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C群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物制备方法的比较被引量：4: 2015年; 目的对C群脑膜炎球菌多糖(group C meningococcal polysaccharide,GCMP)蛋白结合物的5种制备方法进行比较。方法以GCMP作为多糖抗原,破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)和重组绿脓杆菌外毒素A(recombinant exoprotein A from Pseudomonas aeruginosa,r EPA)作为载体蛋白,采用5种结合路线制备7种结合物,并对其生化指标、免疫原性及磷酸铝佐剂的免疫增强效果进行检测。结果不同的结合方法均可将不同载体蛋白与多糖有效结合,在小鼠体内均具有良好的免疫原性。7种结合物的分子大小分布、游离多糖含量、多糖/蛋白值、回收率及免疫原性等指标有较大差异;采用相同结合方法,以TT和r EPA作为载体蛋白制备的结合物的生化指标及免疫原性无差异;磷酸铝佐剂可显著提高结合物的免疫原性。结论在选择GCMP蛋白结合物制备方法时应综合考虑原料多糖的化学结构、载体蛋白类型、结合路线、结合物纯化方法、质量控制方法和剂型等因素。本实验为GCMP蛋白结合物制备路线的选择提供了实验依据。; 于旭博孔素娟袁菲王晶罗树权王欣茹李阿妮方红春赵志强谢贵林; 关键词：破伤风类毒素免疫原性

离子色谱在多糖疫苗及多糖蛋白结合疫苗质量控制中的应用被引量：5: 2012年; 离子色谱具有方便、快速、灵敏度高、选择性好、重现性好、准确度高、可同时分析多种离子化合物等优点,其中的高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法(HPAEC-PAD)可直接分析糖类物质,可应用于多糖疫苗及多糖蛋白结合疫苗中多糖的分析。近年来,离子色谱应用在多糖及多糖蛋白结合疫苗的质量控制中,如测定疫苗中的多糖、游离糖、杂质多糖、对人有免疫原性的功能基团等的研究有许多报道,对有关内容进行了综述。; 慕艳红王晶赵志强朱莉萍; 关键词：离子色谱 HPAEC-PAD 多糖疫苗多糖蛋白结合疫苗

A群奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合物的制备及其工艺稳定性研究: 目的:按初步确定的工艺,制备多批A群奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖(GAMP)与破伤风类毒素(TT)的结合物并检测其免疫原性,通过监测关键工艺参数,对该工艺的稳定性进行研究。方法:采用溴化氰(CNBr)活化多糖,以无水己二酸二...; 刘方蕾吴兵王晶袁菲赵志强杨明谢贵林; 关键词：A群脑膜炎球菌结合疫苗荚膜多糖; 文献传递

测定唾液酸含量的改良间苯二酚-盐酸法的建立及验证被引量：6: 2016年; 目的建立测定脑膜炎球菌多糖、多糖衍生物及结合物中唾液酸含量的改良间苯二酚-盐酸法,并进行验证。方法以《中国药典》三部（2015版）测定多糖中唾液酸含量的间苯二酚-盐酸法为基础进行改良,去除有机相萃取步骤,优化方法中的检测波长（300~900 nm）及煮沸时间（10、15、20、25、30、35和40 min）;并对建立方法的线性范围、中间精密度及准确度进行验证。比较改良法与《中国药典》法对样品唾液酸含量及其层析分部产物中唾液酸含量测定结果的差异,同时检测乳糖对改良法测定唾液酸含量的影响。结果方法中最佳检测波长为569 nm,最佳煮沸时间为30 min。唾液酸对照品浓度在5~40μg/ml范围内与569 nm吸收值呈良好的线性关系,R2均〉0.999;3位实验人员在3个不同时间对样品中唾液酸含量测定9次结果的CV均〈3%;外加5、10、20μg/ml浓度的N-乙酰神经氨酸的回收率均在95%~105%之间。改良法与《中国药典》法检测的样品唾液酸含量差异无统计学意义（P〉0.05）,且两种方法的层析分部图谱一致。乳糖溶液浓度超过100μg/ml时对唾液酸测定结果的干扰较大。结论本实验建立的改良唾液酸测定法具有良好的线性、精密度和准确度,可用于脑膜炎球菌多糖、多糖衍生物和结合物唾液酸含量的测定。; 袁菲于旭博孔素娟王晶王欣茹吴兵刘方蕾谢贵林; 关键词：唾液酸含量

