景刚
- 作品数：12 被引量：12H指数：2
- 供职机构：山西医科大学第二医院更多>>
- 发文基金：山西省自然科学基金山西省科技攻关计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组人类核心蛋白聚糖对白血病K562细胞增殖的影响被引量：4
- 2012年
- 目的观察重组人类核心蛋白聚糖（rhDCN）对白血病K562细胞生长抑制、凋亡的影响，并探讨可能的作用机制。方法通过Lipofectamine 2000脂质体介导转染对数生长期的白血病K562细胞，实验分组为0．9％NaCl溶液组、pcDNA3．1（＋）／K562组、pcDNA3．1（＋）一DCN／K562组和脂质体组。经瑞特染色观察转染后细胞形态的改变，MTT法检测细胞增殖活性，流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡，Westernblot法检测细胞凋亡相关蛋白bcl—xl、Mcl-1及Bax的表达。结果pcDNA3．1（＋）．DCN／K562组瑞特染色呈现典型的凋亡形态学改变。MTF结果显示，pcDNA3．1（＋）．DCN／K562组转染24h细胞增殖抑制率为（16．14±1．08）％，转染48h为（14．07±1．01）％，转染72h为（20．29±1．19）％，明显高于对应时间点其他组增殖抑制率，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。FCM检测结果显示，pcDNA3．1（＋）．DCN／K562组凋亡率为（20．15±1．31）％、细胞的Go／G，期细胞百分率为（51．15±0．57）％，与其他各组比较增加明显，差异有统计学意义（均P〈0．05）。Westernblot结果显示，pcDNA3．1（＋）-DCN／K562组与其他各组比较bcl-xl、Mcl-1蛋白表达减低，Bax蛋白表达升高。结论rhDCN重组质粒可有效抑制K562细胞增殖，并诱导其凋亡，rhDCN对细胞周期及凋亡相关蛋白bcl-xl、Mcl-1、Bax的影响可能是其发挥作用的机制。
- 景刚张瑜郭存九朱爱萍王桂琴王艳红
- 关键词：核心蛋白聚糖K562细胞BCL-XLMCL-1BAX
- 重组人核心蛋白聚糖基因增强多柔比星对白血病K562细胞抑制作用的实验研究
- 2010年
- 目的 探讨重组人核心蛋白聚糖（rhDCN）基因增强多柔比星（ADM）对人类白血病K562细胞的作用.方法 取对数生长期的K562细胞分为0.9%NaCl溶液组、pcDNA3.1（＋）-DCN/K562组、ADM/K562组、pcDNA3.1（＋）-DCN加ADM/K562组.瑞特染色观察细胞形态改变,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡,RT-PCR分析各组TGF-β1mRNA含量.结果 pcDNA3.1（＋）-DCN加ADM/K562组细胞比单独DCN和ADM组细胞,染色呈现更显著的凋亡形态学改变;MTT法结果显示联合组细胞增殖抑制率为（61±1.32）%,明显高于单独干预组[DCN组（20±1.90）%;ADM组（47±1.04）%]（P〈0.05）;FCM检测结果显示联合组细胞凋亡指数为（61.30±0.9）%,较单独干预组[DCN组（28.25±1.3）%及ADM组（31.85±1.5）%]明显增加（P〈0.05）;RT-PCR结果显示,联合组细胞TGF-β1mRNA的转录减少.结论 rhDCN可以明显增强ADM对K562细胞的杀伤作用,提高肿瘤细胞的凋亡率.rhDCN可能通过下调TGF-β1mRNA的转录发挥其作用,其具体机制有待进一步研究.
