张勃伟
- 作品数：6 被引量：8H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 人溶菌酶乳腺生物反应器的初步研究
- 人溶菌酶(human lysozyme，hLYZ)能水解细菌细胞壁粘多糖的β-1，4糖苷键，所以对革兰阳性细菌具有直接的溶解作用，在分泌型免疫球蛋白A和补体的参与下对革兰氏阴性细菌具有间接的溶解作用，此外它还具有消炎、消...
- 张勃伟
- 关键词：人溶菌酶基因定向克隆双酶切革兰氏阴性细菌
- 文献传递
- 一种重组溶葡萄球菌素基因及其构建的表达载体和重组细胞
- 本发明公开了一种重组溶葡萄球菌素基因及其构建的表达载体和重组细胞。重组溶葡萄球菌素基因的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示，构建含有重组溶葡萄球菌素基因和绿色荧光蛋白基因的乳腺特异性表达载体pBELS，其次用Fuge...
- 张勃伟张涌上官陶黄欣马会明
- 人溶菌酶基因真核表达载体构建及其在牛乳腺上皮细胞中的表达被引量：8
- 2008年
- 构建真核表达载体pEGFP-C1-hLYZ,并从基因水平研究人溶菌酶基因在体外培养的牛乳腺上皮细胞中的表达,为核移植提供转基因供体细胞。采用PCR的方法从人溶菌酶质粒中扩增854 bp人溶菌酶基因(包括完整的编码框446 bp)。并克隆到pMD18-T载体上,用限制性内切酶HindⅢ和BamHⅠ双酶切。将人溶菌酶基因的酶切片段(883 bp)定向克隆到pEGFP-C1的多克隆位点中,构建重组表达质粒pEGFP-hLYZ,并进行HindⅢ和BamHI双酶切鉴定。转染体外培养的牛乳腺上皮细胞,48 h后观察其表达情况。PCR检测溶菌酶基因的表达。成功构建了人溶菌酶真核表达载体,观察到表达绿色荧光蛋白的牛乳腺上皮细胞,并检测到溶菌酶基因。
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- 关键词：绿色荧光蛋白基因表达人溶菌酶
- 一种重组溶葡萄球菌素基因及其构建的表达载体和重组细胞
- 本发明公开了一种重组溶葡萄球菌素基因及其构建的表达载体和重组细胞。重组溶葡萄球菌素基因的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示，构建含有重组溶葡萄球菌素基因和绿色荧光蛋白基因的乳腺特异性表达载体pBELS，其次用Fuge...
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- 文献传递
- 溶葡萄球菌素的原核表达及多克隆抗体的制备
- 2011年
- 【目的】制备溶葡萄球菌素(lys)的多克隆抗体,为检测其在转基因细胞、胚胎及转基因动物中的表达奠定基础。【方法】以含有lys基因成熟肽序列的PEPB质粒为模板,经PCR扩增,构建pET28a-Ly原核表达载体,并以其转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达并纯化蛋白后,常规免疫家兔,制备多克隆抗体;用ELISA方法检测抗体效价,Western blot检测抗体的特异性。【结果】构建的原核表达载体pET28a-Ly经IPTG诱导6h后即可高效表达lys蛋白,蛋白经纯化后,其质量浓度可达到3.05mg/mL;抗体经ELISA检测,效价为1∶27 000,West-ern blot检测结果表明,抗体的特异性较好。【结论】成功构建了lys原核表达载体,所制备的lys多克隆抗体具有较高的效价和良好的特异性。
- 张勃伟孙薇薇上官陶黄欣张涌
- 关键词：多克隆抗体原核表达
- 溶葡萄球菌素基因乳腺特异表达载体的构建与检测及转基因核供体细胞的制备
- 2011年
- 本研究旨在构建溶葡萄球菌素基因牛乳腺特异表达载体(pEPB),转染牛胎儿成纤维细胞,为制备溶葡萄球菌素基因的转基因克隆牛提供核供体细胞。本研究以pEGFP-C1为载体骨架,通过PCR扩增牛2.6kb的β-酪蛋白5′调控区及0.6kb的3′侧翼区(poly A)序列作为调控序列,制备成含有绿色荧光和新霉素筛选标记的牛乳腺特异表达载体,经PCR和酶切鉴定正确后,用转染试剂FuGene HD反复转染牛pEPB乳腺上皮细胞3～5次,用催乳素诱导后,经免疫荧光分析,检测目的蛋白的表达。然后,用电转染法转染牛胎儿成纤维细胞,经G418筛选得到阳性细胞后,把阳性细胞扩大培养并提取其基因组,因为溶葡萄球菌素基因是外源基因,经PCR及Southern blot检测来确定目的基因是否已经整合到细胞的基因组上。结果表明,溶葡萄球菌素基因在牛乳腺细胞中得到了表达,并整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组中,得到了转溶葡萄球菌素基因的核供体细胞。结果显示,本研究所获得的转基因牛胎儿成纤维细胞可作为体细胞核移植的供体细胞进行转基因克隆牛研究。
- 上官陶张勃伟孙薇薇黄欣张涌
- 关键词：牛乳腺上皮细胞牛胎儿成纤维细胞
