李林芳
- 作品数：52 被引量：92H指数：5
- 供职机构：第二军医大学东方肝胆外科医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种包含高效杀伤启动机制的肿瘤精准T细胞及其用途
- 本发明属于免疫学和细胞生物学领域，涉及包含高效杀伤启动机制的肿瘤精准T细胞及其用途。具体地，本发明涉及一种对肿瘤细胞表面广谱表达膜抗原具有中等亲和力结合特性的嵌合抗原受体以及新一代的肿瘤精准T细胞，又称白泽T。中等亲和力...
- 钱其军金华君李林芳叶真龙章浩王颖吴红平吴孟超
- 肿瘤端粒酶靶向腺病毒载体的表达活性被引量：4
- 2004年
- 目的 构建针对端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体 ,研究其介导目的基因在肿瘤细胞内的定向表达能力。方法 将端粒酶逆转录酶 (hTERT )启动子克隆入质粒 pDC3 12的多克隆位点构成外源基因表达盒 ,在基因表达盒上下游分别插入 1个绝缘子序列 ,构建针对端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体pSG TPE ;采用Luciferase报告基因进行hTERT启动子的活性分析 ;以pSG TPE携带绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因 ,重组腺病毒AdTPE EGFP ,观察其介导EGFP在肿瘤细胞内的定向表达能力 ,并与CMV启动子控制的腺病毒AdCMV EGFP作对照。结果 hTERT启动子在正常细胞内几乎没有活性 ,而在肿瘤细胞内的活性与SV 40启动子相近。腺病毒AdTPE EGFP能介导EGFP在肿瘤细胞内定向而稳定表达 ,在正常细胞内不表达 ,而对照腺病毒AdCMV EGFP在肿瘤和正常细胞内均表达EGFP。结论 靶向端粒酶阳性肿瘤的腺病毒载体 pSG TPE ,不但提高了对基因表达调控的特异性 ,而且降低了对正常细胞毒性作用。绝缘子的应用隔断了外源基因表达盒和病毒基因表达调控序列之间的互相干扰 ,进一步提高目的基因的表达效率。该载体对肿瘤的靶向基因治疗具有重要的应用价值。
- 苏长青王星华崔贞福吴红平李林芳姜梨华钱炎珍吴孟超钱其军
- 关键词：基因治疗腺病毒端粒酶启动子
- 溶瘤腺病毒SG600-p53对裸鼠胃癌移植瘤的抑制作用被引量：2
- 2009年
- 目的:利用我们前期构建的溶瘤腺病毒SG600技术平台,研究其携带野生型p53基因对裸鼠胃癌移植瘤模型抗肿瘤活性。方法:克隆p53基因全长cDNA,插入到溶瘤腺病毒SG600基因组中,同时建立裸鼠胃癌移植瘤模型,体内观察SG600-p53对胃癌移植瘤模型的抗肿瘤疗效。结果:成功构建溶瘤腺病毒SG600-p53,裸鼠胃癌移植瘤的p53基因获增强表达。在胃癌移植瘤裸鼠模型中,经4周治疗,重组SG600-p53抑瘤率达75.59%,优于Ad-p53(45.00%)和SG600(56.95%)。结论:SG600-p53作为一种有效的抗肿瘤新型制剂,对胃癌移植瘤有很好的特异性抗肿瘤活性,可能具有良好的临床应用前景。
- 陈洁苏长青李林芳顾坚忠
- 关键词：溶瘤腺病毒P53基因基因治疗胃癌
- 携带全长抗CD20抗体的嵌合型腺病毒Ad5F11b-Anti-CD20载体构建与表达研究被引量：1
- 2009年
- 构建Ad5F11b-Anti-CD20嵌合型腺病毒载体并探索该腺病毒在体外表达全长抗体的能力。合成部核糖体进入位点(IRES)序列,将其与美罗华抗体重轻链连接,克隆到pDC338质粒载体上,并与以11b型腺病毒(Ad11b)Fiber替代5型腺病毒(Ad5)Fiber的嵌合型腺病毒骨架质粒pAd5F11b进行重组,获得Ad5F11b-Anti-CD20嵌合型腺病毒。将鉴定正确的病毒空斑感染293细胞,ELISA检测其表达水平以及间接免疫荧光检测该病毒表达抗体的特异性。结果表明,嵌合型腺病毒Ad5F11b-Anti-CD20在293细胞中的表达量高达3.78μg/ml±0.30μg/ml,间接免疫荧光(IFA)显示该病毒表达的抗体只与CD20+的Raji细胞有特异性结合,而与CD20-的Molt-4细胞无结合能力。成功构建了高效表达抗CD20抗体的嵌合型腺病毒Ad5F11b-Anti-CD20。
