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农药残留快速检测技术研究进展被引量：4: 2012年; 农药是农作物生产的基本保障,对于农作物病虫害的综合防治起着举足轻重的作用,但大量施用农药后农产品中农药的残留对环境和人类健康产生严重的威胁。随着人类环保意识和健康意识的加强,农药残留的危害性越来越受到大家的广泛关注,许多国家制定了食品中农药残留的上限标准。因此,农药残留分析检测技术显得尤为重要。通过综述目前适用于现场检测的农药残留检测技术——酶抑制检测法、免疫分析法、活体生物测定法和生物传感器法等快速测定方法的技术原理及其优缺点,指出了农药残留快速检测技术中存在的问题、最新研发动态及其未来的发展方向,以期为农药残留分析检测技术的完善与发展提供一定的参考。; 杨靓刘小娟郭玉双; 关键词：农药残留免疫分析

在兴趣中快乐的学习——浅谈农林类分子生物学教学实践的改革与创新被引量：1: 2011年; 分子生物学是农林院校许多生物类专业的主干课程,在整个生物学理论教学中占有重要地位。本文结合笔者近年在福建农林大学讲授《分子生物学》这门课程的实践经验,从教学大纲、教材选用、教学方式方法等层面探讨分子生物学课程教学改革的设想。在教学中贯穿着素质教育,培养学生的动手能力、创造能力和创新意识,让理论和实践相结合,让学生在兴趣中学习,在快乐中成长。笔者已将这些设想付诸教学实践,并在教学中获得初步成效。; 杨靓; 关键词：农林院校分子生物学教学改革与创新

蛋白激酶与植物渗透胁迫耐受研究进展被引量：1: 2012年; 蛋白激酶是一类能使其他蛋白质磷酸化的酶。在植物中,蛋白激酶几乎参与植物生命周期中一切生理调节过程。渗透胁迫是植物生长发育过程中常见的非生物胁迫,植物对渗透胁迫耐受的机理一直是研究的重点。本文着眼于植物渗透胁迫反应,详细介绍了分裂原激活蛋白激酶(MAPK)、钙依赖而钙调素不依赖的蛋白激酶(CDPK)、受体蛋白激酶(RPK)、核糖体蛋白激酶、转录调控蛋白激酶等多种蛋白激酶在植物逆境信号识别与转导中的作用,综述其研究进展及前景。分析了当前在植物抗渗透胁迫蛋白激酶研究中存在的问题,进而对解决问题的途径进行了探讨。; 杨靓吴祖建; 关键词：渗透胁迫蛋白激酶信号转导

一种快速提取植物基因组DNA的试剂盒及方法: 本发明属于基因工程技术领域，通过对传统CTAB法提取基因组的方法进行了优化而开发了一种适用于PCR扩增的通用型快速提取植物基因组DNA的试剂盒及方法，可用于多种植物基因组DNA的快速提取，满足植物分子生物学和遗传学的研究...; 张煜隆杨靓吴祖建唐雅君刘小娟吴康承; 文献传递

野生大豆胁迫应答LRR类受体蛋白激酶基因的克隆及其表达特性分析被引量：1: 2012年; 从前期构建的野生大豆在高盐、低温、干旱早期的基因表达谱中,选取了在4℃胁迫早期(1 h)上调表达的LRR-RLK的EST,通过SMART和RACE结合的方法获得了GsLRPK的全长序列:该基因全长2 264 bp,共编码714个氨基酸。生物信息学分析表明其氮端含有1个LRR N-terminal domain及串联排列的LRR-Motif;碳端含有丝/苏氨酸蛋白激酶催化结构域的11个亚基。此外,GsLRPK蛋白氮端22个氨基酸为可能的信号肽序列,并且存在1个跨膜结构域,很可能定位于细胞质膜或细胞器膜。半定量PCR分析显示该基因可受干旱、ABA、4℃低温及高盐胁迫的诱导,可能作为一个"关键节点"在胁迫信号传导通路中发挥重要作用。; 杨靓李翔宇高鹏陈庆园郭玉双; 关键词：野生大豆渗透胁迫

水稻草矮病毒多克隆抗体的制备及应用: 水稻草状矮化病于20世纪70年代曾在南亚、东南亚大面积发生,给当地的水稻生产造成严重损失,在我国福建、台湾、广东、广西和海南等地也有分布。其病原是水稻草矮病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV),...; 王颂谢联辉杨靓

