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ICOS/Fc在CHO细胞中的稳定表达: 2005年; 目的:探讨pICOS/Fc融合蛋白基因在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中的稳定表达及其表达产物的纯化和初步鉴定,为其功能研究和临床应用奠定基础.方法:将pICOS/Fc表达质粒及含G418抗性基因neor的质粒pEGFP共转染CHO细胞,经G418抗性培养基筛选、克隆化培养、夹心ELISA检测,挑选100%强阳性且表达均一的细胞克隆,扩大培养取上清经ProteinA亲和层析纯化,SDS-PAGE和Western印迹等进行分子质量、纯度、抗原特异性的初步鉴定.结果:获得稳定表达ICOS/Fc蛋白的CHO细胞单克隆,制备并经ProteinA亲和层析柱获得纯化的ICOS/Fc融合蛋白,SDS-PAGE胶可见一条Mr约70×103的与预期分子质量大小相符的蛋白条带,Western印迹法可在同一位置检测到该蛋白与HRP酶标抗人FcmAb特异结合.结论:在CHO细胞中成功地建立了稳定表达ICOS/Fc融合蛋白的细胞系,表达并纯化了有抗原特异性的重组ICOS/Fc融合蛋白.; 杜峻峰王为忠庄然王春艳管文贤; 关键词：融合蛋白 WESTERN BLOTTING

兔抗mLAIR-1胞外区抗体的制备、纯化和鉴定被引量：5: 2005年; 目的:表达并纯化小鼠白细胞相关免疫球蛋白样受体-1(mLAIR-1)胞膜外区与人IgGFc段的融合蛋白,制备兔抗mLAIR-1胞膜外区的抗体。方法:构建真核表达载体,表达并纯化mLAIR-1-Fc融合蛋白。以mLAIR-1-Fc融合蛋白免疫家兔,用偶联mLAIR-1-Fc融合蛋白的Sepharose-4B亲和层析柱纯化多克隆抗体。用间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定多克隆抗体的特异性。结果:表达并纯化了mLAIR-1-hIgFc融合蛋白。以其免疫家兔,用亲和层析的方法纯化得到兔抗mLAIR-1胞膜外区的抗体,能与转染细胞和细胞表面天然mLAIR-1分子结合。结论:成功地构建了mLAIR-1胞膜外区基因的真核表达载体,表达并纯化了mLAIR-1-Fc融合蛋白。用偶联mLAIR-1-Fc融合蛋白的Sepharose-4B亲和层析柱纯化的兔抗mLAIR-1胞外区抗体,具有高特异性和高效价,为进一步研究mLAIR-1分子的结构和功能提供了新的手段。; 张圆庄然金伯泉欧阳为明; 关键词：抗体纯化

主动PBL方法在八年制《医学免疫学》教学中的应用与思考被引量：20: 2012年; 八年制医学生的培养目标是培养临床医学博士。医学免疫学是与临床联系较为紧密的基础课之一,在教学中如何加强学生处理临床问题的逻辑思维能力和提高探讨临床表象之下深层次科学问题的科研思维水平,一直是免疫学教学的主要关注之一。PBL（Problem based learning,PBL）教学方法由美国的神经病学教授Barrows于1969年首创,是以问题为导向的教学方法,是以学生为中心的教育方式,; 张赟杨琨陈丽华宋朝君方亮李琦庄然金伯泉温伟红杨安钢; 关键词：《医学免疫学》免疫学教学逻辑思维能力以问题为导向以学生为中心

医学免疫学本科生理论课教学探讨被引量：2: 2007年; 医学免疫学是医学本科生必修的一门医学基础课程,学科本身具有概念抽象、各部分内容联系密切、在细胞和分子水平发展迅速等特点,如何根据医学免疫学自身的特点和教学中存在的问题,有针对性地选择适合本学科的教学方式和手段,对于学员理解和掌握医学免疫学课程,提高教学效果至关重要,根据几年来的教学经验,就本科生的理论课教学谈几点体会。; 温伟红杨琨张赟王春艳庄然金伯泉杨安钢; 关键词：医学免疫学教学方法理论教学教学探讨

基于CFSE／PI双标记法检测细胞杀伤水平方法的建立: 目的:利用羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)和碘化丙碇(PI)标记细胞和流式细胞仪检测技术, 建立一种灵敏的测定杀伤细胞介导的细胞毒活性方法。方法:用CFSE标记靶细胞K562,按照不同的效靶比,将效应细胞NK92...; 庄然张圆邓虎平金伯泉; 关键词：CFSE 细胞毒活性流式细胞术; 文献传递

