王冬
- 作品数：34 被引量：73H指数：7
- 供职机构：中国科学院天津工业生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程医药卫生生物学更多>>
- 齐墩果酸酵母细胞工厂的合成途径与发酵工艺优化被引量：5
- 2014年
- 目的:通过遗传改造和发酵工艺优化等方法进一步提高齐墩果酸酿酒酵母细胞工厂的生产能力。方法:利用多片段基因同源重组法,增加齐墩果酸酿酒酵母工程菌BY-OA中甘草β-香树脂合酶(GgbAS),蒺藜苜蓿齐墩果酸合成酶(MtOAS)和拟南芥烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-细胞色素P450还原酶1(AtCPR1)等基因的拷贝数;并通过优化YPD发酵液中初糖浓度的方式提高齐墩果酸的产量。结果:增加工程菌BY-OA中GgbAS,MtOAS和AtCPR1基因的拷贝数能显著提高工程菌中目标产物的产量,获得的工程菌BY-2OA在初始葡萄糖浓度为20 g·L-1的YPD培养基中发酵7 d后β-香树脂和齐墩果酸分别达到136.5 mg·L-1(提高54%)和92.5 mg·L-1(提高30%),当初糖浓度提高到40 g·L-1时,齐墩果酸产量能达到165.7 mg·L-1。结论:新获得的工程菌BY-2OA生产齐墩果酸的能力显著提高,为发酵法生产齐墩果酸奠定了基础。
- 王冬王贝贝刘怡施明雨肖冬光黄璐琦戴住波张学礼
- 关键词：三萜齐墩果酸酿酒酵母合成生物学
- 产人参皂苷元的重组酿酒酵母及其构建方法与应用
- 本发明公开了产人参皂苷元的重组酿酒酵母及其构建方法与应用。本发明所提供的一株能同时产齐墩果酸，原人参二醇和原人参三醇等三种人参皂苷元的重组酿酒酵母是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)GY-1，其...
- 张学礼戴住波王贝贝刘怡施明雨王冬
- 文献传递
- 葫芦二烯醇的异源高效合成研究被引量：7
- 2017年
- 葫芦二烯醇具有抑制炎症和抗癌活性,同时为罗汉果甜苷和葫芦素等重要中药有效成分生物合成途径中的基本前体。为获得高效生产葫芦二烯醇的酿酒酵母细胞工厂,该研究首先从罗汉果中克隆到葫芦二烯醇合酶(CBS)基因,通过在三萜化合物底盘菌WD-2091中异源表达和发酵后,产物经过GC-MS鉴定获得产量为27.44 mg·L^(-1)工程菌。再进一步调控工程菌中葫芦二烯醇合酶基因表达,最终成功获得葫芦二烯醇提高202.07%,产量为82.89 mg·L^(-1),高密度发酵达到1 724.10 mg·L^(-1)的酿酒酵母细胞工厂313-SL-CB。该研究为推动葫芦烷型四环三萜生物合成途径解析及高效细胞工厂创建提供了基础。
- 李守连王冬刘怡刘怡唐金磊花尔并花尔并张学礼戴住波
- 关键词：三萜合成生物学酿酒酵母
- 创建酿酒酵母细胞工厂发酵生产视黄醇
- 2024年
- 视黄醇是维生素A的主要活性形式之一,对于机体的生长发育、眼部和皮肤功能维持至关重要,被广泛应用于化妆品、医药和饲料添加领域。动物体内不具备完整的维生素A合成途径,但可通过膳食直接摄入或将膳食中获得的β-胡萝卜素转化获得。为了推进视黄醇的生物法合成研究,首先以β-胡萝卜素合成平台CAR*1为基础,筛选了3种不同来源的醇脱氢酶,确定了大肠杆菌来源的ybbO具有最高的催化活性,转化率可达95.6%。为了进一步提高反应速率和产量,采用蛋白质融合技术将视黄醇合成模块中2个相邻酶blh和ybbO进行融合后,在高产β-胡萝卜素工程菌株CAR*3中进行评估,获得了最优组合blh-GGGS-ybbO,其产量较融合前提高了44.9%,达到(111.1±3.5)mg·L^(-1)。进一步工作中,通过引入人源的视黄醇结合蛋白(RBP4)以及转甲状腺素蛋白(TTR),在酿酒酵母中模拟了人体肝脏细胞分泌视黄醇的过程,视黄醇产量增加至(158.0±13.1)mg·L^(-1)。最后,采用过表达INO2扩张β-胡萝卜素合成途径反应区室,提高血红蛋白VHb表达量以增强氧气的供给,强化PDR3m表达促进视黄醇的转运和开发2个阶段发酵工艺等方法,在5 L发酵罐中成功将视黄醇的产量提升至(2320.0±26.0)mg·L^(-1),为视黄醇产业化发展提供了重要基础。
- 李文豪杨婷婷李蕊马晓晨贾士儒张学礼王冬王冬
- 关键词：视黄醇酿酒酵母融合蛋白
- 酿酒酵母工程菌UDP-葡萄糖供给模块的优化与人参皂苷F1生产被引量：8
- 2019年
