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梁昊宇: 作品数：29 被引量：21H指数：3; 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>; 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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甲型副伤寒沙门氏菌Nmpc和Pagc核酸疫苗的研究: 目的:构建甲型副伤寒沙门氏菌Nmnpc和Pagc核酸疫苗并对其免疫原性进行初步研究。方法:从甲型副伤寒沙门氏菌基因组中分别扩增出Nmpc和Pagc基因片段,以BamHI和XhoI酶切位点克隆入真核表达载体pcDNA3.1...; 梁昊宇赵志晶王斌李娜计国欣曾明; 关键词：甲型副伤寒沙门氏菌核酸疫苗; 文献传递

重组金黄色葡萄球菌疫苗特异性人血清IgG抗体Luminex系统多重检测方法的建立及验证被引量：3: 2020年; 目的建立重组金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)疫苗特异性人血清IgG抗体的Luminex系统多重检测方法,并进行验证。方法以重组SA疫苗所含的5种抗原(mHla、IsdB-N2、SpA5、mSEB、MntC)作为磁珠偶联蛋白,分别与相应磁珠偶联,加入参考血清(第3次免疫重组SA疫苗后21 d的志愿者血清,筛选出抗5种抗原特异性高效价血清8份,混合),37℃孵育;加入山羊F(ab′)2抗人IgG-Fc(PE),37℃孵育;用Luminex系统进行多重检测,并对偶联抗原浓度、孵育时间、二抗稀释度进行优化。同时分析5种抗原间的干扰情况,并验证方法学的特异性、准确性及精密性。结果mHla、IsdB-N2、SpA5、mSEB、MntC最适偶联浓度分别为30、150、7.5、2.5、7.5μg/2.5 mil,最适一抗及二抗孵育时间均为30 min,最适二抗稀释度为1∶5000。5种抗原间不存在明显的交叉表位,与特异的抗体反应过程无明显相互干扰。游离的重组蛋白对偶联抗原与抗体间反应的抑制率随着浓度的增加而增加,3种浓度的参考血清的回收率介于87.0%~120.8%之间,批内和批间CV值均<10%。结论成功建立并优化了重组SA疫苗特异性抗体的Luminex系统多重检测方法,且该方法具有良好的特异性、准确性及稳定性。; 陈质斌王斌顾江梁昊宇鲁旭曾明; 关键词：金黄色葡萄球菌重组疫苗血清抗体

甲型副伤寒沙门氏菌NmpC亚单位疫苗及其制备方法: 本发明公开了一种甲型副伤寒沙门氏菌亚单位疫苗NmpC及其制备方法。该疫苗包括有效剂量的甲型副伤寒沙门氏菌外膜蛋白NmpC以及疫苗佐剂。所述外膜蛋白NmpC的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。所述制备方法是通过体外表...; 曾明王斌梁昊宇计国欣王恒樑; 文献传递

甲型副伤寒沙门菌菌体抗原单克隆抗体的制备及其初步应用: 2017年; 目的制备甲型副伤寒沙门菌菌体抗原单克隆抗体,并对其进行鉴定及初步应用。方法用甲醛灭活的甲型副伤寒沙门菌免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,筛选出稳定分泌甲型副伤寒沙门菌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,对克隆纯化后的阳性细胞扩大培养后,免疫BALB/c小鼠,收获腹水,间接ELISA法检测抗体效价,并进行Ig类和亚类鉴定;腹水经辛酸-硫酸铵盐析法纯化后,采用间接ELISA法、玻片凝集试验、SDSPAGE法、免疫扩散试验进行检测。将纯化后的2株单克隆抗体用于双抗体夹心ELISA法的建立,并用自制配对抗体检测甲型副伤寒患者血浆、乙型副伤寒患者血浆、伤寒患者血浆和正常人血浆。结果共筛选出2株持续分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为1H4和2A9,腹水抗体效价为1∶10~7和1∶10~6,分别为IgG_1和Ig G_3亚类,轻链均为κ型。纯化后的单克隆抗体1H4、2A9效价分别为1∶10~7和1∶10~3,1H4纯度大于85%,2A9纯度小于60%。2株单克隆抗体与甲型副伤寒沙门菌50503、50973可产生凝集反应,与伤寒沙门菌50096不产生反应;1H4在稀释度为1∶8时可与甲型副伤寒沙门菌菌体特异多糖(organism specific polysaccharide,OSP)产生凝集反应,而2A9在每个稀释度与OSP均不发生反应。将1H4和2A9用于双抗体夹心ELISA检测法建立,确定1H4/HRP-2A9的组合为最佳配对,用该配对抗体检测阳性样本检出率为100%,正常人血浆样本检出率为0。结论获得2株甲型副伤寒沙门菌菌体抗原单克隆抗体,可用于甲型副伤寒沙门菌的快速鉴定。; 梁昊宇董思国曾明王斌; 关键词：甲型副伤寒沙门菌单克隆抗体脾细胞

甲型副伤寒沙门氏菌杀菌抗体测定法的建立: 目的借鉴流行性脑膜炎球菌杀菌抗体测定法(TTC法),对传统的甲型副伤寒沙门氏菌血清杀菌抗体检测法进行改进。方法在传统的TTC法基础上改用1%蛋白胨水和1%TSB琼脂分别作为稀释液和培养基,以甲型副伤寒沙门氏菌外膜蛋白免疫...; 梁昊宇王斌计国欣曾明; 关键词：甲型副伤寒沙门氏菌 TTC; 文献传递

