安祺
- 作品数：35 被引量：101H指数：6
- 供职机构：中国药品生物制品检定所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 肾综合征出血热病毒Z10株在Vero细胞上传代适应和增殖动态被引量：2
- 2000年
- 目的为了肾综合征出血热病毒滴度达到规模化生产要求。方法将肾综合征出血热病毒 Ｚ１０ 株在Ｖｅｒｏ细胞上传代适应，不同时间取样，测定病毒滴度。结果从第２代即可稳定达到高滴度。转瓶培养比静 止培养的病毒峰值出现的更早，第 ４ ｄ即可达到１０８／ｍｌ以上，且可多次收液。结论初步确立了疫苗生产中病毒制 备工艺。
- 姚智慧董关木俞永新孔艳刘文雪安祺
- 关键词：肾综合征出血热病毒VERO细胞传代适应
- 乙型脑炎减毒株SA14-14-2全长cDNA克隆感染性的研究被引量：3
- 2010年
- 目的在获得乙型脑炎病毒(JEV)全长cDNA分子的基础上,建立感染性转录体,获得恢复病毒,为JEV致病机理、疫苗研制及分子病毒学研究提供方法。方法将全长JEV cDNA分子克隆入改造后的pBluescript KS I(I+)载体上,经T7启动子体外转录,在Lipofectamine2000介导下,将转录产物转染入BHK-21细胞,经RT-PCR、测序、间接免疫荧光试验及噬斑试验鉴定恢复病毒。结果转录产物转染BHK-21细胞后,观察到明显的细胞病变;收获恢复病毒,经RT-PCR、测序、间接免疫荧光试验及噬斑试验证实为JEV。结论已建立了JEV全长cDNA克隆经体外转录获得JEV感染性RNA的方法,为JEV分子生物学及疫苗研究等奠定了基础。
- 李静俞永新董关木安祺杨立宏孔艳景川
- 关键词：日本乙型脑炎病毒全长CDNA体外转录
- 肾综合征出血热灭活疫苗毒株84Fli株的M和S基因核苷酸序列分析
- 2009年
- 目的对肾综合征出血热灭活疫苗毒株84Fli株的M和S基因进行核苷酸序列分析,了解该毒种的基因稳定性。方法根据汉坦病毒标准株设计特异的PCR引物,用RT-PCR技术分段扩增疫苗株84FLi株的M和S基因片段,PCR产物纯化后直接测序,并进行遗传进化分析。结果疫苗株84FLi株M基因片段的核苷酸序列与GenBank中收录的HTN型毒株的M基因核苷酸序列的同源性为83.5%～99.9%,而与SEO型毒株的同源性为70.2%～72.0%。其S基因与HTN型毒株的同源性为85.9%～99.6%,与SEO型毒株的同源性为69.4%～70.8%。疫苗株84FLi株的M和S基因的氨基酸序列与GenBank中收录的HTN型汉坦病毒84FLi株M和S基因的氨基酸序列的同源性分别为99.9%和99.5%。从遗传进化树上可以看出,疫苗株84FLi株与GenBank中收录的84FLi株位于一个独立的分支上,与其他HTN型病毒亚型分布于不同分支上,与其他HTN型病毒亚型亲缘关系较远。结论肾综合征出血热灭活疫苗毒株84FLi株M和S基因片段的核苷酸和氨基酸序列未发生较大变异,说明在传代过程中该疫苗株在基因水平上并未发生较大改变。
- 李静孔艳董关木安祺杨立宏周荔葆俞永新
- 关键词：汉坦病毒M基因S基因核苷酸序列
- 三株流行性出血热病毒免疫原性的比较研究被引量：1
- 1995年
- 三株病毒用不同方法制备的疫苗，免疫家兔后都能诱导产生免疫荧光抗体（IF）。其中Z10和L99株用细胞冻融以β-丙内酯灭活制备的疫苗还可以测到HI抗体。以β-丙内酯灭活的疫苗所产生的中和抗体，以Z10株最高（1：80～1：160），L99株较低（1：10），而LR1株未测出。但三株病毒感染的细胞培养上清液，用两种灭活剂均未产生HI或NT抗体。
- 董关木姚智慧安祺刘文雪俞永新
- 关键词：流行性出血热病毒疫苗灭活疫苗免疫原性
- 反转录酶活性检测实时荧光定量PCR方法的建立
- 2010年
- 目的在传统产物增强性反转录酶(PERT)活性检测方法基础上建立检测反转录酶活性的实时荧光定量PCR方法。方法以噬菌体MS2RNA为模板,设计、合成引物和探针,并分别以连续10倍倍比稀释的AMV反转录酶(1×10-1～1×10-9U/μl)标准品催化体外反转录反应合成相应cDNA。采用实时荧光定量PCR法检测底物cDNA模板量,并获得相应的PCR荧光值曲线,分析AMV反转录酶的相对活性。同时应用传统PERT方法对cDNA进行扩增,测定该方法的灵敏度。结果将AMV反转录酶标准品连续10倍倍比稀释后催化反转录反应,实时荧光定量PCR分析所得的反转录产物cDNA,结果得到与理论值完全相符合的PCR标准荧光值曲线;定量分析结果显示,浓度为1×10-2～1×10-8U/μl的AMV反转录酶均可得到相应的荧光值。不同稀释度的AMV反转录酶,经传统PERT方法扩增后,结果显示浓度为1×10-3～1×10-7U/μl的AMV反转录酶均可见大小为112bp的阳性条带,检测灵敏度达到1×10-7U/μl。结论成功建立了基于实时荧光定量PCR技术的检测反转录酶活性的新方法,实验操作简单,具有高精确性和无污染性,为生物制品外来污染尤其是反转录病毒污染的检测提供了参考指标。
- 孔艳吴小红杨立宏安祺董关木俞永新
- 关键词：聚合酶链反应
- 逆转录酶活性检测荧光定量PCR方法
- 目的：在我们传统PERT方法的基础上建立荧光实时定量逆转录PCR（Real-time Quantitive Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction）检测方法，使得检...