肾综合征出血热乳鼠脑纯化疫苗(I型)糖蛋白及核蛋白在免疫保护中的作用: 1999年; 为了阐明肾综合征出血热纯化疫苗（Ｉ型）中糖蛋白（ＧＰ）、核蛋白（ＮＰ）在免疫保护中的作用，采用脾细胞转输法，分别将ＧＰ、ＮＰ、ＧＰ＋ＮＰ免疫小鼠后的脾细胞与未经免疫的小鼠正常脾细胞（３．５×１０５个）经腹腔转输给乳鼠，２ｈ后以１００ＬＤ５０的汉滩（ＨＴＮ）病毒（ＬＲ１株）进行脑腔攻击。结果表明，其乳鼠的保护率分别达７７．０％，３８．５％和９２．３％，而未经免疫的小鼠正常脾细胞则不能提供保护（０％），揭示了ＧＰ＋ＮＰ在抗ＨＴＮ病毒感染中具有免疫协同作用。; 王伟吴宏荣李娟王晶孙小慧王维新; 关键词：肾综合征出血热纯化疫苗糖蛋白免疫保护

A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合物的制备及其工艺稳定性被引量：3: 2010年; 目的按初步确定的工艺,制备A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖(Group A Neisseria meningococcus capsular polysac charide,GAMP)与破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)的结合物,通过监测关键工艺参数,分析该工艺的稳定性。方法制备8批GAMP-TT结合物,经Sepharose4FF柱层析纯化后,进行各项生化鉴定,采用双向免疫扩散试验检测其抗原性,以结合物皮下免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清中抗GAMP及抗TT IgG抗体水平。结果制备的8批结合物工艺关键参数较稳定,均保持GAMP抗原特异性;免疫小鼠后,均可诱生较高水平的血清抗GAMP IgG抗体,并可诱生免疫加强应答。结论该制备工艺稳定,为GAMP-TT结合疫苗的研制提供了参考。; 刘方蕾吴兵王晶袁菲赵志强杨明谢贵林; 关键词：A群脑膜炎球菌荚膜多糖破伤风类毒素结合疫苗

C群脑膜炎球菌家兔免疫血清的制备及其群特异性和相关方法专属性分析被引量：4: 2014年; 目的制备C群脑膜炎球菌家兔免疫血清,并进行群特异性和相关方法专属性分析。方法用制备的C群脑膜炎球菌菌液免疫青紫兰家兔,经耳缘静脉注射8×109个/ml菌液,0.5~1.0 ml/只,每周1、3、5免疫,共免疫4周,于第6周开始加强免疫,每周2次,连续3周,于末次免疫1周后,经颈动脉采血,分离血清,采用免疫双扩散法检测血清效价。采用ELISA、Western blot及火箭免疫电泳法分析其群特异性和相应方法专属性。结果建立了家兔免疫血清制备方法,制备的3份（1、2、3）免疫血清相应多糖抗体效价分别为1︰8、1︰8和1︰16。自制免疫血清1、3在使用工作浓度下,符合免疫学质量控制ELISA方法的特异性和专属性要求。自制免疫血清3可作为C群脑膜炎球菌结合物Western blot检测的Anti-PS血清,在该检测灵敏度下可完全达到与破伤风类毒素（TT）无交叉反应;血清1、2的轻微交叉反应可通过相应抗原预吸收血清消除,从而达到结合物Western blot检测的Anti-PS使用要求。自制3份免疫血清均可用于火箭免疫电泳分析。结论自制的家兔免疫血清可替代商品诊断血清,并达到了ELISA、Western blot及火箭免疫电泳法群特异性和相应方法专属性要求,可用于对C群脑膜炎球菌结合物制备过程的多糖抗原性分析及结合疫苗质量控制。; 刘方蕾吴兵侯亚莉杨英英王晶于旭博范锋锋孔素娟袁菲赵志强谢贵林; 关键词：脑膜炎球菌免疫血清特异性专属性

