崔振中
- 作品数：11 被引量：80H指数：4
- 供职机构：卫生部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- RNA快速提取一步法的建立被引量：15
- 1999年
- 梁德勇徐国恒崔振中王晓民朱丽霞韩济生
- 关键词：RNA提取一步法
- 人GDNF基因的克隆被引量：2
- 1998年
- 目的：克隆可表达人胶质细胞源性神经营养因子的基因。方法：从脑胶质细胞瘤患者术后的脑瘤组织中提取总ＲＮＡ，以ＲＴＰＣＲ方法扩增出了一段约５５８ｂｐ的ｃＤＮＡ片段，将这一片段克隆于ｐＵＣ１８载体中，进行全序列分析。结果：证实该研究所克隆的ｃＤＮＡ是编码正确的人ＧＤＮＦ基因。与发表于ＧｅｎｅＢａｎｋ上的序列相比，发现该研究克隆的基因有一段７８ｂｐ的核苷酸序列缺失，但不影响密码子的阅读框。结论：克隆到了编码正确的人ＧＤＮＦ的ｃＤＮＡ全序列，对帕金森病基因治疗的基础研究及临床应用具有重要意义。
- 崔巍崔振中王晓民徐国恒梁德勇韩济生
- 关键词：GDNF基因克隆基因扩增震颤性麻痹基因治疗
- 人GDNFcDNA在SH-SY5Y细胞中的表达及其对多巴胺能神经元的保护作用探讨被引量：2
- 2001年
- 为建立一种可分泌人胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)的工程细胞 ,研究其在帕金森病基因治疗中的可能作用。克隆携带 Kozak序列的人 GDNFc DNA,并转染至人类神经母细胞瘤细胞系 SH- SY5 Y细胞 ,将此工程细胞与大鼠原代多巴胺能神经元共培养 ,免疫组化检测多巴胺能神经元。发现工程细胞可防止多巴胺能神经元退变死亡 ,有助于多巴胺能神经元抵抗 MPP+ 的毒性损伤。表明可分泌人
- 张文华吴承远杨扬邢艳秋王建刚王晓民薛冰崔振中韩济生
- 关键词：胶质细胞源性神经营养因子多巴胺能神经元GDNFCDNA
- 银染mRNA差异显示方法的条件优化被引量：39
- 1999年
- ｍＲＮＡ差异显示技术是分离差异表达基因的强有力工具。本工作旨在优化无同位素的银染差异显示方法。以总ＲＮＡ为模板，用锚定引物与随机引物的组合进行ＲＴ－ＰＣＲ反应，ＰＣＲ扩增产物在变性的聚丙烯酰胺凝胶上电泳。用银染方法显示电泳ｃＤＡＮ条带，其结果是：（１）ＲＮＡ加入量为１～３μｇ，ＲＴ－ＰＣＲ反应能扩增出较多的ｃＤＮＡ条带，而低于０．５μｇ时扩增条带数目较少；（２）在３６～４２℃的范围内，随着温度的增加，扩增的条带减少；而４２℃时扩增的条带数目锐减，特别是当ＲＮＡ加入量小于１μｇ时几乎无条带显示；３６℃扩增的条带过多而趋于ｓｍｅａｒ；（３）优化了银染液程序，染色液和显色液中３７％甲醛的量分别为０．０３％～０．０５％和０．０７５％～０．１％，显色温度４～１２℃时，显示出清晰的条带；（４）用此方法获得数条电针镇痛有效与无效大鼠表达差异的ｃＤＮＡ条带。总之，通过改变参数条件，优化了快速简便的银染ｍＲＮＡ差异显示方法。
- 梁德勇王晓民崔振中徐国恒朱丽霞韩济生
- 关键词：MRNA聚合酶链反应银染基因表达
- 人促红细胞生成素基因组基因的克隆及全序列分析被引量：2
- 1998年
- 为了克隆到全长的人促红细胞生成素基因，从而在真核系统中及转基因动物乳腺中进行表达，从一个中国人的血细胞中提取基因组ＤＮＡ，构建了不完全基因组噬菌体文库，文库效价为５×１０４．这种文库的构建方法是用ＢａｍＨⅠ对基因组ＤＮＡ进行完全酶切，回收１０．５ｋｂ左右的酶切片段，插入到λ－噬菌体ＥＭＢＬ３载体中．筛选文库所使用的探针是用ＰＣＲ方法从基因组ＤＮＡ模板中扩增的５５６ｂｐ的ＥＰＯ基因片段．从该文库中筛选到了一个含有完整ＥＰＯ基因的插入片段长度为１２．５ｋｂ的阳性克隆．经全序列分析证实，所克隆的ＥＰＯ基因编码正确，但在５′－侧翼及第一内含子处与国外发表的序列相比较，发现两处核苷酸差异，这两个核苷酸的差异改变了５′－调控区的两个小的开放阅读框——ＯＲＦ１和ＯＲＦ３，其在基因表达调探方面的作用值得进一步探讨．
- 崔振中崔振中寿思明刘朋朋朱宝利
- 关键词：基因文库促红细胞生成素PCREPO
- 促红细胞生成素基因表达载体的构建及其在CHO细胞中表达的研究被引量：3
- 1998年
