杨伟伟
- 作品数：17 被引量：11H指数：2
- 供职机构：杭州师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省公益性技术应用研究计划项目浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 六种核酸提取试剂盒对粪样中小鼠肝炎病毒核酸提取效率的比较
- 2019年
- 目的比较六种商品化试剂盒在小鼠粪便中提取小鼠肝炎病毒(MHV)RNA的效率,筛选出效率高、耗时短的核酸提取方法。方法采集感染MHV小鼠的新鲜粪便样本,分别用液氮研磨法、磁珠匀浆法以及PBS溶解离心法进行处理,通过同一核酸提取试剂盒比较病毒核酸提取效率,明确最佳样本前处理方法;之后,用6种试剂盒进行RNA提取,经反转录后进行TaqMan实时定量PCR检测,以Ct值评价6种试剂盒的提取效率,结合产物测序和血清抗体ELISA结果,筛选MHV的最佳核酸提取方法。结果对于粪便样本的前处理,液氮研磨法的RNA提取效率显著高于磁珠匀浆法。对于6种试剂盒的提取效果,TIANGEN DP422[总RNA浓度:(549.70±52.38) ng/μL,Ct值:(24.51±0.10)]核酸提取效率最高;TIANGEN SD101[总RNA浓度:(274.13±6.87) ng/μL,Ct值:(2.39±0.017)]和QIAGEN 52904[总RNA浓度:(288.13±15.11) ng/μL,Ct值:(2.40±0.012)]用时最短;XS VRL[总RNA浓度:(348.80±15.85) ng/μL,Ct值:(24.70±0.13)]操作最为方便。结论粪便样本前处理建议采用液氮研磨法。针对粪便中MHV RNA的提取,TIANGEN DP422提取效率最高,推荐用于小鼠肝炎病毒的分子生物学检测。
- 桂飞杨伟伟俞利平戴方伟杜江涛宋晓明
- 关键词：小鼠肝炎病毒TAQMAN探针实时荧光定量PCR
- 三例眼部突变小鼠的培育及特征分析
- 2014年
- 目的筛选培育眼部突变表型小鼠,为人类相关疾病的研究提供材料。方法采用N-乙基-N-亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)诱变处理G0代小鼠,繁育获得G1代,筛选眼部突变表型个体,进行遗传力试验、临床诊断及病理学观察。结果本实验繁殖G1代小鼠2782只,经筛查获得眼部突变表型小鼠65只,可稳定遗传小鼠3例,分别表现为:角膜混浊、小眼球和虹膜异常等特征。角膜混浊者其角膜症状严重程度差异较大,角膜病变部位明显增厚,部分伴有新生血管;小眼球者睑裂较小,甚至上下眼睑粘连,外观眼球不可见,病理学检查可见内有发育异常的小眼球;虹膜异常者可见瞳孔偏大,明显偏离中心位置,偏向位置不定,对光无反射,病理学观察可见虹膜晶状体粘连、虹膜缺损,严重者伴有视网膜异常等。结论本实验成功培育了3例眼部突变表型小鼠,为人类相关疾病的研究提供良好的材料。
- 杨伟伟金红颖吴晓玲周祥李高天刘桂杰顾美儿俞利平宋晓明吴宝金
- 关键词：眼部疾病小鼠模型诱变
- AKR/J小鼠的表型特征与疾病模型价值评估
- 目的：深入分析AKR/J小鼠的与胆固醇代谢相关的表型特征及其内在联系，探讨其作为人类疾病模型的价值。方法：AKR/J小鼠为实验组，BABL/C小鼠为对照组，取两组小鼠毛发镜下观察;取两组小鼠的肾上腺、卵巢、睾丸，冷冻切片...
- 顾美儿杨伟伟俞利平卢增兰邓巧凤顾小丽张艳丽吴宝金刘桂杰
- 关键词：实验动物生理特性疾病模型
- 豚鼠基因组26个多态性微卫星标记的筛选被引量：5
- 2014年
- 目的筛选豚鼠基因组的多态性微卫星标记,为豚鼠遗传质量控制及基因定位等工作奠定基础。方法采用磁珠富集法和豚鼠基因组数据库筛选法获取微卫星位点序列,通过分析和初步筛选,挑选部分候选位点,根据其序列设计引物,对5种不同来源的豚鼠基因组DNA标本进行PCR扩增,以期获得多态性分子标记。结果本实验采用磁珠富集法共获得微卫星序列304个,设计引物125对,最终获得多态性位点1个,暂未发现多态性的特异性位点17个;用数据库筛选法共获得微卫星序列292个,设计并合成相应引物178对,最终发现多态性位点25个,暂未发现多态性的特异性位点28个。结论本实验获得26个多态性微卫星标记,45个潜在的候选标记,为微卫星标记在豚鼠遗传质量监测及突变基因定位等工作的应用奠定了基础。
- 刘迪文杨伟伟吴宝金
- 关键词：微卫星
- Plcd1转基因小鼠的制备被引量：1
- 2013年
- 通过制备Plcd1转基因小鼠研究Plcd1基因功能.首先逆转录PCR获得约2.2kb的Plcd1基因全长,T载体克隆后测序验证;以pMD19-T-Plcd1为模板,通过设计引物及PCR扩增引入酶切位点,与pEF6/V5-His同时进行酶切、连接,构建pEF6/V5-His-Plcd1表达载体;经真核表达验证后,酶切获得目标片段,显微注射681枚受精卵,在82只仔鼠中获得转基因阳性首建鼠15只,其中13只稳定遗传并建系.PLCD1-HIS融合蛋白在睾丸组织中表达,在皮肤组织中无表达.Plcd1转基因小鼠为Plcd1功能研究奠定了基础.
