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人IL-12重组逆转录病毒载体在HeLa细胞中的表达: 2010年; 目的:包装携带人白细胞介素12(IL-12)的逆转录病毒,用于宫颈癌的治疗研究。方法:携带IL-12的逆转录病毒重组质粒pL35P40SN经PA317细胞包装,G418筛选,在NIH3T3细胞进行病毒滴度测定。然后用病毒感染人宫颈癌细胞HeLa。PCR、RT-PCR方法检测IL-12基因在HeLa中的整合和表达情况。结果:重组质粒pL35P40SN经PA317细胞包装后收获病毒上清,感染HeLa细胞,检测发现IL-12基因整合到细胞基因组DNA中,并且能有效的转录。结论:成功包装了携带IL-12基因的逆转录病毒,该病毒能有效感染HeLa细胞,并使携带的基因IL-12在细胞中表达,为今后IL-12基因治疗宫颈癌的研究奠定基础。; 张巨峰陈艳娜张文峰王俊伟牟艳芳黄树林; 关键词：IL-12基因逆转录病毒宫颈癌

miR-143和miR-520d-5p在胃癌组织中的异常表达被引量：5: 2013年; 目的应用MicroRNAs(miRNAs)芯片技术筛选胃癌组织中差异表达的miRNAs,研究与胃癌相关的miRNAs。方法从3对手术切除的胃和相配对的正常胃组织中提取总RNA,miRNA芯片检测miRNA表达情况,然后在47例配对的胃癌和正常胃组织中,用Real-time RT-PCR(Taqman)对部分差异表达miRNA进行验证。结果芯片结果显示:与配对的正常胃组织相比,有62个miRNAs在胃癌中异常表达,其中42个miRNA高表达,20个miRNA低表达。用Real-time RT-PCR(Taqman)验证显示:miR-143在胃癌组织中表达显著降低(P=0.002 9);miR-520d-5p在胃癌组织中表达显著提高(P=0.032)。结论miR-143和miR-520d-5p可能参与了胃癌的发生过程。; 邓铃罗霞杨旸蔡稳豪辜玉琴张巨峰; 关键词：MIRNA MIR-143

小鼠sIL1ra基因克隆与其在骨髓抑制恢复中的功能研究: 2008年; 目的:构建鼠分泌型白细胞介素1受体拮抗剂(sIL1ra)基因的真核表达载体,进行体内表达,并研究其在5氟尿嘧啶(5-FU)所致骨髓抑制恢复中的作用。方法:根据鼠sIL1ra基因序列设计特异引物,以RT-PCR克隆其编码序列,并构建至phCMV真核表达载体中,通过胫前肌肌肉注射、随后电击转染等方法获得了该基因在小鼠体内的高效表达,并研究了sIL1ra的药效学功能。结果:体内表达sIL1ra能增加5-FU注射后小鼠外周血白细胞数以及骨髓细胞数(P<0.05或P<0.01)。结论:体内转染sIL1ra可以促进小鼠骨髓抑制后造血的恢复。; 沈娟张巨峰邵红伟沈晗余雪松肖兰凤; 关键词：基因克隆骨髓抑制

一种监测治疗基因体内表达情况和范围的方法: 发明属于分子标记技术领域，具体公开了一种监测治疗基因体内表达情况和范围的方法。本发明通过将治疗基因与标记基因HSV-1TK融合，可以利用对HSV-1TK成像的方法来间接反映治疗基因表达情况和体内分布情况，经济而有效。另外...; 张巨峰罗霞; 文献传递

粘质沙雷氏菌产生的灵菌红素和灵杆菌脂多糖中英文释义被引量：1: 2012年; 粘质沙雷氏菌能产生具有免疫调节、抗肿瘤等活性的灵菌红素和灵杆菌脂多糖,引起了研究人员的广泛兴趣。目前中文文献中存在对粘质沙雷氏菌、灵菌红素、灵杆菌脂多糖相关概念使用不合理或者混淆的情况,容易造成读者的误解。通过专业期刊数据库、电子词典等网络资源的检索,总结粘质沙雷氏菌、灵菌红素和灵杆菌脂多糖相关名称的使用情况,对粘质沙雷氏菌、灵菌红素和灵杆菌脂多糖相关中英文名称的合理使用给出建议。; 周林殷光玲游明霞朱爽张巨峰; 关键词：灵菌红素粘质沙雷氏菌

共表达TcRα12-2和TCRVβ7.1重组腺病毒载体的构建及其杀伤肝癌细胞作用的研究被引量：2: 2008年; 目的:构建共表达TCRα12-2和TCRVβ7.1重组腺病毒载体Ad.TCRα12.2-IRES-Vβ7.1,并研究其杀伤肝癌细胞的作用。方法:提取外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)总RNA,用RT-PCR的方法得到TCRα12-2基因。TCRVβ7.1基因由pCDN3.1-Vβ7.1扩增获得,将这两个基因以IRES相连克隆入腺病毒穿梭质粒pDC315中。穿梭质粒和腺病毒骨架质粒共转染HEK293细胞,包装出可同时表达TCRα12-2和TCRVβ7.1的重组腺病毒。然后提取病毒基因组DNA,对外源目的基因进行PCR鉴定;病毒感染宫颈癌细胞(HELA),48小时后提取细胞总RNA,通过RT-PCR鉴定目的基因表达;最后病毒感染PBMC,用流式细胞仪检测目的蛋白的表达。对鉴定正确的病毒进行大量扩增并测定滴度。用MTT比色法检测Ad.TCRα12-2-IRES-Vβ7.1感染的PBMC对肝癌细胞HEPG2和BEL-7402的杀伤作用。结果:从重组病毒基因组中扩增出目的基因TCRα12-2和TCRVβ7.1,RT-PCR和流式细胞仪检测表明目的基因可以有效的表达。Ad.TCRα12-2-IRES-Vβ7.1感染PBMC组对肿瘤细胞的杀伤率明显高于PBMC组和Ad-GFP感染组。结论:成功构建了双表达TCRα12-2和TCRVβ7.1基因的重组腺病毒载体Ad.TCRα12-2-IRES-Vβ7.1,且其感染后的PBMC可有效的杀伤肝癌细胞。; 王俊伟张巨峰张文峰牟艳芳邵红伟黄树林; 关键词：TCR