- 人参皂苷F1为人参、三七、西洋参等药用植物中的稀有皂苷成分,在抗肿瘤、抗氧化、抗衰老等方面有较强的药理活性。为直接利用葡萄糖等廉价原料发酵生产人参皂苷F1,该研究在三萜酵母底盘细胞BY-T3基础上,整合经过密码子优化后的人参达玛烯二醇Ⅱ合成酶(Syn Pg DDS)、人参原人参二醇合酶(Syn Pg PPDS)、人参原人参三醇合酶(Syn Pg PPTS)和拟南芥来源的细胞色素P450还原酶(At CPR1) 4个基因,构建了生产原人参三醇的工程菌BY-PPT;经过强化工程菌BY-PPT内源UDP-葡萄糖供给模块:磷酸葡萄糖变位酶1(PGM1)、α-磷酸葡萄糖变位酶(PGM2)、尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UGP1)等基因获得工程菌BY-PPT-GM,其UDP-葡萄糖产量提高了8. 65倍,达到44. 30 mg·L-1。进一步工作中,通过整合能催化PPT生成人参皂苷F1的UDP-葡萄糖基转移酶基因Pg3-29,成功获得生产0. 5 mg·L-1人参皂苷F1的酵母细胞工厂BY-F1。工程菌经过发酵工艺优化后人参皂苷F1的产量能提高900倍,达到450. 5 mg·L-1。该研究获得的高效UDP-葡萄糖供给模块能为皂苷类酵母细胞工厂构建提供借鉴,同时为进一步获得高产人参皂苷类酵母细胞提供重要基础。
- 王金鹤王冬李畏娴黄颖黄颖戴住波
- 关键词：合成生物学酿酒酵母
- 酵母人工合成细胞生产植物源天然产物被引量：13
- 2016年
- 植物源天然产物在医疗保健领域有着广泛的应用。目前,生产植物源天然产物的主要方式为从原植物直接提取,但此法面临诸多问题。基于合成生物学的理念,创建酵母人工细胞工厂发酵生产植物源天然产物是一种新的资源获取途径。本文将从植物源天然产物在药物和营养领域的应用前景,发酵法生产青蒿酸的研发历程,部分萜类、生物碱和长链多不饱和脂肪酸的研究进展,以及该领域相关技术前沿4个方面介绍酵母人工合成细胞生产植物源天然产物的近况。
- 王冬戴住波张学礼
- 关键词：青蒿素合成生物学酵母
- 对萜类或含萜精油耐受性提高或萜类产量提高的重组宿主细胞、其产生方法及其用途
- 本发明涉及基因工程领域。具体地，本发明涉及对萜类或含萜精油耐受性提高或萜类产量提高的重组宿主细胞、其产生方法及其用途。更具体地，所述重组宿主细胞通过增加野生型宿主细胞中PDR5蛋白的表达量或活性而产生，其可用于萜类生产。
- 张学礼戴住波张丽丽王冬刘芸马晓琳
- 重组微生物的构建方法、相关生物材料及其应用
- 本发明公开了重组酿酒酵母的构建方法、相关生物材料及其应用。该构建方法包括将重组融合蛋白的编码基因导入出发微生物，得到重组微生物；所述重组融合蛋白含有Pln1蛋白和萜合成相关蛋白。该构建方法通过Pln1蛋白对三萜生物合成路...
- 张学礼戴住波石玉松王冬
- 创建酿酒酵母细胞工厂发酵生产广藿香醇被引量：3
- 2023年
- 广藿香醇是存在于中药广藿香挥发油中的一种重要倍半萜类化合物,被认为是广藿香油药理功效和香味的主要贡献成分,具有抗菌、抗肿瘤和抗氧化等多种生物学活性。目前,全球广藿香醇及其混合精油需求量大,传统植提法存在浪费土地,污染环境等诸多问题,因而亟需一种新的方法高效、低成本的生产广藿香醇。为了拓宽广藿香醇的生产方式,实现在酿酒酵母中异源生产广藿香醇,该研究首先将来源于广藿香Pogostemon cablin的广藿香醇合酶(PS)基因进行密码子优化后置于诱导型强启动子GAL1下,转入萜类底盘菌YTT-T5,成功获得可发酵生产(4.0±0.3)mg·L^(-1)广藿香醇的工程菌PS00。为了提高转化率,采用了蛋白质融合手段将丹参来源的SmFPS基因与PS基因进行融合,广藿香醇摇瓶产量提高25倍,达(100.9±7.4)mg·L^(-1)。在此基础上,进一步优化融合基因的拷贝数,广藿香醇的产量提升了90%,达到(191.1±32.7)mg·L^(-1)。最终通过发酵工艺优化,该菌在精确发酵体系中广藿香醇产量能达到2.1 g·L^(-1),为目前报道最高水平。该研究为广藿香醇的绿色生产提供了重要基础。
- 郭爽王冬杨婷婷杨婷婷李荣生李文豪张学礼李荣生
- 关键词：广藿香醇酿酒酵母
- 一种生产人参皂苷Rg1的方法及其专用的工程菌
- 本发明公开了一种生产人参皂苷Rg1的方法及其专用的工程菌。本发明通过将磷酸葡萄糖变位酶1的编码基因、α‑磷酸葡萄糖变位酶的编码基因、尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的编码基因、拟南芥UDP‑葡萄糖脱氢酶1的编码基因、拟南芥UD...
- 张学礼戴住波王冬
- 文献传递