- 用从基因文库中所克隆的促红细胞生成素（ＥＰＯ）基因组基因，构建了３种由不同启动子调控的表达载体——ｐＯＰ１３／ＥＰＯ，ｐＲＳＶ／ＥＰＯ，ｐＣＭＶ／ＥＰＯ，在这３个表达载体的构建过程中对基因的转录起始效率、内含子的剪接、５′非翻译区和３′非翻译区对基因表达的影响等因素都加以考虑．用脂质体转染法分别将上述３个载体导入ＣＨＯ细胞，经瞬时表达，用ＥＬＩＳＡ方法检测，表达量分别为１９０ｍＩＵ／ｍｌ、１６０ｍＩＵ／ｍｌ、４４７ｍＩＵ／ｍｌ．用表达载体ｐＯＰ１３／ＥＰＯ转染ＣＨＯ－Ｋ１２细胞，在４００μｇ／ｍｌ的Ｇ４１８浓度下筛选稳定表达细胞克隆，获得了表达量约为１６０ＩＵ／１０６细胞（４８ｈ）的Ｃ１０细胞株．表达产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测发现了ＥＰＯ阳性条带．用ＴＦ－１细胞对ＥＰＯ进行了生物活性检测，初步证实所表达的ＥＰＯ有生物活性．
- 崔振中崔振中刘维全刘维全齐顺章
- 关键词：促红细胞生成素CHO细胞
- 用mRNA差异显示法分离大鼠吗啡依赖相关基因被引量：5
- 1999年
- 目的：分离并克隆大鼠吗啡依赖相关基因。方法：ＳＤ大鼠用递增剂量的吗啡作皮下注射，形成吗啡依赖的动物模型。分离鼠脑的中脑导水管周围灰质、伏核、纹状体等核团，提取总ＲＮＡ，用ｍＲＮＡ差异显示（ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙＰＣＲ，ＤＤＰＣＲ）的方法，筛选吗啡依赖大鼠特异表达产物的ｃＤＮＡ片段。用３组锚定引物（Ｔ１２ＭＮ，Ｍ＝Ａ，Ｇ，Ｔ或Ｃ，Ｎ＝Ａ，Ｃ或Ｇ）和６组随机引物（ＡＰ１～ＡＰ６）作不同组合进行ＰＣＲ扩增。结果：获得了８０余个差异表达产物的ｃＤＮＡ片段，经斑点杂交初步筛选，克隆了１０个阳性片段，选取４个克隆进行序列分析，获得了４个ｃＤＮＡ片段。结论：通过ＢＬＡＳＴ数据库序列比较，现已确认获得了４个吗啡依赖表达的新基因片段。
- 崔振中梁德勇金蕾罗非王晓民韩济生
- 关键词：吗啡依赖基因扩增MRNA相关基因
- 抑制性消减杂交法分离吗啡依赖大鼠脑内的差异表达基因的初步报道被引量：4
- 2000年
- 用递增剂量的吗啡处理 SD大鼠 ,建立吗啡依赖大鼠模型 ,选取中脑导水管周围灰质、伏核、纹状体等核团 ,提取总 RNA,用抑制性消减杂交 ( SSH)方法 ,分离吗啡依赖大鼠的高表达基因 ,初步获得了 4个新基因的 c DNA片段 ,并发现了 3个已知的功能基因在吗啡依赖过程中增高。进一步的研究尚在进行中。
- 崔振中梁德勇王玢金蕾罗非王晓民韩济生
- 关键词：吗啡依赖抑制性消减杂交SD大鼠
- 两种PCR技术在GDNF基因克隆中的应用被引量：1
- 1999年
- 聚合酶链式反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）自１９８５年问世以来在分子生物学领域得到了极其广泛的应用，包括从基因组中大量地扩增单拷贝基因［１，２］，扩增ｍＲＮＡ的ＲＴＰＣＲ［３］，ＰＣＲ测序，ＰＣＲ标记探针，定量ＰＣＲ［...
- 崔振中张淑琴王晓民韩济生
- 关键词：GDNF基因基因克隆聚合酶链反应
- 人胶质细胞源性神经营养因子基因工程细胞保护多巴胺能神经元的实验研究被引量：8
- 2001年
- 目的 构建一种可分泌人胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)的基因工程细胞 ,并探讨其在基因治疗帕金森病中的可能作用。方法 克隆含Kozak序列的人GDNFcDNA ,并将其转染至人类神经母细胞瘤细胞系SH SY5Y细胞 ,用RT PCR方法筛选阳性细胞克隆 ,将此工程细胞与大鼠原代多巴胺能神经元共培养 ,免疫组织化学检测多巴胺能神经元。结果 (1)基因工程细胞可防止多巴胺能神经元退变死亡 ,与对照组比较 ,最多增加了 95 4 %,P <0 0 1。 (2 )工程细胞可抵抗MPP+ 对多巴胺能神经元的毒性损伤作用 ,与对照组相比 ,细胞数目增加了 9 5～ 10 8倍 ,P <0 0 1。结论 首次构建了可分泌人GDNF的工程细胞 ,其对多巴胺能神经元具有明显的营养保护作用 ,其在帕金森病的基因治疗中可能具有重要的应用价值。
- 张文华王晓民杨扬薛冰崔振中吴承远韩济生
- 关键词：脑源性神经营养因子帕金森病多巴胺能神经元