- 景刚王桂琴张瑜王艳红常江于培霞
- 关键词：蛋白聚糖类多柔比星TGF-Β1MRNA
- 人白细胞介素24真核表达载体的构建及其在HepG2细胞中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的构建人白细胞介素24（humaninterleukin-24，hIL-24）真核表达载体，并在HepG2细胞中稳定表达，为进一步研究其抗肿瘤作用奠定基础。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR），从植物血凝素活化的人外周血单个核细胞中克隆得到hIL-24基因目的片段。应用DNA重组技术将IL-24PCR产物双酶切后定向克隆至真核表达载体peDNA3．1（＋），转化大肠杆菌DH5a获得重组载体，进行PCR、酶切及测序鉴定。应用脂质体将鉴定正确的重组质粒转染至HepG2细胞，用G418筛选稳定转染细胞株。采用RT—PCR检测稳定转染细胞HepG2中IL-24mRNA的表达。结果通过RT—PCR获得与预期大小一致约600bp的IL-24基因片段；重组载体pcDNA3．1（＋）-IL-24经PCR、双酶切及测序证实，IL-24cDNA片段已正确插入真核表达载体中；在稳定转染的HepG2细胞株中可见到IL-24mRNA表达。结论成功构建了hIL-24真核表达载体peDNA3．1（＋）-IL-24，并获得了稳定转染该重组质粒的HepG2细胞株。
- 于培霞冀永进王桂琴常江景刚王艳红
- 关键词：白细胞介素类基因表达HEPG2细胞
- 核心蛋白聚糖协同白细胞介素24对人外周血单个核细胞作用的体外研究
- 2010年
- 目的 探讨核心蛋白聚糖（decorin,DCN）联合白细胞介素24（interleukin-24,IL-24）对人外周血单个核细胞（human peripheral blood mononuclear cell,PBMC）增殖及分泌干扰素γ（Interferon-γ,IFN-γ）的影响.方法 构建重组质粒pcDNA3.1（＋）-DCN和pcDNA3.1（＋）-IL-24,并利用脂质体将两种质粒转染PBMC.根据转染质粒的不同将PBMC分为空白对照组、脂质体组、空质粒组、DCN组、IL-24组、DCN与IL-24联合组.采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测PBMC的增殖,ELISA测定细胞培养上清中IFN-γ的表达,流式细胞技术检测PBMC表面程序性死亡分子1（PD-1）的表达.采用LSD-t检验进行统计学分析.结果 重组质粒pcDNA3.1（＋）-IL-24构建成功.与其他组相比,DCN与IL-24联合能显著提高PBMC增殖率和IFN-γ分泌量,同时也能上调PD-1的表达水平.结论 DCN与IL-24双基因联合在体外能促进PBMC的增殖,并能增强PBMC的功能.
- 常江王桂琴李欣欣于培霞景刚王艳红
- 关键词：蛋白聚糖类白细胞介素类
- 垂体激素检查在垂体瘤诊断中的应用被引量：2
- 2021年
- 垂体瘤(pituitary adenomas)是指一种能够在垂体及颅咽管发生病变的肿瘤,是生长比较缓慢的颅内常见肿瘤之一[1,2]。在内分泌系统中它的发病率仅低于甲状腺肿瘤,当前垂体瘤的发病率大概是1/10万,在所有的颅内肿瘤的发生中,大约占10%~15%~[3]。垂体瘤可发生在任何年龄,以30~50岁者居多[4]。目前对于垂体瘤的诊断来说影像学检查是一种极其重要的手段,其中对于垂体瘤的检出率最高、最有意义的方法是以鞍区的核磁共振(MRI)检查[5]。
- 景刚朱爱萍范颖蕊
- 关键词：颅内肿瘤垂体瘤内分泌系统垂体激素影像学检查
- 检测外周血促黄体生成素对垂体瘤的临床诊断价值被引量：3
- 2019年
- 垂体瘤是颅内最常见的良性肿瘤之一[1,2],其主要类型有泌乳素腺瘤[2,3]、生长激素腺瘤和无功能腺瘤[3,4].目前有关垂体瘤的诊断方面,以鞍区的磁共振成像(MRI)检查为主,但由于其灵敏性和特异性较低,往往延误患者的最佳治疗时间,导致其预后不佳[5].本研究拟开展外周血促黄体生成素(LH)检查[6],希望从激素水平着手,进一步增加早期垂体瘤患者的确诊率,改善预后.
