王坤
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 供职机构：北京大学第三医院更多>>
- 发文基金：面向21世纪教育振兴行动计划国家教育部“985工程”更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 转人CD59基因的猪胚胎成纤维细胞的建立
- 2005年
- 王坤庄国华曾斌林爱星张同琳周孝思
- 关键词：CD59超急性排斥反应补体活化体细胞克隆调控蛋白
- 猪胚胎成纤维细胞αGal表达的鉴定
- 2005年
- 目的确定猪胚胎成纤维细胞是否合成α1,3半乳糖苷,为下一步进行基因工程改造的结果提供鉴定方法。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western免疫印迹法分别在转录和翻译水平确定猪胚胎成纤维细胞是否合成α1,3半乳糖苷。结果通过RT-PCR扩增,发现α1,3半乳糖苷转移酶基因在原代和传代培养的猪胚胎成纤维细胞内转录,Western免疫印迹证实,在原代和传代培养的猪胚胎成纤维细胞能合成含有α1,3半乳糖苷残基的糖蛋白。结论猪胚胎成纤维细胞可合成α1,3半乳糖苷;可采用PCR扩增和Western免疫印迹方法对经过基因工程改造的猪胚胎成纤维细胞是否表达α1,3半乳糖苷转移酶进行鉴定。
- 王坤庄国华张同琳林爱星周孝思
- 关键词：胚胎成纤维细胞猪胚胎逆转录聚合酶链反应RT-PCR扩增GAL
- 大剂量免疫抑制剂预处理后骨髓移植诱导小鼠皮肤移植耐受的实验研究被引量：3
- 2004年
- 目的 用大剂量免疫抑制剂作为骨髓移植前受者的预处理 ,诱导其对供者特异性器官移植免疫耐受 ,并探讨宏嵌合的形成与移植耐受的关系。方法 雄性C5 7BL/ 6和雌性BALB/c小鼠作为皮肤移植的供者和受者。实验分为 1 1组 :第 1组为对照组 ,仅作皮肤移植 ,不做其他处理 ;第 2组为单纯供者骨髓细胞移植 (BMT)后进行皮肤移植 ;第 3～ 5组 :分别使用免疫抑制剂他克莫司(FK5 0 6 )、环孢素A(CsA)、环磷酰胺 (CTX)后进行皮肤移植 ;第 6～ 8组 :分别应用FK5 0 6、CsA、CTX预处理后作骨髓移植 ,再进行皮肤移植。前 8组皮肤及骨髓供者均为雄性C5 7BL/ 6小鼠。第 9～ 1 1组 :处理同第 6～ 8组 ,但移植皮肤来自无关供者雄性ICR小鼠 ,以验证耐受的特异性。每组受鼠 6只。观察皮肤移植存活时间、皮肤的排斥反应 ,并用多聚酶链式反应 (PCR)检测嵌合体的形成。结果 单独应用常规剂量的供者骨髓细胞输注或短期的免疫抑制治疗并不能延长移植物的存活 ,也没有宏嵌合形成。而 6～ 8组的皮肤移植物存活时间较各对照组明显延长 ;宏嵌合检查呈阳性。来自无关供者的皮片存活时间无延长。结论 采用短期应用大剂量免疫抑制剂这一温和的非照射预处理方法 ,再输注供者骨髓细胞 ,可获得一定程度的免疫耐受 ,达到延长皮肤移植物存活的?
- 马朝来张同琳雷玉涛罗刚王坤孙和新
- 关键词：供者免疫抑制剂耐受大剂量骨髓移植
- FK506预处理下骨髓移植诱导同种异体小鼠皮肤移植耐受的实验研究被引量：10
- 2004年
- 目的探讨短期大剂量FK506作为宏嵌合诱导供体特异性耐受中,骨髓移植前对受体预处理方法的可行性及临床实用性。方法100只雄性C57BL/6和60只雌性BALB/C小鼠分别作为皮肤移植的供体和受体,雄性ICR小鼠15只作为无关第三品系用以检测移植耐受状态的特异性。将60只受体小鼠随机分为5组,即无处理对照组、单纯FK506组、单纯骨髓细胞移植(BMT)组、实验组(FK506+BMT)和无关供体对照组,每组12只。FK506诱导及维持方案是皮肤移植前对受体小鼠先给予大剂量FK506腹腔注射(3mg/kg×2d),移植当天尾静脉输注2×107个骨髓细胞,再以小剂量FK506(05mg/kg×7d)短期维持治疗。观察皮肤移植存活时间、对第三方皮肤的排斥反应及对供体鼠的单向混合淋巴细胞反应,并用多聚酶链式反应(PCR)检测嵌合体的形成。结果常规剂量的骨髓输注或短期FK506治疗并不能延长移植物的存活时间,也没有宏嵌合形成。实验组皮肤移植物存活时间(240±15)d比无处理对照组(96±11)d、单纯FK506组(105±16)d、单纯骨髓细胞移植组(103±15)d、无关供体对照组(98±11)d明显延长(P<005)。混合淋巴细胞反应实验组供者特异性抑制率8055%±1410%明显高于单纯FK506组3865%±1243%及单纯骨髓细胞移植组3541%±899%(P<005),实验组宏嵌合呈阳性。
- 马朝来张同琳王坤孙和新
- 关键词：皮肤移植免疫耐受骨髓移植FK506