- 孔艳吴小红杨立宏安祺董关木俞永新
- 关键词：逆转录酶生物制品活性检测
- 文献传递
- 应用空斑减少中和试验法对我国流行性出血热病毒进行血清学分型被引量：28
- 1991年
- 应用空斑减少中和试验对分离自不同动物宿主和病人血液的流行性出血热病毒进行病毒抗原性分型,以不同株的家兔免疫血清对国际上血清1型和2型参考毒株进行试验。结果表明,3株来自黑线姬鼠的毒株,其免疫血清对血清1型(76-118株)的效价较血清 2型(UR株)高≥16倍,而6株来自家鼠和大白鼠的毒株中,有5株对2型的血清效价高于1型2～16倍。提示来自黑线姬鼠的毒株符合国际上的血清1型,来自褐家鼠的毒株基本与国际上的血清2型一致,但个别毒株例外。以上结果表明,空斑减少中和试验特异性高,可用于流行性出血热病毒的准确血清学分型。 本文还发现,J10株(分离自锦州市褐家鼠)和HB55诛(分离自河南出血热病人)的血清型与过去文献报道的不符。经反复用不同免疫血清和型特异性单克隆抗体做空斑减少中和试验,均表明这两株病毒的分型与血清1型相同。以上结果为我国首次应用空斑减少试验对我国出血热不同毒株进行准确分型的报道。
- 俞永新姚智慧安祺董关木刘文雪何浩倪大石
- 关键词：流行性出血热病毒
- SARS疫苗质量标准的研究和建立
- 董关木安祺刘文雪杨立宏孔艳王军志舒跃龙俞永新
- 该课题建立了整套人用疫苗质量检定的方法和相应的标准。在国际上首次建立了SARS冠状病毒空斑形成试验和空斑减少中和试验。在疫苗研发用毒种无外源因子污染的验证中，在用普通的常规验证方法无法确证的情况下，用基因芯片辅助检测疫苗...
- 关键词：
- 关键词：非典型肺炎灭活疫苗
- 减毒活疫苗中逆转录酶活性检测被引量：7
- 2003年
- 逆转录酶 (RT)是目前发现的所有逆转录病毒的一个重要标志 ,凡是逆转录病毒均携带逆转录酶 ,逆转录酶活性的测定可以反映出制品中是否有逆转录病毒的污染 ,不受病毒基因序列的影响。采用PCR法进行逆转录酶活性检测方法 ,以整个生活周期中无DNA过程的MS2RNA为模板 ,设计一对引物 ,在逆转录系统中加入待检样品 ,经过RT PCR扩增后 ,放大检测对象物进行观察 ,从而了解制品中是否存在逆转录酶的污染 ,继而间接推测其是否污染逆转录病毒。对不同生物制品厂家生产的减毒活疫苗的逆转录酶活性进行检测 ,发现在一些疫苗里有逆转录酶活性阳性。
- 孔艳李津安祺杨立宏刘文雪董关木
- 关键词：减毒活疫苗逆转录酶酶活性活性测定
- 非典型肺炎灭活疫苗免疫动物效果评价被引量：1
- 2004年
- 目的应用空斑减少中和试验对非典型肺炎灭活疫苗动物免疫血清进行中和抗体测定,以评价其免疫效果。方法用Vero-E6细胞接种6孔塑料细胞培养板,加两层含琼脂糖培养基,以中性红为染色剂建立空斑试验,以能减少50%的空斑为标准测定抗SARS中和抗体。结果三批非典型肺炎灭活疫苗免疫小鼠和家兔均产生较高的中和抗体。结论非典型肺炎灭活疫苗对两种动物具有良好的免疫效果。
- 安祺董关木刘文雪孔艳杨立宏
- 关键词：小鼠
