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徐伟文: 作品数：98 被引量：303H指数：9; 供职机构：南方医科大学检验与生物技术学院更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金广州市重大科技攻关项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学轻工技术与工程更多>>

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肠道病毒71型实时荧光RT-PCR检测方法的建立及临床评价被引量：3: 2010年; 目的利用实时荧光RT-PCR技术,并通过系统的分析性能和临床性能评价,建立一种早期快速检测肠道病毒71型(EV71)的方法。方法根据EV71基因组中编码衣壳蛋白VP1基因保守区序列设计一对引物和一条荧光探针,利用实时荧光RT-PCR技术建立了检测EV71的方法,并对扩增产物进行分析,同时进行灵敏度、特异性、精密度评价,在此基础上利用不同标本类型共1104例临床样本对本方法和RT-PCR方法进行对比分析。结果本方法可以特异性的检测EV71,而对种属相近的或引起症状相似的其他病毒均无交叉反应。本方法检测灵敏度达到9.22×102PFU/ml,不同浓度样本的Ct值的变异系数在1.4%～2.9%之间。1104例临床样本的研究显示本方法与RT-PCR方法检测结果的总符合率达到96.74%,阳性样本的检出率要高于RT-PCR方法。结论本方法检测EV71具有灵敏度高、特异性强、精密度高、快速简便的特点,并与RT-PCR方法具有很好的符合率,在手足口病的早期快速诊断和疫情监测方面具有很好的应用前景。; 朱坤高秀杰邓中平徐伟文高旭年李明; 关键词：肠道病毒71型实时荧光RT-PCR 性能评价

人酪氨酸激酶6原核表达载体的构建、表达、纯化与鉴定: 2011年; 目的构建人络氨酸激酶6(PTK6)与His融合蛋白重组表达载体,在大肠杆菌中诱导表达,并对重组蛋白进行纯化。方法通过PCR在编码PTK6的cDNA序列两端添加EcoR I和BamH I酶切位点,双酶切后将编码PTK6的cDNA序列亚克隆至原核表达载体PHUE构建重组蛋白表达载体PHUE/PTK。重组载体经鉴定后转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)感受态细胞。IPTG诱导重组蛋白表达。收集菌体裂解后,用尿素洗涤和溶解包涵体。溶解上清经Ni-NTA亲和层析柱纯化,并用SDS-PAGE和Western blotting检测纯化产物。结果成功构建人PTK6重组蛋白原核表达载体,重组蛋白以包涵体形式表达,其相对分子质量为55 000,与预期一致。亲和层析纯化产物的SDS-PAGE和Western blotting鉴定表明获得纯度大于80%的目的重组蛋白。结论人PTK6 His融合蛋白的纯化为多克隆及单克隆抗体的制备以及结构和功能的研究奠定了基础。; 杨学习谢美娟李欣李粉霞徐伟文李明; 关键词：表达载体构建纯化

GP73与肝癌关系的研究进展被引量：7: 2013年; 肝癌是常见的恶性肿瘤之一,恶性程度高、死亡率高,其早期诊断对于病人的治疗极为重要。目前临床广为使用的甲胎蛋白检测与影像学相结合的方式,在早期肝癌的敏感性和特异性诊断方面尚存在一些缺陷,寻找更有效的新肿瘤标志物是临床期盼的需求。高尔基体糖蛋白73(Golgi protein-73,GP73)是存在于高尔基体的一种II型跨膜糖蛋白,在早期肝癌患者血清内表达上调,近年来有很多研究认为GP73是最有潜力的肝癌血清标志物之一。本文就近年来GP73与肝癌关系的研究进展做综述。; 吴婧徐伟文; 关键词：肝癌 GP73

HE4在早期卵巢癌诊断中的价值被引量：11: 2013年; 卵巢癌在女性妇科肿瘤中致死率占首位,但其发病隐匿导致早期诊断困难。随着国内外研究的不断深入,人附睾分泌蛋白4(human epididymis secretory protein 4,HE4)在诊断早期卵巢癌方面的价值也越来越受到普遍关注。本文就此方面做一综述。; 张琼余娟平徐伟文; 关键词：卵巢癌 HE4 肿瘤标志物

联合免疫在高通量单克隆抗体制备中的初步评价与分析被引量：1: 2007年; 目的了解联合免疫在高通量单克隆抗体制备中的意义。方法对本室两年来105次联合免疫和单一抗原免疫的融合进行回顾性分析。结果联合免疫的融合率、建株率、最终成功率与单一抗原免疫均无明显差异,但所花费时间短、免疫成本及融合成本低。结论联合免疫方案短期内可使单克隆抗体的产出率显著提高,制备周期明显缩短,是一种可以选择的高通量制备单克隆抗体策略。; 徐伟文徐洲稳郝文波姚小艳王穗海李明; 关键词：联合免疫单克隆抗体高通量

人巨细胞病毒部分抗原基因的克隆及表达被引量：3: 2007年; 目的克隆表达人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)特异性强的抗原决定簇基因,制备特异性抗原。方法从感染HCMV的细胞上清液中提取病毒基因组DNA,用PCR扩增HCMVpp150(ppUL32)、gp52(UL44)、pp65(ppUL83)、ppUL80a蛋白IgM抗原决定簇编码区DNA序列,将其克隆至pMD-18T载体并测序,然后克隆至表达载体pGEX-4T-1诱导表达,采用免疫印迹法(Western blotting)检测表达产物的抗原性。结果经序列测定各基因片段序列正确,并在pGEX-4T-1表达载体中得到了高效表达,表达的融合蛋白经Western blotting和ELISA分析,具有良好的抗原性,能够与HCMVIgM阳性血清发生特异性反应。结论通过基因工程技术可以有效地获取纯度较高、特异性强的HCMV抗原,为HCMV感染者的早期诊断提供检测用抗原。; 姜永玮吴英松徐伟文陈跃瑜彭娟李明; 关键词：人巨细胞病毒 IGM PCR

多位点酶电泳法在分子流行病学中的应用: 1995年; 多位点酶电泳是研究真核生物群体遗传学和分类学的标准方法。80年代后被用于细菌的分类学、群体遗传学和分子流行病学方面的研究,并取得良好效果。本文就这一方法在分子流行病学中的应用作一概述。; 徐伟文; 关键词：分子流行病学

抗人半胱氨酸和甘氨酸富集蛋白2单克隆抗体的制备和鉴定被引量：1: 2008年; 目的制备半胱氨酸和甘氨酸富集蛋白2(Cysteine and glycine-rich protein 2,CRP2)的单克隆抗体,探讨CRP2蛋白的生物学功能。方法利用重组CRP2蛋白为免疫原,免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞SP2/0进行常规融合,通过间接ELISA筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗CRP2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过ELISA,Western-blot和免疫共沉淀实验等方法对其特性进行鉴定。结果成功地建立了2株稳定分泌抗CRP2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为F001和F002。两株单克隆抗体与重组抗原有较强的特异性反应。同时,两株单克隆抗体通过Western-Blot实验都能特异性地结合真核细胞内源性的CRP2蛋白,并且,两株抗体都可以应用于免疫共沉淀实验。结论获得了效价高、特异性好的CRP2蛋白的单克隆抗体,为CRP2的生物学功能研究奠定了基础。; 赵玉梅徐伟文王穗海黄湘潘华政李明季朝能; 关键词：蛋白质类单克隆抗体杂交瘤免疫沉淀