徐汉卿
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中国农业科学院研究生院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 拟除虫菊酯类农药降解酯酶EstA融合蛋白表达质粒的构建和诱导条件优化被引量：4
- 2014年
- 以前期克隆得到的拟除虫菊酯类农药降解基因estA(GenBank:DQ906143)为出发基因,构建表达系统,获得可溶性融合蛋白,并通过优化诱导表达条件,获得具有实际应用价值的相关应用参数。结果表明,成功构建了重组表达载体pMal-c2X-estA并转化至宿主菌BL21(DE3),获得酯酶estA基因诱导表达系统;通过SDS-PAGE凝胶电泳、以α-乙酸萘酯为底物的酶活性检测及Western blot方法,确认外源蛋白EstA在大肠杆菌宿主菌中成功表达并具有酯酶活性。重组基因工程菌可溶性原核表达诱导条件的优化试验表明,其最佳诱导表达条件是:Ca2+浓度1.0mmol/L、诱导初始OD600值0.7、诱导剂IPTG浓度0.1mmol/L、诱导初始pH值7、诱导温度26℃、诱导时间17.5h,优化后的酯酶活性(92.03U/mg)较优化前(44.64U/mg)提高了1倍多。
- 刘娜徐汉卿崔健茆灿泉许雷
- 关键词：拟除虫菊酯类农药酯酶可溶性蛋白
- 中华根瘤菌NP1腺苷酸激酶基因的克隆与功能鉴定
- 2012年
- 以中华根瘤菌NP1(Sinorhizobium sp.NP1)为原始菌株,通过同源克隆的方法,获得了579bp的腺苷酸激酶基因(adk)全长序列.该基因编码192个氨基酸,其二级结构和三级结构与Sinorhizobium meliloti 1021 ADK的二级结构和三级结构相似.以表达载体pET21b为原始载体,构建成NP1 adk原核表达载体pET21b-adk,转化E.coli BL21菌株,SDS-PAGE检测表明:adk基因获得高效表达.HPLC测定证实:重组表达菌中ATP含量约为对照的1.3倍.上述结果证明本实验中所克隆的腺苷酸激酶基因具增强ATP合成的功能.
- 窦鑫邱枫许玮徐汉卿许雷
- 关键词：腺苷酸激酶基因克隆原核表达高效液相色谱