- 景刚张咪咪朱爱萍郭先锋
- 关键词：临床诊断价值促黄体生成素垂体瘤外周血生长激素腺瘤无功能腺瘤
- 糖尿病患者血浆Apelin光密度值与肺功能的关系被引量：1
- 2017年
- 目的研究2型糖尿病患者血浆Apelin光密度(optical density,OD)变化水平与肺弥散功能的关系。方法选择2015-01~2015-12在山西医科大学第二医院拟行骨科手术患者90例,将受试对象按术前糖化血红蛋白(HbA_(1c))水平分为三组:Ⅰ组(HbA_(1c)>7.0%),Ⅱ组(6.5%
- 范俊柏赵艳红秦文艳郭政杨建新宋涛景刚
- 关键词：糖尿病APELIN肺功能
- 中介素对脂多糖诱导巨噬细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体活化及细胞焦亡的影响
- 2022年
- 目的利用脂多糖刺激的小鼠巨噬细胞系RAW 264.7,研究中介素对腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)诱导的核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化和细胞焦亡的影响及其机制。方法细胞分组为:对照组,脂多糖组,中介素处理组,磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)阻滞剂LY294002组。实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测细胞NLRP3炎症小体的激活情况及炎症因子IL-1β和IL-18表达,碘化丙锭(PI)染色法检测细胞焦亡的改变。计量资料以±s表示,组间差异比较采用方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果与对照组[(0.83±0.09),(0.49±0.04)]比较,脂多糖组磷酸化(p)-PI3K/PI3K(0.44±0.05),p-Akt/Akt(0.27±0.06)比值均显著降低,与脂多糖组相比,脂多糖+中介素组细胞中p-PI3K/PI3K(1.22±0.18),pAkt/Akt(0.83±0.09)比值均显著升高(F=31.40,P<0.001;F=50.88,P<0.001)。与对照组比较,脂多糖组(脂多糖和ATP)可刺激RAW264.7细胞炎症因子IL-1β、IL-18和NLRP3炎症小体(NLRP3,caspase-1,ASC)的mRNA及蛋白表达上调;与脂多糖组相比,中介素处理可抑制炎症因子IL-1β、IL-18和NLRP3炎症小体表达,这种效应可被PI3K/Akt通路的阻滞剂LY294002所阻断。Real-time PCR结果显示,IL-1βmRNA相对表达量:对照组为(1.00±0.11),脂多糖组为(8.32±0.61),脂多糖+中介素组为(8.32±0.55),脂多糖+中介素+LY组为(7.23±0.41)(F=15.42,P<0.001);IL-18 mRNA相对表达量:对照组为(1.00±0.17),脂多糖组为(1.82±0.21),脂多糖+中介素组为(1.14±0.15),脂多糖+中介素+LY组为(1.53±0.11)(F=18.16,P<0.001);NLRP3 mRNA相对表达量:对照组为(1.00±0.13),脂多糖组为(2.58±0.18),脂多糖+中介素组为(1.07±0.17),脂多糖+中介素+LY组为(1.33±0.32)(F=15.98,P<0.001);caspase-1 mRNA相对表达量:对照组为(1.00±0.09),脂多糖组为(6.20±0.19),脂多糖+中介素组为(3.43±0.06),脂多糖+中介素+LY组为(5.50±0.45)(F=18.39,P<0.001);ASC mRNA相对表达量:对照组为(1.00±0.21)
- 景刚张军锋朱爱萍杨佳常思佳黄太平王艳红
- 关键词：巨噬细胞脂多糖类中介素PI3K/AKT信号通路
- DNA损伤特异性结合蛋白1在肝癌组织中的表达及其对SMMC-7721细胞同源重组修复、靶向杀伤作用的影响被引量：1
- 2022年
