李丽薇
- 作品数：73 被引量：39H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 一株串联表达非洲猪瘟病毒P30、P54基因重组伪狂犬病毒基因工程疫苗及其应用
- 本发明提供一株串联表达非洲猪瘟病毒P30、P54基因重组伪狂犬病毒基因工程疫苗及其应用，本研究以PRV JS‑2012‑ΔgI/gE株为基础，利用同源重组的方法，将现今国内流行的非洲猪瘟病毒的主要抗原蛋白(P30、P54...
- 童武周艳君童光志包玮玲高飞郑浩李国新于海单同领姜一峰虞凌雪刘长龙李丽薇孔宁
- 猪PCSK9单克隆抗体的制备及其在PRRSV感染过程中的应用
- 2023年
- 实验室前期shot-gun质谱结果表明PCSK9在PAM空细胞和PRRSV感染组PAM细胞间存在差异表达。为了深入研究PCSK9与PRRSV间的相互作用机制,本实验在体外合成猪PCSK9基因并克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28aPCSK9。利用该原核表达系统获得了高效表达的重组蛋白PCSK9(约75kDa),进一步通过镍柱亲和层析技术纯化重组蛋白PCSK9作为免疫原,皮下免疫5-6周龄的BALB/c小鼠(100ng/只),获得了1株产生PCSK9特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2A2B12)。应用此单克隆抗体对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染PAM细胞后的内源性PCSK9变化情况进行了检测。Western blot和IFA结果表明本实验制备的PCSK9单克隆抗体具有良好的特异性,抗体针对的表位位于PCSK9的C端结构域(463-705 aa);此外,Western blot结果表明PRRSV感染可抑制PCSK9蛋白的表达,过表达PCSK9对PRRSV的复制有明显的抑制作用。本研究中研制的抗体可为今后猪源PCSK9与PRRSV的相互作用研究提供工具支持。
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- 关键词：PCSK9单克隆抗体PRRSV
- 三株与HP-PRRSV疫苗株高度同源的高致病性猪繁殖和呼吸综合征病毒的分离鉴定
- 引言 2012年江苏省某未使用过HP-PRRSV疫苗的猪场保育猪群中出现疑似PRRS症状,导致大部分仔猪死亡。从发病猪血清中分离到三株猪繁殖和呼吸综合征病毒,命名为NT1、NT2和NT3,鉴定分析结果显示三株病毒可能来源...
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- 现阶段国内猪繁殖与呼吸综合征病毒流行情况分析
- <正>引言猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)自1996年首次在国内分离以来不断变异,2006年出现高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)给我国养猪业造成了巨大损失。近些年来PRRSV变异株在田间不断出现,包...
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- 文献传递
- PRRSV强弱毒感染猪肺泡巨噬细胞microRNA表达谱的差异分析
- <正>猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是动脉炎病毒属的成员,可引起猪繁殖与呼吸综合征。该病以母猪晚期流产和仔猪呼吸疾病为主要特征,每年给养猪业带来巨大损失,故确定PRRSV感染对细胞基因调控网络的影响是当务之急。小的...
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- 关键词：肺泡巨噬细胞
- 文献传递
- 表达荧光素酶基因的重组PRRSV在指征病毒增殖中的应用
- <正>猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是引起猪繁殖与呼吸综合征的致病病原,目前PRRS已成为危害世界养猪业的重要疫病之一。本研究基于高致病性PRRSV细胞致弱株HuN4-F112的反向遗传操作平台,运用SOE PCR...