组胺H4受体在胃腺癌组织中的表达及临床意义: 2011年; 目的:研究胃癌腺癌(gastric adenocarcinoma,GAC)中组胺H4受体的表达水平及其临床意义。方法:60例GAC组织(病例组)与配对癌旁组织(adjacent normal tissue,ANT)中应用免疫组织化学技术检测组胺H4受体的表达,应用实时荧光定量RT-PCR方法检测组胺H4受体mRNA的表达,统计分析组胺H4受体表达与临床病理特征之间的关系。结果:①胃腺癌组织中组胺H4受体蛋白的阳性表达率(11.7%)显著低于癌旁正常组织(96.7%)。②胃腺癌组织中组胺H4受体mRNA水平较癌旁组织明显降低(p<0.001)。③组胺H4受体蛋白和mRNA表达异常和肿瘤的病理分级有相关性(p=0.0027和p=0.0011),也与有无胃周淋巴结转移有关(p<0.001和p=0.0049)。结论:组胺H4受体在胃腺癌组织有表达异常,表达量与病理分期相关。组胺H4受体表达异常和组胺水平紊乱可能在胃癌发生发展过程中有重要作用。; 方征宇张巨峰刘立李佳娜黎满慧; 关键词：胃腺癌组胺H4受体荧光实时定量PCR 免疫组化

神经干细胞三维空间壳聚糖生物材料中培养被引量：1: 2010年; 目的:体外培养神经干细胞,并将其种植在三维空间壳聚糖材料中,体外培养一段时间,使壳聚糖材料内尽量分布足够多的细胞。方法:将NSCs种植在4不同孔径直径16通道壳聚糖材料中,分别培养7d和14d。DAPI标记细胞,荧光镜下观察细胞在不同孔径直径材料中的分布。MTT法检测不同孔径直径壳聚糖材料内细胞的活性。结果:DAPI荧光显示,培养7d时,细胞仍然成团贴附在材料的通道内,少有细胞迁移至壳聚糖材料内,而培养14d可见细胞较均匀的分布在材料内,同时观察到,孔径直径为0-75μm和75-125μm两种壳聚糖材料,容纳细胞数较孔径直径为125-200μm和200-300μm少。MTT结果显示,200-300μm孔径直径的壳聚糖材料内细胞活性为各组最高,间接提示其内所含细胞数最多,而培养7d和14d两种培养方式对同种孔径直径材料内所含细胞数并无影响。结论:壳聚糖可降解生物材料能显示出良好生物相容性;体外培养NSCs于孔径为200-300μm的壳聚糖材料内14d,其存活细胞多且分布较均匀。; 熊轶张巨峰刘文丽; 关键词：神经干细胞壳聚糖 MTT

一种监测溶瘤性腺病毒体内复制情况和范围的方法: 本发明属于分子标记技术领域，具体公开了一种监测溶瘤性腺病毒体内复制情况和范围的方法。本发明将标记基因HSV-1TK整合到溶瘤性腺病毒的基因组内，得到携带HSV-1TK基因的溶瘤性腺病毒，将病毒感染治疗受体，可以利用对HS...; 张巨峰罗霞; 文献传递

携带HSV-1TK基因的逆转录病毒载体构建及在HeLa细胞中的表达被引量：1: 2010年; 目的:构建携带单纯疱疹病毒脱氧胸腺嘧啶激酶基因(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)的逆转录病毒,用于宫颈癌的治疗研究。方法:用限制性内切酶从质粒pcDNA3.1/HA-myc-His(-)Z-TK切下HSV-1TK cDNA序列,亚克隆入逆转录病毒载体pLXSN得到重组质粒pLXSN-TK,鉴定正确的阳性重组质粒经PA317细胞包装,G418筛选,在NIH3T3细胞进行病毒滴度测定。然后用病毒感染人宫颈癌细胞HeLa。PCR、RT-PCR和Western blotting方法检测HSV-1TK基因在HeLa中的整合和表达情况。结果:重组质粒pLXSN-TK经PA317细胞包装后收获病毒上清,感染HeLa细胞,检测发现HSV-1TK基因整合到细胞基因组DNA中,并且能有效的转录和翻译。结论:成功构建了逆转录病毒pLXSN-TK,该病毒能有效感染HeLa细胞,并使携带的治疗基因HSV-1TK在细胞中表达,为今后HSV-1TK基因治疗宫颈癌的研究奠定基础。; 张巨峰樊东升张超卢彦欣王俊伟牟艳芳陈艳娜万峻; 关键词：逆转录病毒宫颈癌

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张巨峰

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