- 目的探讨DNA损伤修复因子DNA损伤特异性结合蛋白1(DDB1)在肝癌组织中的表达情况及DDB1基因沉默对人肝癌SMMC-7721细胞DNA损伤修复和靶向杀伤作用的影响。方法利用UALCAN平台对癌症基因组图谱(TCGA)数据库中肝细胞肝癌组织(371例)和癌旁组织(50例)中DDB1的表达情况及DDB1表达与肝癌患者总生存的相关性进行生物信息学分析。向SMMC-7721细胞转染靶向DDB1的小干扰RNA(siRNA)和阴性对照siRNA, 分别为DDB1沉默组和阴性对照组。用X线照射诱导两组细胞外源性DNA双链断裂(DSB)损伤, 采用免疫荧光染色(γH2AX用于评估DSB损伤情况, RPA32s33和Rad51用于评估同源重组修复情况)和蛋白质印迹法(检测RPA32s33蛋白水平)分析DDB1基因沉默对细胞DSB损伤修复的影响。采用姐妹染色体交换(SCE)实验分析DDB1沉默组和阴性对照组细胞同源重组SCE频率。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法分析PARP抑制剂奥拉帕尼(10 μmol/L)、顺铂(1 μg/ml)及二者联合杀伤DDB1沉默组和阴性对照组SMMC-7721细胞的效果。结果生物信息学分析发现, 肝癌组织DDB1 mRNA水平较癌旁组织高(P<0.001), DDB1高表达患者总生存较DDB1低表达患者差(P=0.029)。X线照射后培养24 h, 阴性对照组细胞γH2AX灶点已大多消退, DDB1沉默组细胞仍较多[每个细胞中(5.1±2.0)个比(13.4±2.0)个, t=-5.08, P=0.007]。X线照射后培养4 h, 阴性对照组RPA32s33灶点数[每个细胞中(30.8±5.0)个比(13.2±1.6)个]和Rad51灶点数[每个细胞中(19.5±1.8)个比(8.3±3.3)个]均高于DDB1沉默组, 两组间差异均有统计学意义(均P<0.01)。阴性对照组SCE频率高于DDB1沉默组[(21.2±3.0)%比(11.2±1.6)%, t=5.07, P=0.007]。MTT法检测显示, 奥拉帕尼作用后, DDB1沉默组细胞的存活率低于阴性对照组[(40.3±3.6)%比(79.8±1.3)%, t=17.94, P<0.001], 奥拉帕尼联合顺铂时, 两组细胞存活率均进一步降低, 且DDB1沉默组细胞存活率低于阴性对照组[(10.2±2.8)%比
- 景刚关坤萍朱爱萍薛耀勤
- 关键词：DNA损伤
- 丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡及分裂的影响
- 2022年
- 目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)NS3/4A蛋白对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡及分裂的影响。方法采用同源重组方法构建重组质粒pLV-Green-NS3/4A和pLV-puro-NS3/4A, 将细胞分为pLV-Green-NS3/4A或pLV-puro-NS3/4A转染组及其相应对照组(转染空载体)。采用免疫荧光染色和蛋白质印迹法检测重组蛋白表达情况, 四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力, DAPI染色法检测细胞凋亡情况, 免疫荧光分析细胞有丝分裂情况。结果 pLV-Green-NS3/4A转染组SMMC-7721细胞的生长状态差于相应空载体对照组;与相应空载体对照组比较, 第3、4天pLV-Green-NS3/4A转染组SMMC-7721细胞增殖活性均被抑制(均P<0.05)。pLV-Green-NS3/4A转染组和相应空载体对照组细胞凋亡率分别为(20.3±3.5)%和(5.3±1.5)%, 差异有统计学意义(t=-8.57, P<0.001)。与相应的空载体对照组比较, pLV-puro-NS3/4A转染组细胞出现更多的多极纺锤体, 两组多极分裂率分别为(2.33±0.58)%、(6.01±0.99)%, 差异有统计学意义(t=-5.50, P=0.005)。结论 HCV NS3/4A可抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖、促进细胞凋亡和多极分裂。
- 李续亮景刚
- 关键词：肝炎病毒丙型细胞分裂