- 杨秋梅吴红平周秀梅李林芳王春红姜梨华钱其军
- 关键词：抗CD20抗体IRES
- 转录因子E2F启动子的克隆及其肿瘤靶向特异性的鉴定
- 2007年
- 目的:克隆转录因子E2F的启动子,研究其针对pRb/E2F/p16调控环路缺陷肿瘤的特异性。方法:提取HepG-Ⅱ细胞基因组DNA,PCR扩增其转录因子E2F启动子(E2Fp),插入pGL3-Basic多克隆位点,构建成pGL3-E2Fp;采用Luciferase报告基因检测方法,在肿瘤细胞和正常细胞内测定E2Fp介导的Luciferase表达,以推测E2Fp肿瘤的特异性。结果:E2Fp在正常细胞内几乎没有活性,而在肿瘤细胞内具有较高的活性,两组间Luciferase报告基因表达的差异有显著性(P=0.0004)。结论:靶向pRb/E2F/p16环路缺陷肿瘤的E2Fp,具有对基因表达调控的特异性,能够提高Luciferase报告基因在肿瘤细胞中表达的靶向性。E2Fp的克隆为改进肿瘤基因治疗的疗效提供了一种可靠的工具。
- 马炬明苏长青王伟国施建国胡慧珍李林芳钱其军
- 关键词：转录因子启动子基因治疗报告基因
- 特异性增殖型腺病毒CNHK300-mIFN-γ治疗胃癌的体外实验研究
- 2010年
- 目的研究增殖型腺病毒CNHK300-mIFN-γ在胃癌细胞BGC．823中的特异性增殖能力、目的基因表达能力、肿瘤杀伤作用及安全性。方法通过增殖实验比较CNHK300-mIFN-γ与CNHK300在胃癌细胞BGC-823与成纤维细胞BJ中的增殖能力；ELISA法检测CNHK300-mIFN-γ和复制缺陷型腺病毒Ad-mIFN-γ不同细胞中mIFN-γ蛋白的表达量；MTT与细胞病变效应（CPE）实验观察CNHK300-mIFN-γ对胃癌细胞的杀伤效应及安全性。结果增殖实验结果表明CNI-IK300-mIFN-γ能选择性地在端粒酶阳性的胃癌细胞中大量增殖；ELISA实验结果表明CNHK300-mIFN-γ在胃癌细胞BCG-823中mIFN-γ的表达量可至（171．93±33．61）ng／ml，表达量高于复制缺陷型腺病毒Ad-mIFN-γ【（0．92±0．24）ng／ml]；MTT与CPE实验表明CNHK300-mIFN-γ对胃癌细胞BGC．823有较强的杀伤作用，对正常细胞并无明显杀伤。结论增殖型腺病毒CNHK300-mIFN-γ感染胃癌细胞BGC-823后能高效增殖并大量表达mIFN-γ蛋白，对胃癌细胞有明显杀伤作用且安全性良好。
- 陈坚刘绪舜王峰宗光全苏长青李林芳姜梨华
- 关键词：增殖型腺病毒
- 携带hIFN-γ的增殖型腺病毒治疗胃癌的体外实验研究
- 2008年
- 目的:研究增殖型腺病毒CNHK300-hIFN-γ在胃癌细胞中的增殖、杀伤能力与表达hIFN-γ蛋白的能力。方法:病毒增殖实验比较CNHK300-hIFN-γ与CNHK300在胃癌细胞SGC-7901与成纤维细胞BJ中的增殖能力;ELISA法比较CNHK300-hIFN-γ和复制缺陷型腺病毒Ad-hIFN-γ在细胞中hIFN-γ蛋白的表达量;细胞活力MTT检测法与CPE实验观察CNHK300-hIFN-γ对胃癌细胞与正常细胞的杀伤效应。结果:增殖实验结果表明CNHK300-hIFN-γ能选择性地在端粒酶阳性的胃癌细胞中大量增殖;ELISA实验结果表明CNHK300-hIFN-γ在胃癌细胞中hIFN-γ的表达量可至117.26±15.92ng/ml;MTT与CPE实验表明CNHK300-hIFN-γ对胃癌细胞有显著的杀伤性,对正常细胞无明显杀伤。结论:增殖型腺病毒CNHK300-hIFN-γ感染胃癌细胞后增殖活跃并能大量表达目的基因hIFN-γ,对胃癌细胞有明显杀伤作用但对正常细胞无明显杀伤,为胃癌的病毒基因治疗进一步提供了理论依据。
