李迪
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市教委科技计划面上项目北京市优秀人才培养资助更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 金黄色葡萄球菌β-溶血素的表达、纯化及中和性抗体的制备被引量：4
- 2016年
- 目的利用大肠杆菌重组表达金黄色葡萄球菌外分泌毒素β-溶血素(β-hemolysin,Hlb)及其突变体HlbH-149-N,检测其生物学活性,并制备其功能性抗体,探讨Hlb蛋白在金葡菌感染中的生物学意义。方法以金葡菌NCTC-8325基因组为模板,利用PCR技术扩增目的基因hlb,进一步构建重组表达载体p ET28a-hlb,并转至大肠杆菌BL21(DE3),利用点突变技术构建重组表达载体p ET28a-hlbH-149-N,经IPTG诱导表达目的蛋白,通过Ni2+柱亲和纯化获得Hlb蛋白及突变体HlbH-149-N蛋白;通过溶血实验检测Hlb及突变体HlbH-149-N蛋白的生物学活性,并制备Hlb特异性抗体,检测抗体的中和活性。结果获得了纯度较高的重组Hlb蛋白和突变体HlbH-149-N蛋白,溶血活性实验结果表明,重组Hlb蛋白能够裂解绵羊红细胞,而突变体HlbH-149-N蛋白不能裂解绵羊红细胞;不同物种红细胞对Hlb敏感性不同;制备了抗Hlb蛋白的多克隆抗体(anti-Hlb),ELISA和Western印迹实验结果表明,anti-Hlb能特异结合Hlb蛋白和突变体HlbH-149-N蛋白,同时发现,anti-Hlb可有效抑制Hlb对绵羊红细胞的裂解作用。结论获得了具有良好溶血活性的重组Hlb蛋白以及无溶血活性的突变体HlbH-149-N蛋白,并制备了具有中和活性的特异性抗体,为深入研究Hlb在金葡菌致病过程中的作用奠定了基础。
- 刘成华李迪高亚萍靳鹏刘玉杨光
- 关键词：溶血活性抗体制备
- 金黄色葡萄球菌α-溶血素对B细胞功能的影响
- 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,金葡菌)是人和动物细菌感染中最常见的病原菌,能引起从表层皮肤疖痈到威胁生命的败血症、脓毒血症等多种疾病。金葡菌分泌的α-溶血素(α-hemolysin,Hla)...
- 李迪刘成华高亚萍刘玉杨光
- 关键词：B细胞
- 文献传递
- 小鼠金黄色葡萄球菌颅内感染模型的建立被引量：1
- 2014年
- 目的：建立金黄色葡萄球菌颅内感染小鼠模型。方法6～8周龄雌性C57BL/6J小鼠随机分为实验组和对照组,各52只。实验组小鼠颅内注射金黄色葡萄球菌8325-4菌液5μl （5×10^6 CFU）,对照组注射等量无菌生理盐水。造模后观察小鼠症状,最早出现死亡的时间点及48 h存活率；检测肛温、外周血白细胞计数及中性粒细胞百分比；取脑组织做病理切片,观察脑组织病理学改变。结果造模后,实验组小鼠出现反应迟钝、抽搐等症状,12 h开始出现死亡,48 h存活率为26.9%。中性粒细胞百分比明显增高,脑组织病理学检查显示感染处大量中性粒细胞浸润。对照组均未见症状和死亡,脑组织病理学检查正常。结论本组建立的小鼠金黄色葡萄球菌颅内感染模型特征稳定,可用于临床金黄色葡萄球菌颅内感染致病机制的研究。
- 李冬智闫君李迪刘玉董洁高亚萍杨光孙涛宫剑
- 关键词：颅内感染
- 金黄色葡萄球菌α-溶血素对B细胞功能的影响
- 李迪刘成华高亚萍刘玉杨光
- 关键词：B细胞
- 金黄色葡萄球菌α-溶血素的表达、纯化及中和性抗体的制备被引量：2
- 2014年
- 目的利用大肠杆菌重组表达金黄色葡萄球菌(SAU)重要的外分泌毒力因子α-溶血素(alpha hemolysin,Hla),检测Hla蛋白对不同种属红细胞的裂解作用;制备其特异性抗体,并检测抗体的中和活性。方法以SAU NCTC-8325菌株基因组为模板,PCR扩增hla基因,构建重组表达载体p ET-28a-Hla,转化大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达,通过Ni2+柱亲和纯化获得Hla蛋白;通过红细胞裂解实验测定Hla蛋白的溶血活性。结果重组Hla蛋白以可溶形式表达,细胞裂解实验表明,纯化的Hla蛋白可以显著裂解兔红细胞,但人红细胞和羊红细胞对Hla杀伤作用不敏感。ELISA结果表明,获得了效价较高的多克隆抗体。该抗体可以有效抑制Hla对兔红细胞的裂解作用。结论 SAU的Hla蛋白对不同种属红细胞的溶解能力不同,为探讨Hla裂解细胞的机制给予一定的提示;同时所制备的特异性抗体(anti-Hla)可以抑制Hla的溶血作用,为深入研究Hla的致病机制奠定了基础。
- 李迪高亚萍靳鹏董洁刘玉杨光
- 关键词：溶血活性抗体红细胞
