张茜真
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：第二军医大学东方肝胆外科医院更多>>
- 发文基金：天津市科技创新专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人脐带间充质干细胞的分离、鉴定以及干细胞特异性转录因子诱导其重编程的研究
- 背景：诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPSC)的出现不仅为人体组织工程绕开了胚胎干细胞的伦理障碍,而且为干细胞的研究提供了一种新思路新材料。然而,目前iPSC技术尚不成熟,高...
- 张茜真
- 关键词：脐带间充质干细胞重编程转录因子病毒载体
- 人脐带间充质干细胞在3种不同培养体系中的生长状况及腺病毒感染效率被引量：4
- 2010年
- 背景：目前所报道的脐带间充质干细胞体外培养条件及培养效率不尽相同,尚缺乏统一标准。而且由于不同来源的间充质干细胞生物学特征尚有一定差异,因此建立脐带间充质干细胞简便、高效的培养体系十分必要。目的：观察人脐带来源的间充质干细胞在体外不同培养体系中的生长状态,以及不同腺病毒感染的效率。方法：采用胶原酶消化法从正常足月新生儿脐带中分离出间充质干细胞,贴壁法纯化培养,细胞贴壁后利用低糖DMEM,MesenPRO RSTM Medium和STEMPRO MSC SFM这3种培养体系进行体外扩增。取对数生长期的第3~5脐带间充质干细胞,应用腺病毒Ad5-EGFP,Ad5/11-EGFP,Ad5/35-EGFP分别以感染复数=1,10,100进行感染,分别于感染后24,56,72h倒置荧光显微镜观察病毒感染及绿色荧光表达情况。结果与结论：使用低糖DMEM培养的细胞初期融合时间长,STEMPRO MSC SFM培养的细胞虽然连接紧密,但消化传代后不易贴壁,而MesenPRO RSTM Medium培养的细胞在相同时间内能达到较高的细胞密度,更适于脐带间充质干细胞的体外扩增。Ad5/35-EGFP感染脐带间充质干细胞的效率明显高于其他两种腺病毒,但可导致细胞凋亡;腺病毒Ad5/11-EGFP对脐带间充质干细胞的感染效率较佳,随着感染复数的升高,所表达的荧光强度也逐渐增大。
- 洪敬欣张茜真韩俊领刘辉刘剑邱录贵
- 关键词：腺病毒脐带间充质干细胞干细胞
- 携带oct4、klf4s、ox2、nanog4种转录因子的腺病毒载体的构建
- 2010年
- 构建并鉴定携带人oct4、klf4、sox2、nanog4个基因的腺病毒载体,重组出能同时表达这4种转录因子的腺病毒,为进一步诱导多能干细胞的研究提供新方法。使用口蹄疫病毒2A序列将人的oct4、klf4、sox2、nanog4个基因顺序连接,定向克隆至腺病毒载体pDC328上,并在nanog下游插入红色荧光蛋白dsRed2作为报告基因。利用酶切及PCR方法鉴定病毒载体的正确性;荧光显微镜下观察病毒感染HEK 293细胞24 h后红色荧光的表达,检测病毒功能;实时定量PCR检测细胞内4种基因的表达情况。结果表明,酶切后DNA电泳鉴定证实载体构建成功,重组后病毒PCR显示病毒携带oct4、klf4、sox2、nanog基因;荧光显微镜下观测到红色荧光的表达,实时定量PCR检测到细胞内4种基因的表达。本研究成功构建的腺病毒载体,能够介导以上4种转录因子在细胞内的同时表达,为进一步诱导多能干细胞的提供新方法。
- 张茜真钱其军
- 关键词：诱导多能干细胞转录因子腺病毒载体