抗丝氨酸磷酸化序列特异性单克隆抗体的制备: 2007年; 宋朝君许晓光庄然王鑫田莹金伯泉; 关键词：蛋白质磷酸化信号转导单克隆抗体

HFRS患者血浆中TNF、sIL-2R、IL-6、IL-4和IFN-γ水平的变化及其意义被引量：8: 2004年; 目的 :探讨肾综合征出血热 (HFRS)患者血浆中的TNF、sIL 2R、IL 6、IL 4和IFN γ水平的变化及其与血清中丙氨酸转氨酶ALT活性水平的相关性。方法 :利用双mAb夹心ELISA法检测HFRS患者血浆中细胞因子的水平 ,应用美国RA 10 0 0全自动生化仪检测患者血清中ALT的水平。结果 :HFRS患者血浆中TNF、IL 6、IL 4、IFN γ和sIL 2R水平分别为 (95 .82± 12 .0 4 )、(36 2 .4 6± 14 1.2 6 )、(17.76± 3.5 2 )、(116 .18± 19.80 )ng/L及 (89882 0± 12 72 0 0 )U/L ,健康对照组依次为 (17.89± 1.6 8)、(4 3.81± 18.0 8)、(4 .86± 1.14 )、(7.5 7± 2 .4 1)ng/L及(6 6 730± 2 96 90 )U/L、(P <0 .0 1) ;患者血清中ALT的水平也显著升高 ,为正常对照的 4 .4倍。通过相关性分析 ,发现TNF、sIL 2R、IL 6和IFN γ水平与患者血清中ALT的水平高度相关 (P <0 .0 1)。结论 :HFRS患者体内TNF、sIL 2R、IL 6和IFN γ水平显著升高 ,且与患者体内ALT水平的升高高度相关。; 刘京梅朱勇王九平欧阳为明李琦庄然金伯泉; 关键词：HFRS ALT

小鼠抗兔IgG单克隆抗体的制备与应用被引量：2: 2008年; 制备小鼠抗兔IgG的mAb,经标记HRP和FITC后,应用于ELISA、Western blot、免疫组织化学染色试验以及FCM。以正常兔IgG为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过常规B淋巴细胞融合技术,获得两株分泌抗兔IgG mAb的杂交瘤细胞株,间接ELISA腹水效价均达1×10-7,且亚类均为IgG1(κ)。抗体经鉴定、纯化后,以改良的过碘酸钠法标记HRP,本室常规方法标记FITC。FITC标记的2A1 mAb的F/P值为4.1,2F11的F/P值为2.7。HRP标记抗体的效价和工作浓度分别:2A1为1:25600和1:3200,2F11为1:102400和1:25600。在相同工作浓度条件下,ELISA、Western blot的实验结果,HRP标记的2F11 mAb明显优于商品化抗兔pAb,而且,2A1和2F11 mAb经标记后还可用于免疫组化和FCM,显示出很好的应用前景。; 张葵汪涛李琦庄然宋朝君李永明金伯泉; 关键词：单克隆抗体兔IGG 辣根过氧化物酶

一种新的黑色素瘤相关抗原MAGE-C2的基因克隆及表达: 2005年; 目的：克隆人黑色素瘤相关抗原MAGE-C2的cDNA,构建真核、原核表达载体并转入相应细胞获得表达。方法：采用RT-PCR技术,从直肠癌细胞系SW480的总RNA中克隆了MAGE-C2 cDNA序列,并将开放读框分别插入质粒pEGFP-C1和pGEX-4T-3中,获得pEGFP-MAGE-C,2绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体和pGEX-MAGE-C2谷胱甘肽转移酶(GST)融合蛋白表达载体,将pEGFP-MAGE-C2转染293T细胞,观察绿色荧光融合蛋白在细胞中的定位；将pGEX-MAGE-C2转化大肠杆菌B1221株,经IPTG诱导表达GST融合蛋白,并用谷胱甘肽亲和层析法纯化重组蛋白。结果：获得MAGE-C2开放读框并构建表达载体,测序结果与GenBank收录的序列相一致。真核表达载体转染293T细胞后显示MAGE-C2蛋白定位于细胞核；原核重组蛋白大部分以可溶性形式表达,亲和层析后,获得了较高纯度的MAGE-C2-GST融合蛋白。分析显示原核表达GS了融合蛋白的相对分子质量为70000,使用抗GST单克隆抗体进行Westem blot分析证实为目的蛋白。结论：成功的获得MAGE-C2基因,构建了其表达载体并获得表达,为进一步制备MAGE-C2特异性单抗及深入探讨MAGE-C2可能参与肿瘤发生发展的机制提供了重要条件。; 庄然欧阳为明谢鑫张新海蓝天李林方亮金伯泉; 关键词：基因

警报素IL-33及其与疾病的关系被引量：4: 2014年; 随着功能基因组学和生物信息学的深入研究,白细胞介素1(IL-1)家族的新成员不断被发现,人们对其功能的研究也越来越深入。在哺乳动物,IL-1家族至少有11个成员:IL-1F1/IL-1α、IL-1F2/IL-1β、IL-1F3/IL-1Ra、IL-1F4/IL-18、IL-1F5/IL-36Ra、IL-1F6/IL-36α、IL-1F7/IL-37、IL-1F8/IL-36β、IL-1F9/IL-36γ、IL-1F10/IL-38和IL-F11/IL-33,针对IL-1β、IL-1Ra及IL-18的中和活性单克隆抗体或重组蛋白已被批准成功应用于多种临床疾病的治疗。IL-33是IL-1家族的新成员,可刺激不同细胞因子的产生,诱导Th2应答,参与抗感染免疫及炎症反应,近年来,已成为白细胞介素研究领域中关注的热点。现就有关IL-33的结构和产生、生物学功能以及IL-33与不同疾病的关系进行综述。; 张春梅庄然金伯泉; 关键词：ST2

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庄然

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