张洪博
- 作品数：9 被引量：20H指数：2
- 供职机构：西南大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 酵母表面展示系统的改进及其在筛选烟草PMT基因启动子结合蛋白中的应用
- 2014年
- 筛选DNA结合蛋白常用的酵母单杂交系统在应用中有时会因内源干扰而影响筛选结果。与之相比,酵母表面展示系统(yeast surface display system)将外源蛋白展示在细胞表面,可通过接近体外实验的方法筛选DNA结合蛋白,能在一定程度上避免酵母内源干扰,但是,该系统在DNA结合蛋白筛选研究中的应用还很有限。本研究对酵母表面展示系统常用载体p YD1进行改造,使其与Clontech公司的Smart cDNA文库构建系统相匹配,提高了cDNA酵母表面展示文库的构建效率,并通过比较试验建立了一个以酵母表面展示系统筛选DNA结合蛋白的试验体系。在以酵母单杂交筛选烟草腐胺甲基转移酶基因PMT(putrescine N-methyltransferase)启动子结合蛋白的研究中,其茉莉素信号应答元件GAG片段是一段筛选效率极低的DNA片段。本研究利用改进的酵母表面展示系统对GAG片段的DNA结合蛋白进行了筛选,并获得若干烟草蛋白基因,其中包括2个可能结合GAG片段的ERF(ethylene responsive factor)转录因子。进一步研究发现,这2个ERF转录因子可与GAG片段在体外结合,但不能在酵母单杂交系统中激活由GAG片段操纵的报告基因表达。本研究也证明酵母表面展示系统可有效克服酵母内源干扰,弥补酵母单杂交系统在筛选易受酵母内源干扰DNA结合蛋白方面的不足。
- 陈红牛海峡王文静马浩然李加纳柴友荣张洪博
- 关键词：酵母表面展示DNA文库DNA结合蛋白酵母单杂交
- 甘蓝型油菜COI1的调控功能分析被引量：7
- 2015年
- 【目的】研究甘蓝型油菜中茉莉素受体复合体核心成员CORONATINE INSENSITIVE 1(COI1)蛋白的基因表达特性及生理调控功能。【方法】利用基因组数据分析甘蓝型油菜及其亲本种白菜和甘蓝基因组的COI1构成情况;使用定量和半定量RT-PCR扩增方法检测油菜COI1的组织特异性表达;克隆油菜COI1保守区片段,构建病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)载体,以农杆菌侵染方法培育VIGS诱导COI1沉默的油菜植株,然后,用鉴定出的COI1沉默植株研究油菜COI1在育性调控及虫害抗性等方面的调控功能。【结果】基因组数据分析表明,甘蓝型油菜亲本种白菜和甘蓝共有7个高度同源的COI1,依序列同源性可分为4类:COI1a、COI1b.1、COI1b.2和COI1c;甘蓝型油菜有8个COI1,也由上述几类同源基因组成。半定量和定量RT-PCR扩增试验表明甘蓝型油菜COI1在茎中的表达水平最低。从培育的VIGS诱导COI1沉默油菜中,共鉴定出COI1表达水平被抑制超过70%的株系25个,其中抑制效果最明显的10个株系被用于育性调控及蚜虫抗性试验。育性分析结果证明,VIGS沉默COI1油菜的结实能力受到严重影响,其角果在授粉20 d以后的长度只达到对照油菜角果授粉5 d后的长度,且角果中无正常种子;沉默COI1油菜的雄蕊长度短于相同花期的对照油菜雄蕊,其花药开裂延迟;显微观察发现,沉默COI1油菜的花粉中有超过80%呈不正常形态。在相同处理条件下进行的蚜虫抗性比较试验中,沉默COI1油菜叶片上的蚜虫数量超过对照油菜1倍多,而且有很多小蚜虫围绕大蚜虫的虫落,繁殖态势比对照油菜叶片上的蚜虫旺盛。【结论】甘蓝型油菜COI1具有组织特异表达特性,沉默COI1会导致油菜雄性不育性状发生,并降低油菜植株对蚜虫的抗性。
- 王文静杨小川丁永强尹国英马浩然张洁石小于张鼎宇李加纳张洪博
- 关键词：甘蓝型油菜COI1茉莉素雄性不育
- 一种使用病毒诱导的基因沉默系统培育雄性不育植株的方法
- 本发明提供了VIGS载体系统在培育双子叶雄性不育植株中的应用。本发明建立了一个基于VIGS技术的高效实用的植物不育株系创建技术体系，不育率超过了96%，可达到98%，且具有不稳定遗传的特点，不会在后代中遗传，不会发生因不...