- 杨伟伟殷筱舒殷黎静张艳丽李高天刘桂杰俞利平顾美儿吴宝金
- 关键词：显微注射转基因小鼠
- 5种不同遗传背景绿色荧光蛋白(GFP)基因导入系小鼠的培育
- 2013年
- 通过反复回交——筛选目的基因的手段,将C57BL/6-Tg(UBC-GFP)30Scha/J转基因小鼠的绿色荧光蛋白基因(GFP)分别向BABL/C、CBA/J、DBA/2J、AKR/J、FVB/J等品系小鼠导入,得到了5种不同遗传背景且带有GFP基因的导入系小鼠.冰冻组织切片等方法显示GFP导入系小鼠的皮肤、肝、肾、心、肺等均有不同程度的绿色荧光蛋白表达,不同遗传背景对GFP的组织表达谱、血液生理指标及繁殖性能未见影响.本实验采用基因导入法培育了5种新的带有GFP导入系小鼠,这些不同遗传背景的基因导入系小鼠为移植生物学研究提供了材料.
- 吴培林俞利平尹洪萍杨伟伟顾美儿刘桂杰张艳丽李高天吴宝金
- 关键词：绿色荧光蛋白基因导入表达谱
- 一种小鼠附睾的体外保存方法
- 本发明涉及一种小鼠附睾的体外保存方法，属于生物医学技术领域。包括：1)将小鼠的附睾尾去除脂肪并在滤纸上吸干；2)将经步骤1)处理的附睾尾转移到装有Lifor培养液的离心管中；3)将离心管进行冷藏保存；4)步骤3)冷藏保存...
- 顾美儿杨伟伟桂飞孙筱品
- 文献传递
- 小鼠胚胎移植影响因素的初步探索被引量：2
- 2020年
- 目的分析小鼠品系、胚胎移植方式和移植数量对胚胎移植结果的影响,以进一步优化并提高胚胎移植效率。方法通过超数排卵及体外受精获得277个基因修饰小鼠品系的胚胎,将不同数量的胚胎移植至假孕雌鼠的单侧或双侧输卵管中,分析比较不同体外受精率品系、不同移植胚胎数及不同移植方法对窝产仔数和产仔率的影响。结果体外受精率在0%~39%的品系组窝产仔数(4.61±1.92)和产仔率[(19.21±9.70)%]均明显低于其他各组(均P <0.01),体外受精率60%~69%组比90%~100%组的窝产仔率明显升高(P <0.05)。移植胚胎数较少时(5枚),受体雌鼠能够妊娠,但窝产仔数较少,易发生食仔现象。移植胚胎数在10枚以上时,各组窝产仔数和产仔率均较高。其中,胚胎移植数量在15枚左右时产仔率最高,达到(46.67±11.56)%,明显高于其他各组(均P <0.01),表明此时胚胎利用率最大;移植数量达到25枚时,平均窝产仔数(9.67±1.53)最多,明显高于其他各组(均P<0.01);移植胚胎数增加到30枚后,窝产仔数(8.33±0.58)和产仔率[(27.33±2.31)%]均有所下降,表明此时已超过小鼠子宫能承受的最大负荷。单侧移植和双侧移植的窝产仔数和产仔率均未见明显差异(P>0.05)。结论体外受精率低于40%的小鼠品系的平均窝产仔数及产仔率均较低。移植胚胎数在15枚左右时,胚胎利用率最大;移植胚胎数在25枚左右时,窝产仔数最多。单双侧移植的窝产仔数和产仔率均无明显差异。
- 桂飞杨伟伟孙筱品顾美儿
- 关键词：胚胎移植体外受精影响因素小鼠
- AKR／J小鼠的表型特征与疾病模型价值评估
- 目的深入分析AKR/J小鼠的与胆固醇代谢相关的表型特征及其内在联系，探讨其作为人类疾病模型的价值。方法AKR／J小鼠为实验组，BABL／C小鼠为对照组，取两组小鼠毛发镜下观察;取两组小鼠的肾上腺、卵巢、睾丸，冷冻切片后进...
- 顾美儿杨伟伟俞利平卢增兰邓巧凤顾小丽张艳丽吴宝金刘桂杰邓巧凤
- 关键词：疾病模型
- 文献传递网络资源链接
- snthr-1Bao稀毛小鼠皮肤过度角化相关基因的研究
- 验室通过小鼠皮肤表达关键基因QPCR芯片的研制,运用QPCR芯片研究snthr-1Bao稀毛小鼠的分子病理过程,得到23个表达异常基因Cyp4f15、Itga1、Hgf、 Msx2、Cyp26c1、Wnt7a、hprt、...
- 顾小丽吴宝金李高天张艳丽杨伟伟顾美儿俞利平刘桂杰
- 关键词：差异表达基因信号通路分子病理