- 高飞李丽薇姜一峰虞凌雪张玉娇杨莘周艳君童光志
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光素酶基因病毒增殖生物学特性
- 文献传递
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株作为外源基因表达活病毒载体的研究
- 2023年
- 利用反向遗传操作技术,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)也可以被用作外源基因表达的活载体。前期研究将猪瘟病毒E2蛋白的编码基因插入了高致病性PRRSV弱毒疫苗株HuN4-F112的非结构蛋白和结构蛋白编码间区,所拯救的重组病毒rPRRSV-E2能够在体外和体内高效表达E2蛋白。能够为猪瘟和HP-PRRS的感染提供100%的免疫保护。本研究利用rPRRSV-E2的全长感染性克隆平台,在PRRSV基因组ORF7和3'非翻译区之间插入了转录调控序列6(TRS6)和绿色荧光蛋白的编码基因,构建并拯救了重组病毒rPRRSV-E2-EGFP,该病毒感染MARC-145细胞后,可以同时表达猪瘟E2蛋白和EGFP。外源序列在载体中能够保持遗传稳定。本研究为开发PRRSV作为病毒活载体疫苗提供了一个新的外源基因插入位点和构建策略,对今后多价疫苗的研发有重要意义。
- 陈金霞张宽张玉娇杜楠楠郑海红李丽薇周艳君周艳君童武虞凌雪童光志童武
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒外源基因表达
- 一种重组表达PEDV S蛋白受体RBD结构域的PRRSV活载体疫苗株的构建及应用
- 本发明提供一种重组表达PEDV S蛋白受体RBD结构域的PRRSV活载体疫苗株的构建及应用，结果表明拯救出的重组病毒rHuN4‑F112‑SRBD1能够表达PEDV S蛋白RBD功能域的优势抗原区域，且重组病毒的生物学特...
- 周艳君童光志劳梦琴陈鹏飞虞凌雪高飞姜一峰刘长龙童武李国新于海李丽薇郑浩
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒感染肺泡巨噬细胞后差异表达膜蛋白的鉴定与分析被引量：3
- 2019年
- 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是危害养猪业发展的重要传染病之一。2006年我国首次爆发高致病性PRRS(highly-pathogenicPRRS,HP-PRRS),与经典的PRRS相比,HP-PRRS发病率和死亡率均显著升高。目前,对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly-pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV)引起的高发病率和高死亡率的机制仍不清楚。本研究利用1MOI的EGFP标记的HP-PRRSV毒株HuN4(rHuN4-EGFP)和其体外传代致弱毒株HuN4-F112(rHuN4-F112-EGFP)分别感染肺泡巨噬细胞(pulmonaryalveolarmacrophage,PAM),24h后通过流式细胞术,从FITC通道收集被PRRSV强弱毒感染的PAM,提取膜蛋白进行Shotgun质谱分析。试验最终获得82个在强弱毒感染PAM过程中存在差异表达的膜蛋白。感染rHuN4-EGFP的样品与未感染样品相比,有72个蛋白特异表达;感染rHuN4-F112-EGFP的样品与未感染样品相比,有12个蛋白特异表达。通过GO分析发现,这些蛋白主要参与代谢、生物调节与细胞加工过程,大多数蛋白具有结合、催化活性。进一步在MARC-145细胞上过表达部分差异膜蛋白,发现其中前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9(proprotein coverteases subtilism/kexin 9,PCSK9)能明显抑制PRRSV强毒株和弱毒株的复制,Clusterin、Apoliprotein C-II能促进PRRSV强毒株复制。本研究表明利用Shotgun质谱技术鉴定出的差异表达膜蛋白对PRRSV复制有影响,深入分析PRRSV感染后差异表达的膜蛋白变化将有利于进一步明确其致病机制。
- 张玉娇高飞曲泽慧曲泽慧姜一峰虞凌雪周艳君虞凌雪李丽薇
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒肺泡巨噬细胞膜蛋白
- 表达海肾或萤火虫荧光素酶基因的PRRSV重组质粒的构建方法以及应用
- 本发明提供了一种表达海肾荧光素酶和萤火虫荧光素酶基因的蓝耳病病毒(PRRSV)重组质粒的构建方法，及其应用。基于反向遗传操作平台，将海肾荧光素酶和萤火虫荧光素酶基因插入到pHuN4-F112基因组中，成功构建了pA-Rl...
- 高飞童光志周艳君姜一峰曲泽惠李丽薇虞凌雪郑浩
- 文献传递