- 张洪博王文静李加纳杨小川马浩然
- 文献传递
- 一种使用病毒诱导的基因沉默系统培育雄性不育植株的方法
- 本发明提供了VIGS载体系统在培育双子叶雄性不育植株中的应用。本发明建立了一个基于VIGS技术的高效实用的植物不育株系创建技术体系，不育率超过了96%，可达到98%，且具有不稳定遗传的特点，不会在后代中遗传，不会发生因不...
- 张洪博王文静李加纳杨小川马浩然
- 文献传递
- 一种激活标签Ac/Ds转座系统及其在植物突变体库构建中的应用
- 本发明提供了一种激活标签Ac/Ds转座系统，包括转座酶Ac表达载体、转座子Ds载体，其特征在于所述转座子Ds载体带有激活标签，所述激活标签为4个串联的35S增强子，4×35S增强子置于Ds3’端内侧。本发明的Ac／Ds转...
- 张洪博王文静刘贯山马浩然
- 文献传递
- 烟草重要基因篇:3.烟草烟碱合成代谢相关基因被引量：11
- 2014年
- 烟碱（nicotine），即尼古丁，是烟草生物碱（包括烟碱、降烟碱、新烟草碱和假木贼碱等）的一种，约占烟草生物碱总含量的90%-95%[1]。烟叶烟碱含量占叶片干重的0.6%-3.0%，是烟草和卷烟质量的一项重要指标。对烟碱代谢的分子遗传学研究可以揭示烟碱代谢累积的分子机制，并为烟碱含量及烟碱成分调节相关的育种工作提供理论基础。近年来，有关烟碱合成、转运及转化的一些重要基因已被陆续克隆，对烟碱合成代谢机理研究和烟草遗传育种工作产生了重要推动作用。
- 张洪博
- 关键词：合成代谢相关基因降烟碱烟草烟碱含量
- 一种烟草腺毛及腺毛分泌物的染色液和染色方法
- 本发明提供了一种烟草腺毛及腺毛分泌物的染色液，其特征在于每100ml染色液含1mg固体碘和3mg固体碘化钾。本发明可以在显微镜下可非常明显直观地看到烟草腺毛的形态结构和其分泌物情况，简单快速且非常清晰，同时也能对腺毛密度...
- 张洪博王文静刘贯山李加纳马浩然
- 文献传递
- 一种激活标签Ac/Ds转座系统及其在植物突变体库构建中的应用
- 本发明提供了一种激活标签Ac/Ds转座系统，包括转座酶Ac表达载体、转座子Ds载体，其特征在于所述转座子Ds载体带有激活标签，所述激活标签为4个串联的35S增强子，4×35S增强子置于Ds3’端内侧。本发明的Ac／Ds转...
- 张洪博王文静刘贯山马浩然
- 文献传递
- Ac/Ds转座子激活标签技术研究进展被引量：2
- 2013年
- 随着植物基因组测序工作的迅速发展,植物功能基因组学已经成为植物分子生物学研究的重要内容,而大量有表型的突变体是进行功能基因组学研究的重要基础。Ac/Ds转座子激活标签技术(Ac/Ds transposonactivation tagging system)的产生使Ac/Ds转座子标签技术具有了产生显性突变的功能,并可避免在突变体库创建过程中进行大量繁重的人工转基因操作,是比较理想的植物功能基因组学研究工具。本文将对Ac/Ds转座子激活标签技术在发展过程中利用不同激活标签创建植物突变体库的研究进行介绍,并对近二十几年来报道的相关应用研究展开论述,以期对该领域的技术进步和应用研究提供一些有益的启发和参考。
- 王文静马浩然李加纳张洪博
- 关键词：AC突变体库功能基因组学
