李志清
- 作品数：6 被引量：59H指数：4
- 供职机构：暨南大学抗体工程研究中心更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省教育部产学研结合项目更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程生物学更多>>
- 免疫磁珠富集技术联合选择性培养基快速检测单增李斯特菌被引量：25
- 2013年
- 单增李斯特菌是一种危害极大的食源性致病菌，建立快速及特异的检测方法对于食品安全监控尤为重要。丈中联合免疫磁珠与选择性培养基对不同浓度（10^1～10^5CFU／mL）单增李斯特菌进行检测，并对3种李斯特菌、金黄色葡萄球菌及副溶血弧菌进行交叉试验；同时模拟食物污染，探索免疫磁珠．平板法检测样品的检测限以及该方法的最快检测时间。结果显示特异性免疫磁珠联合选择性平板法可检出浓度为10^3 CFU／mL及以上的单增李斯特菌；牛奶样品仅需6h增菌能被检出，检测限为0．7CFU／mL。联合使用免疫磁珠富集技术与选择性培养基，能在30h内完成对牛奶样品的检测，较国标法减少38h以上，且具有同等的灵敏度。
- 闻一鸣李志清童吉宇向军俭
- 关键词：单增李斯特菌免疫磁珠选择性培养基检测限
- 单增李斯特菌溶血素(LLO)的原核表达及其生物学活性鉴定被引量：10
- 2011年
- 利用生物软件设计单增李斯特菌溶血素蛋白的基因hly的引物,通过PCR扩增hly基因,并将其克隆至PET28a(+)原核表达载体,转化大肠杆菌BL21进行优化表达。用镍柱纯化表达产物LLO,通过免疫印记鉴定其免疫原性,并通过溶血实验鉴定其溶血活性。琼脂糖凝胶电泳结果表明PCR扩增出1 590 bp的片段,经测序鉴定其序列同源性可达99%。SDS-PAGE结果表明诱导表达的产物大小约为58 kD,其最优化的表达条件是28°C下用0.1 mmol/L IPTG诱导6 h。Western blotting结果表明重组表达的LLO具有免疫原性;溶血实验表明重组表达的LLO具有较强的溶血活性,其溶血效价可达1:1 024。这为制备针对单增李斯特菌的单克隆抗体及其检测方法的建立奠定了基础。
- 林婷婷杨晶李志清王彩霞向军俭
- 关键词：溶血素单增李斯特菌
- 单增李斯特菌免疫磁珠的制备研究被引量：15
- 2012年
- 目的:制备可高效、特异地分离单增李斯特菌的免疫磁珠。探讨羧基修饰磁珠与多克隆抗体的不同偶联条件和免疫磁珠捕获单增李斯特菌的能力。方法:以单增李斯特菌作为抗原,免疫新西兰兔,获得兔源多克隆抗体,鉴定其与单增李斯特菌体的结合能力;选择6种不同的偶联缓冲溶液,设置了6个主要偶联时间和6组偶联温度,通过比较磁珠与抗体偶联后上清中剩余的抗体量来确定最佳偶联条件。结果:制备的多克隆抗体效价为1.3×105,该抗体与单增李斯特菌体有较好的结合,抗体与1mg羧基修饰磁珠在pH6.0的0.01mol/L一水吗啉乙磺酸缓冲溶液(MES)中,37℃偶联2h,偶联抗体的量为160μg;制得的免疫磁珠的捕获率可达77.0%。结论:获得羧基磁珠与抗体偶联的最佳条件,该免疫磁珠用于食品中单增李斯特菌的检测,与常规的平皿增菌培养显色法比较,检测时间至少缩短20h。
- 徐金亭李志清向军俭唐勇杨红宇
- 关键词：免疫磁珠单增李斯特菌偶联
- 单增李斯特菌InternalinA的表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：3
- 2012年
- 【目的】克隆表达单增李斯特菌膜表面蛋白InternalinA(InlA),经免疫家兔获得多克隆抗体,为建立其免疫磁珠富集快速检测方法奠定基础。【方法】利用生物软件设计单增李斯特菌inlA基因的引物,通过PCR扩增出inlA基因,并将其克隆至pET28a()原核表达载体,转化大肠杆菌BL21进行优化表达。镍柱纯化表达产物,质谱鉴定重组蛋白,ELISA分析其免疫原性。免疫家兔,制备其多克隆抗体。间接ELISA检测多抗的效价及交叉性,免疫荧光分析多抗与单增李斯特菌菌体结合的特异性。【结果】成功表达了InlA蛋白,融合表达产物分子量约为92 kD,质谱鉴定其为InlA蛋白;免疫家兔获得的抗血清效价为1:100 000,除与金黄色葡萄球菌约20%的交叉外,与副溶血弧菌等其它病源菌均无交叉;免疫荧光证实该多抗特异性结合于单增李斯特菌膜表面,与同种属的威尔斯李斯特菌不结合。【结论】成功制备了单增李斯特菌特异性的兔多克隆抗体,为单增李斯特菌免疫磁珠富集快速检测方法的建立奠定了基础。
- 李志清向军俭李雨辰闻一鸣杨红宇
- 关键词：单增李斯特菌多克隆抗体
- 单增李斯特菌特异性的膜表面蛋白的抗体的制备
- 目的：制备针对单增李斯特菌(L. monocytogenes)膜表面蛋白的高亲和力高特异性的抗体是建立其免疫学检测方法的基础。本研究通过两种方法来获得L.monocytogenes特异性的膜表面抗体。①克隆表达单增李斯特...
- 李志清
- 关键词：单增李斯特菌
- 文献传递
- 原核表达MurA蛋白并制备其多克隆抗体用于免疫磁珠快速检测单增李斯特菌被引量：10
- 2014年
- 【目的】制备MurA多抗,结合免疫磁珠与选择平板进行单增李斯特菌的快速检测,建立单增李斯特菌的免疫磁珠快速检测方法。【方法】构建MurA的原核表达载体,转化大肠杆菌进行优化表达。镍柱纯化表达产物,质谱鉴定重组蛋白,再免疫小鼠,制备其多克隆抗体。用所获多抗制备免疫磁珠,建立单增李斯特菌免疫磁珠-选择性培养基检测方法,并对人工污染牛奶样品进行检测。【结果】在大肠杆菌中高效表达了分子量约为72 kD的可溶性融合蛋白,质谱鉴定其为MurA蛋白;免疫小鼠获得的抗血清效价达1:10 000,与伤寒沙门氏菌、副溶血弧菌、大肠杆菌及属内其它病原菌均无交叉;所建立的免疫磁珠-选择性培养基检测法可检出浓度为103 CFU/mL及以上的单增李斯特菌,仅与英诺克李斯特菌存在一定交叉反应;牛奶样品单次仅需9 h增菌就能被检出,较常规增菌时间缩短39 h;检测限为0.4 CFU/mL。【结论】表达并纯化得到高纯度的单增李斯特菌MurA蛋白,制备的鼠源多克隆抗体亲和力高,特异性好;建立了快速检测单增李斯特菌的免疫磁珠联合选择性培养基法,在灵敏度不变的情况下,实现24 h内成功对牛奶样品的检测,较国标法减少42 h以上。
- 童吉宇李志清闻一鸣李雨辰向军俭
- 关键词：单增李斯特菌多克隆抗体免疫磁珠