离子色谱法测定ACYW135群脑膜炎球菌结合物中Y群及W135群多糖含量: 2016年; 目的：利用离子色谱法即高效阴离子交换柱层析—脉冲安培检测法（ HPAEC-PAD）,测定ACYW135脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群多糖含量的方法,并加以验证。方法将ACYW135脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群多糖用三氟乙酸（ TFA）水解为特异性单糖（葡萄糖、半乳糖）,并去除水解液中残留的TFA,用HPAEC-PAD分析检测,用PA10糖分析柱分离单糖,电化学检测器测定葡萄糖及半乳糖含量,用Chrome-leon色谱工作站记录并分析数据。对上述方法进行专属性、准确性、重复性验证,确定该方法的检出限和定量限。结果 Y群和W135群多糖在TFA2.5 mol/L（终浓度）、90℃、4 h可完全水解为葡萄糖、半乳糖。对照品葡萄糖及半乳糖在0.10-60.00μg/mL 范围内,质量浓度和色谱峰面积呈较好的线性关系, r 均大于0.99,回收率为87.94%-109.80%,相对标准偏差（RSD）为1.00%-2.00%,检出限为0.05μg/mL（信噪比3∶1）,定量限为0.10μg /mL（信噪比10∶1）。结论离子色谱法可同时检测脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群糖含量,该方法操作简便、灵敏、快速,干扰小,重现性好,适用于对相关疫苗生产过程中的质量控制。; 王晶于旭博赵阳孔素娟刘爱萍袁菲吴兵谭小梅谢贵林; 关键词：多糖含量

间苯二酚显色法测定唾液酸含量的影响因素被引量：2: 2016年; 目的探讨间苯二酚显色法测定唾液酸含量的影响因素,保证试验结果的一致性和准确性。方法按照《中国药典》2015版(三部)规定的唾液酸含量测定方法,分析单糖和二糖、载体蛋白质、不同溶液及化学试剂对该方法测定结果的影响;比较加热时间、加入有机相后的放置时间对检测结果的影响。结果选用的不同单糖和二糖中,蔗糖对试验的影响最大,低中高浓度时吸光值分别为0.065、0.196、0.420;其次是核糖,3种浓度的吸光值分别为0.037、0.113、0.187;高浓度的半乳糖、葡萄糖和乳糖的吸光值在0.02左右,对试验结果有一定影响,低浓度时对试验的影响可以忽略不计。N-乙酰甘露糖胺在低中高浓度时对结果均无影响。破伤风类毒素、重组绿脓杆菌外毒素A、小牛血清白蛋白、白喉类毒素对检测结果无影响,在500μg/m L质量浓度时吸光值均在0.008以下。选用的不同溶液对试验均无影响。选用的化学试剂中乙醇、低浓度的碳二亚胺以及己二酰肼对试验结果均无干扰,丙酮和脱氧胆酸钠均会对试验造成较大影响。反应液的吸光值随着加热时间的延长而增加,吸光值随着放置时间的延长而降低;第一小时内吸光值下降9%左右。结论在质控过程中,这些外源物质及操作过程对唾液酸含量测定结果有一定影响,应严格按照质量控制标准执行操作。; 孔素娟于旭博袁菲王晶刘爱萍李阿妮吴兵谢贵林; 关键词：唾液酸分光光度法影响因素

人肺炎球菌参考血清09CS中11个血清型抗荚膜多糖的抗体IgG含量的定值被引量：3: 2014年; 对人肺炎球菌参考血清09CS中11个肺炎球菌血清型(2、8、9N、10A、11A、12F、15B、17F、20、22F、33F)的抗荚膜多糖抗体IgG含量进行定值。方法用WHO推荐的标准检测人血清中抗肺炎球菌荚膜多糖抗体IgG定量ELISA方法,以国际标准血清89SF为标准,对此11个血清型抗荚膜多糖抗体IgG含量进行定值;以暂定的09CS的定值为标准检测12份WHO校正血清、16份兰州生物制品研究所有限责任公司(LIBP)质控血清和89SF,对定值的准确性进一步验证。结果以09CS的定值为标准检测的12份WHO校正血清和16份LIBP质控血清的11个血清型抗荚膜多糖抗体结果,与以89SF为标准检测的结果,均具有良好的直线相关关系(r≈1.00,P<0.05);以09CS的定值为标准检测的89SF的11个血清型抗荚膜多糖抗体的新值与其原定值比较,各血清型的误差均<20%。结论实验完成了人肺炎球菌参考血清09CS中的11个血清型抗荚膜多糖抗体IgG含量的准确定值。; 王欣茹刘方蕾于旭博范锋锋刘爱萍吴兵胡浩王晶赵志强谢贵林; 关键词：定值酶联免疫吸附试验

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王晶

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