伤寒和甲型副伤寒沙门菌复合PCR检测被引量：5: 2008年; 目的建立用于快速和特异检测伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌的复合PCR方法。方法根据rfbS、rfbEf、liC和vi基因序列设计4对PCR引物,对54株沙门菌和其他菌属的菌株进行复合PCR检测。结果采用所建立的复合PCR方法可分别检测到伤寒和甲型副伤寒沙门菌的3条和2条特异性条带带型,可与其他菌株带型准确分开。结论本研究建立的复合PCR方法可用于检测伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌。; 赵志晶王斌梁昊宇计国欣曾明辜清吾; 关键词：伤寒沙门菌甲型副伤寒沙门菌复合PCR

克罗诺杆菌IbpA蛋白的表达、纯化及其免疫原性: 2016年; 目的表达并纯化克罗诺杆菌Ibp A蛋白,检测其免疫原性。方法提取克罗诺杆菌菌株CMCC45402的基因组,经PCR获得ibp A基因片段,连接至表达载体p ET30a(+),构建重组质粒p ET30a(+)-ibp A。将重组质粒转化E.coli BL21(DE3)菌株,用不同终浓度的IPTG(0.1、0.2、0.5、0.8、1.0 mmol/L)分别于30和37℃诱导表达不同时间(2.5、4、5 h),进行SDS-PAGE及Western blot分析。表达产物经Ni凝胶亲和层析纯化后,经腹腔免疫BALB/c小鼠,每2周加强免疫1次,共2次,末次免疫1周后,经小鼠眼球采血,分离血清,ELISA法检测血清效价。同时检测热激对Ibp A蛋白表达水平的影响。结果重组质粒p ET30a(+)-ibp A经双酶切鉴定证明构建正确。最佳IPTG诱导终浓度为0.2 mmol/L,最佳诱导温度为30℃,最佳诱导时间为5 h。诱导表达产物相对分子质量约24 000,主要以可溶性形式存在,可与抗His-Tag单克隆抗体特异性结合;纯化蛋白的纯度可达96%;小鼠免疫血清效价均可达1:25 000以上。用小鼠血清可检测到热激后克罗诺杆菌Ibp A的表达。结论本实验成功构建了ibp A基因的高效原核表达系统,获得了高纯度重组蛋白,制备了高效价抗血清,为后续ibp A基因和克罗诺杆菌热抗性关系的研究奠定了基础。; 赵志晶梁昊宇董思国田万红王斌曾明; 关键词：A蛋白原核表达纯化免疫原性

细菌DNA疫苗的研究进展: 2009年; DNA疫苗是20世纪90年代初出现的一种新型疫苗,近年来发展迅速,在预防和治疗病毒性疾病及肿瘤等方面效果显著。随着DNA疫苗研究的不断深入,很多细菌DNA疫苗相继出现。本文就细菌DNA疫苗的研究进展作一综述。; 梁昊宇曾明

屋尘螨变应原制剂外观异常对其质量的影响被引量：1: 2020年; 目的分析屋尘螨变应原制剂外观异常对其质量的影响。方法依据进口药品注册标准(JS20130104)对1批(T6469)屋尘螨变应原制剂进行全面质量检定,同时与检定合格样品(A3016、A3064及A3110批)进行相应比对,Western blot鉴定主要变应原组分,纳米粒径颗粒分析仪检测制剂中铝佐剂-蛋白吸附物的中值粒径(D50)。选取检定合格样品进行冷冻模拟验证,观察低温冷冻对制剂外观性状的影响。结果 T6469批制剂外观不均一(外观性状异常与正常样品),混悬液浊度有差异,部分样品出现摇不散的贴壁颗粒,外观性状异常样品与正常样品比较,浑浊度降低,沉降速度增快,铝佐剂吸附物液面高度明显低于外观正常样品。经检定,T6469、A3016、A3064及A3110批制剂pH、铝含量、苯酚含量及游离上清活性均在质量标准范围内,在相对分子质量25 000及14 000处均出现特异性条带,但T6469批外观性状异常样品条带变弱。T6469外观性状异常与正常样品之间D50差异有统计学意义(P <0. 05);检定合格样品冻存前后D50差异有统计学意义(P <0. 05)。T6469批外观性状异常样品与正常样品和检定合格样品比较,总生物学活性明显降低,差异有统计学意义(P <0. 05)。检定合格样品放置低温环境至冻结后重现了上述外观异常性状,生物活性与未处理样品相比显著降低(P <0. 05)。结论该批屋尘螨变应原制剂的外观异常可能是由于样品贮存及运输中出现低温冻结,引起铝佐剂-蛋白凝胶颗粒出现聚集,形成较大颗粒,最终导致其生物活性显著降低。; 张影鲁旭梁昊宇董思国胡玥王斌曾明; 关键词：生物学活性粒径

国内甲型副伤寒沙门菌疫苗株的16S rRNA基因序列分析被引量：2: 2008年; 目的对我国4株用于或拟用于疫苗生产的甲型副伤寒沙门菌的16S rRNA基因进行序列分析,考察其保守性和差异。方法提取4株菌基因组DNA,以16S rDNA通用引物进行PCR扩增,并对产物进行克隆及测序。结果4株菌均可扩增出约1500bp的目的基因片段,测序结果表明,4株菌中16S rDNA核苷酸序列一致性达99.77%。结论选择保守性高的16S rDNA区段进行序列测定,以防止种子批的变异,便于对疫苗生产用种子进行质量控制。; 么山山王薇计国欣梁昊宇王斌曾明; 关键词：疫苗甲型副伤寒沙门菌 RDNA RRNA

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