竹花叶病毒福州分离物基因组序列分析及其侵染性克隆的构建: 2017年; 【目的】研究BaMV福州分离物BaMV-TMS1及其携带的卫星RNA(satBaMV)分离物satBaMV-TMS1的全基因组特征,明确其系统发育关系;对BaMV进行c DNA侵染性克隆构建方法的改进,为其反向遗传学体系的快速建立提供简便的方法。【方法】根据已报道的BaMV和satBaMV全长序列保守区分别设计2对和1对扩增引物,从感染BaMV的竹叶中扩增、克隆获得BaMV-TMS1和satBaMV-TMS1的全长序列,并进行序列特征分析和系统发育树构建。采用多片段无缝克隆方法将扩增得到的2个病毒DNA片段和载体进行连接并转化农杆菌,接种本氏烟后检验其侵染性。【结果】测序获得的BaMV-TMS1和satBaMV-TMS1分离物核苷酸序列全长分别为6 366和834 nt(不含3'端的多聚腺苷酸尾),具有典型的BaMV和satBaMV基因组结构特征。BaMV-TMS1分离物与已报道的其他分离物序列同源性为82%~83%,而satBaMV-TMS1分离物与其他分离物的序列同源性为92%~93%。系统进化树分析表明,BaMV-TMS1分离物可单独形成一簇,satBaMV-TMS1分离物也单独形成一个新的分支。侵染性克隆通过农杆菌注射接种本氏烟10天以后,RT-PCR检测以及透射电镜负染观察结果都验证病毒成功侵染。【结论】BaMV-TMS1和satBaMV-TMS1分离物与已知序列有着较高的变异度且生成新的系统发育树分支,体现了该病毒与卫星RNA较高的遗传多样性。本研究成功构建具有生物活性的BaMV侵染性克隆且构建方法相对简单快速。; 闫文凯林文武杨文婷杜雅馨吴祖建杨靓; 关键词：卫星RNA 全基因组系统发育侵染性克隆

一种快速提取植物基因组DNA的试剂盒及方法: 本发明属于基因工程技术领域，通过对传统CTAB法提取基因组的方法进行了优化而开发了一种适用于PCR扩增的通用型快速提取植物基因组DNA的试剂盒及方法，可用于多种植物基因组DNA的快速提取，满足植物分子生物学和遗传学的研究...; 张煜隆杨靓吴祖建唐雅君刘小娟吴康承; 文献传递

水稻草状矮缩病毒P2基因多克隆抗体的制备及应用被引量：4: 2012年; 为了进行水稻草状矮缩病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV)诊断方法和蛋白功能研究。通过RT-PCR方法从感染RGSV的水稻中克隆该病毒的P2基因,并将此基因片段重组到原核表达载体pDEST17上。将重组载体转化E.coli Rosetta,经IPTG诱导后获得分子量约为29kDa含HIS标签的融合蛋白。以诱导的融合蛋白为抗原,免疫新西兰大耳白兔获得多克隆抗体,经酶联免疫检测发现其效价达到l:8192。并用制备的抗体建立了特异、灵敏的检测RGSV的IC-RT-PCR和Dot-blot ELISA方法,为该病毒的检测、诊断提供了保障,同时也为P2蛋白的结构和功能研究奠定了基础。; 杨靓邓萍王开放刘妍刘小娟吴祖建; 关键词：原核表达多克隆抗体

水稻蛋白激酶OsCIPK5的亚细胞定位分析及RNAi转基因水稻的获得被引量：2: 2017年; 在植物生长发育中,CIPKs(CBL-interacting protein kinases)在胁迫信号转导和增强抗逆途径中发挥着重要作用,而OsCIPK5的具体功能还未知。为了研究OsCIPK5的功能,本研究从日本晴水稻中成功克隆了OsCIPK5基因。用生物信息学方法对其编码的蛋白进行分析,结果表明OsCIPK5含有2个功能区即激酶活性区和NAF区,OsCIPK5与5种植物的CIPK5同源性较高,而与短花药野生稻CIPK5的同源性最高(94%),亲缘关系最近。利用植物生理学方法对水稻进行低钾处理,结果表明水稻根中OsCIPK5受低钾诱导表达,而叶片中OsCIPK5表达量没有变化;同时构建了OsCIPK5与黄色荧光蛋白基因融合的植物瞬时表达载体,共聚焦显微镜观察显示,OsCIPK5编码的蛋白主要定位在细胞核、细胞膜,还以颗粒状结构不规则分布在细胞质中。进一步构建了OsCIPK5的RNAi载体,通过水稻遗传转化体系获得26株阳性转基因水稻。荧光定量PCR(Real-time qPCR)分析表明,T1代转基因水稻中OsCIPK5的表达量与野生型相比显著降低。OsCIPK5的生物信息学分析、植物生理学分析、亚细胞定位以及RNAi转基因水稻的获得为研究OsCIPK5的功能奠定了基础。; 熊桂红刘小娟杨靓吴祖建; 关键词：生物信息学分析亚细胞定位 RNAI

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杨靓

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