王文举
- 作品数：15 被引量：50H指数：4
- 供职机构：中国科学院昆明动物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金云南省应用基础研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- NF-κB与持久炎症及肿瘤发生关系被引量：17
- 2007年
- NF-κB是一种序列特异性转录因子。早先的研究证明其主要功能是参与炎症反应和天然免疫应答。最近的研究发现,某一部位的持久炎症反应将导致NF-κB信号通路组成性持续激活,导致NF-κB靶基因的异常表达,这些基因的异常表达往往与肿瘤的发生、转移、组织浸润以及肿瘤细胞的抗凋亡作用相关。因此,将NF-κB作为靶向分子,抑制其活性已成为肿瘤防治的研究热点和新的思路。
- 王文举李鸿钧孙茂盛
- 关键词：NF-ΚB炎症反应肿瘤发生
- 切除GST标签的重组蛋氨酸酶及多抗制备被引量：1
- 2013年
- 目的优化表达条件后纯化出切除GST标签的Met-PGEX-4T-1蛋白,制备出假单胞菌来源的多克隆抗体.方法将蛋氨酸酶(L-methionine gamma-lyase,Me)t的基因克隆至pBSK载体中,形成重组质粒pBSK-Met,采用基因工程技术将pBSK-Met与PGEX-4T-1载体连接,形成Met-PGEX.利用大肠杆菌表达系统诱导表达出Met-PGEX,采用亲和层析法过柱纯化Met-PGEX,凝血酶切除分子量为26KD的GST标签,免疫新西兰兔制备出蛋氨酸酶多克隆抗体Met PcAb,双向免疫扩散实验测多克隆抗体效价为1:128,间接Elisa法测效价1:1×105.结果成功表达纯化出纯度大于90%的Met-PGEX并制备出多克隆抗体.结论所制备的多克隆抗体可用于检测不同来源重组蛋氨酸酶抗原差异性变化.
- 张芳任晓丽罗得华罗沈强王文举张华堂田长富
- 表达神经营养因子和酪氨酸羟化酶双顺反子重组腺病毒的构建方法
- 表达神经营养因子和酪氨酸羟化酶双顺反子重组腺病毒的构建方法，属于基因工程。步骤有：将NTN和TH基因分别插入双顺反子表达质粒pcDNA3.0BA多克隆位点，用筛选出的模板和引物PCR扩增得到双顺反子表达盒，插入腺病毒穿梭...
- 李鸿钧孙茂盛王文举严敏周艳
- 文献传递
- 人鼻病毒3C蛋白酶基因的克隆、表达、纯化及活性被引量：5
- 2007年
- 目的获得重组3C蛋白酶,开发一种新型的基因工程工具酶。方法通过RT-PCR方法获得人鼻病毒3C蛋白酶基因,克隆入表达载体pBV220,构建非融合表达载体pBV220-3C,转化大肠杆菌BL21(Gold)进行表达。表达产物经变性阳离子交换层析纯化后复性,再经Superdex-75凝胶过滤进一步纯化,获得的3C蛋白酶在4℃条件下,酶切融合蛋白IL-11,进行活性测定。结果3C蛋白酶在大肠杆菌中获得了稳定、高效表达,表达量约占菌体总蛋白的25%,以包涵体形式存在。经过纯化、复性,纯度达90%以上,获得的3C蛋白酶能够有效切割含3C酶切位点的融合蛋白。结论已成功开发了一种新型的基因工程工具酶。
- 李鸿钧王文举施锐张光明李敏马雁冰孙茂盛
- 关键词：蛋白酶工具酶基因工程
- 凋亡素蛋白多克隆抗体的制备及免疫学评价被引量：1
- 2011年
- 凋亡素由鸡贫血病毒中的VP3基因编码,能诱导多种肿瘤细胞发生凋亡。以真核表达载体pcDNA3.0-VP3为模板构建原核表达载体pET8a-VP3,经NdeⅠ/BamHⅠ双酶切鉴定和基因测序无误后,在IPGT诱导下表达VP3蛋白并对其进行纯化,将纯化后的VP3蛋白与弗氏完全佐剂或不完全佐剂乳化后,分别对两只新西兰大耳白兔进行皮下多点注射,间接ELISA检测免疫后血清效价,效价达到指标后第2天以心脏穿刺的方法采全血后分离抗血清。抗血清效价高的兔子进一步采用Protein A纯化总IgG,最终纯化后的抗体效价可以达到1∶243 000。用重组腺相关病毒rAAV-VP3感染细胞后对抗体的特异性进行免疫学评价。首先利用免疫荧光技术检测VP3基因在人膀胱癌细胞株T24、EJ细胞以及Vero细胞中的表达情况,观察到凋亡素在T24、EJ细胞中主要定位于细胞核,而在Vero细胞中则定位于细胞质。其次通过Western blotting检测纯化后的抗体能与细胞内腺相关病毒介导表达的凋亡素蛋白特异性结合。实验证明了制备的凋亡素蛋白多克隆抗体的有效性和特异性,为进一步阐明凋亡素抗肿瘤效应的分子机制及生物学特性奠定了基础。
- 王春晖王剑松王文举詹辉李鸿钧颜汝平徐鸿毅
- 关键词：VP3蛋白多克隆抗体膀胱肿瘤腺相关病毒
- Neurturin和TH双顺反子重组腺病毒的构建及对恒河猴帕金森氏病模型的组合基因治疗评价
- 帕金森氏病(Parkinson's Diseases,PD)是一种以中脑黑质多巴胺能神经元变性坏死,多巴胺合成减少为特征的神经系统退行性疾病。主要临床表现:静止性震颤、运动迟缓、肌强直、姿势步态异常,最后患者多死于由肺部...