- 陈琳姜梨华李林芳吴红平钱炎珍薛旭潮
- 关键词：增殖型腺病毒胃癌基因治疗
- 腺病毒介导的全抗体基因治疗卵巢癌的实验研究被引量：19
- 2004年
- 目的 探讨应用基因治疗方法表达完全抗体的可行性及其对肿瘤的治疗作用。方法构建携带曲妥珠单抗 [Trastuzumab ,商品名 :赫赛汀 (Herceptin) ]全抗体基因的腺病毒载体 ,利用重组技术获得增殖缺陷型腺病毒Ad SG Her ,用Ad SG Her转染人正常肝细胞株L 0 2 ,判断体外肝细胞是否可以表达Herceptin抗体 ;将卵巢癌SK OV 3细胞接种于裸鼠皮下 ,3d后把 4 0只成瘤裸鼠随机分为3个治疗组和 1个对照组 ,每组各 10只。治疗组裸鼠尾静脉分别注射不同滴度的Ad SG Her :治疗A组注射 2× 10 9空斑形成单位 ( pfu) /只 ,B组注射 1× 10 9pfu/只 ,C组注射 5× 10 8pfu/只。用酶联免疫吸附试验 (ELISA)分别在体外转染Ad SG Her后的第 3天和第 7天 ,以及裸鼠接受Ad SG Her治疗后的第 3、7、10、14、2 1、2 8、35天检测Herceptin的表达量 ;通过间接免疫荧光法 (IFA)和Western印迹法分别检测血清中的抗体与Her2过表达卵巢癌细胞株SK OV 3结合的特异性以及所表达全长抗体的完整性 ;同时观察不同滴度的Ad SG Her对荷SK OV 3实体瘤裸鼠的治疗作用。结果 构建的带有全长Herceptin基因的重组腺病毒Ad SG Her ,在体外及体内均能高效表达人源化抗体Herceptin。Western印迹显示
- 郭明高姜明红杨琴李月敏崔贞福李林芳吴孟超钱其军
- 关键词：介导作用基因治疗卵巢癌HERCEPTIN赫赛汀
- 腺病毒介导的T细胞高效基因表达系统的构建
- 2015年
- 结合转基因修饰的手段,能有效提高细胞免疫治疗的疗效,但由于缺乏T细胞高活性表达系统,限制了该方法的应用。构建腺病毒介导的双荧光素酶启动子活性筛选系统,检测一系列常用强启动子(CMV、CMV(in)、CAG、EF1α及CASI)在T细胞株K562及Jurkat中的活性,发现EF1α启动子活性在T细胞株中的活性最高。在EF1α的基础上,增加mCMV增强子和hCMV增强子顺式作用元件,构成了2个新型嵌合型启动子CCEF及CCEF(in)。双荧光素酶检测系统检测结果表明,新构建的2个启动子在T细胞中的活性高于EF1α,且两者相比CCEF启动子活性更高(p<0.05)。利用CCEF启动子控制PD-1全长抗体基因,并将此表达框插入腺病毒基因组,构建重组腺病毒Ad-CCEF-anti-PD-1。通过Western blotting及ELISA方法检测病毒感染T细胞株后,抗体基因的表达效率。结果表明,Ad-CCEF-anti-PD-1感染T细胞后,PD-1抗体能在T细胞中正确表达,且表达量较高(K562中11.019μg/mL,Jurkat中9.078μg/mL),表明该腺病毒介导的T细胞高效的基因表达系统成功构建,具有良好的应用前景。
- 刘品一吕赛群崔磊李振海黎江李林芳吴红平金华君钱其军
- 关键词：腺病毒启动子PD-1
- 靶向端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体的构建
- 人体各种类型的恶性肿瘤几乎都可以检测到高水平的端粒酶活性,因此端粒酶已成为肿瘤治疗的新靶点。本文通过构建hTERT启动子控制的特异性针对端粒酶阳性肿瘤的增殖缺陷型腺病毒载体,比较分析了该载体携带绿色荧光蛋白报告基因(EG...
- 苏长青王星华崔贞福吴红平李林芳姜梨华钱炎珍吴孟超钱其军
- 文献传递
