,3)和C12-S(?)-C12·2Br(s=2,3,4,6)对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的悬液定量杀菌效果,并与十二烷基三甲基溴化铵(C12TABr)的效果比较.结果表明,C12-S2En-C12·2Br和C12-S(?)-C12·2Br具有比C12TABr优良得多的杀灭大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的能力.作用10 min后,对这3种菌均达到杀灭99.9％以上的效果.; 王贻杰毛宁赵剑曦; 关键词：金黄色葡萄球菌白色念珠菌杀菌效果

提高内毒素去除效果的质粒DNA层析纯化工艺的优化被引量：4: 2009年; 目的优化质粒DNA分子筛或离子交换层析工艺,提高内毒素去除效果。方法在经精胺沉淀初步纯化的质粒DNA溶液中,加入不同浓度的EDTA(5、10和20mmol/L)或SDS(0.1%、0.2%和0.5%),分别进行Sephacryl S-1000分子筛层析及Source30Q离子交换层析,收集质粒峰,测定内毒素含量。结果用含0.5%SDS的质粒溶液进行分子筛层析,用含10～20mmol/L EDTA或0.1%～0.5%SDS的质粒溶液进行离子交换层析,质粒DNA的内毒素含量均<5EU/mg。结论添加一定浓度的EDTA或SDS可提高质粒DNA分子筛层析或离子交换层析去除内毒素的效果。综合考虑安全性因素,推荐用含10mmol/L EDTA的质粒溶液进行Source30Q离子交换层析。; 王贻杰刘勇程海范文玲韩建霍烛郝彦玲邵一鸣; 关键词：质粒DNA 内毒素层析 EDTA SDS

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