- 王文举
- 关键词：帕金森氏病多巴胺能神经元
- 表达神经营养因子和酪氨酸羟化酶双顺反子重组腺病毒的构建方法
- 表达神经营养因子和酪氨酸羟化酶双顺反子重组腺病毒的构建方法，属于基因工程。步骤有：将NTN和TH基因分别插入双顺反子表达质粒pcDNA3.0BA多克隆位点，用筛选出的模板和引物PCR扩增得到双顺反子表达盒，插入腺病毒穿梭...
- 李鸿钧孙茂盛王文举严敏周艳
- 凋亡素重组腺相关病毒的构建及体外抑制膀胱癌效应
- 2012年
- 目的探讨携带凋亡素基因的重组腺相关病毒构建方法，观察其体外抑制膀胱癌的效应。方法构建重组质粒pAAV-VP3，经EcoRI/SalI双酶切鉴定和基因测序无误后，采用三质粒共转染法包装重组腺相关病毒rAAV—VP3。收获病毒后聚合酶链反应（PCR）扩增病毒液中的目的基因鉴定重组病毒，对其进行纯化后透射电镜观察病毒颗粒，并检测病毒滴度。按每个细胞5×10^5个载体基因组的剂量感染EJ细胞后，逆转录（RT）-PCR检测VP3基因在EJ细胞中的转录，Westernblot法检测凋亡素蛋白的表达。透射电镜扫描观察感染重组病毒后肿瘤细胞的超微结构变化，流式细胞术（FCM）检测重组病毒对EJ细胞的影响。结果转染72h后重组腺相关病毒rAAV-VP3包装成功，滴度为5．1×10^11个载体基因组／ml，电镜下可见病毒颗粒。感染EJ细胞后，可检测到VP3基因的转录和凋亡素蛋白表达，电镜观察到凋亡形态学改变，FCM检测S期细胞比例降低和G2／M期细胞比例增高，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论重组腺相关病毒rAAV—VP3在体外能够发挥生物学活性，其介导的凋亡素表达抑制膀胱癌的体外效应为体内实验奠定了基础。
- 王春晖王剑松王文举余力锐詹辉徐鸿毅
- 关键词：VP3蛋白膀胱肿瘤
- 肠道病毒71型P1和3CD基因双顺反子重组腺病毒的构建及表达被引量：6
- 2010年
- 目的构建肠道病毒71型(EV71)P1和3CD基因双顺反子重组腺病毒,并检测3CD蛋白酶的切割作用和表达产物的抗原性。方法采用RT-PCR法从阜阳分离的EV71中扩增P1和3CD基因,构建穿梭质粒pShuttle-CMV-P1-3CD、pShuttle-CMV-P1和pShuttle-CMV-3CD;经同源重组获得重组腺病毒rAd-P1-3CD、rAd-P1和rAd-3CD,分别转染293细胞,RT-PCR法检测目的基因的转录,免疫荧光法检测目的蛋白的表达。结果3种重组腺病毒经PCR和酶切鉴定表明构建正确;RT-PCR检测表明,3个重组腺病毒均已转录目的基因mRNA;免疫荧光检测仅观察到rAd-P1-3CD表达产物具有特异性,而rAd-P1、rAd-3CD未能检测到特异性表达产物。结论已成功构建EV71P1和3CD基因双顺反子重组腺病毒,表达产物具有EV71特异抗原性,提示P1产物只有在被3CD蛋白酶切割后才体现抗原性。
- 戈小琴李鸿钧王文举谢天宏张光明孙茂盛
- 关键词：肠道病毒71型P1基因双顺反子重组腺病毒
- Neurturin嵌合神经营养因子重组腺病毒的构建及体外活性测定被引量：2
- 2010年
- Neurturin是神经营养因子家族成员,研究发现体外表达的重组Neurturin能够促进多巴胺能神经元的存活,对帕金森氏病的基因治疗有重要意义。但有研究指出野生型Neurturin在细胞中不能完成加工进而不能被分泌到胞外。因此实验对野生型Neurturin进行改造,将NGF的信号肽与Neurturin的成熟肽进行拼接,形成一种嵌合的NGF/NTN基因,并将该基因插入重组腺病毒基因组中,在AD-293细胞中包装获得重组腺病毒。通过免疫荧光和Westernblotting证实Neurturin能够在胞内表达,并且能够对其进行加工最后分泌至胞外。最后通过鸡胚背根神经节培养实验证明该嵌合基因能够表达具有明显活性的Neurturin。
- 王文举孙茂盛严敏李鸿钧
- 关键词：NEURTURIN嵌合基因重组腺病毒体外活性帕金森氏病
