孙玉娟
- 作品数：9 被引量：19H指数：3
- 供职机构：海南大学更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 应用多重RT-PCR检测甘蔗黄叶病毒和高粱花叶病毒被引量：8
- 2011年
- 建立了多重RT-PCR同时检测甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,ScYLV)和高粱花叶病毒病毒(Sorghummosaic virus,SrMV)的技术体系,该体系可有效地对甘蔗田间植株和试管苗进行检测。根据引物之间的互补性及引物的Tm值筛选多重PCR引物。确定适宜的PCR缓冲液的浓度为1×,退火温度为53℃,延伸温度为72℃。
- 王洪星张雨良罗志文杨文君龚殿孙玉娟张树珍刘志昕
- 关键词：多重RT-PCR病毒检测甘蔗
- 高粱花叶病毒外壳蛋白的原核表达及其抗血清制备
- 高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)是世界上分布最广的侵染甘蔗的病毒之一,引起甘蔗花叶病,对甘蔗产业危害很大.本研究根据SrMV外壳蛋白(coatprotein,CP)基因序列合成一对引物,...
- 王洪星龚殿孙玉娟张雨良王健华刘志昕
- 关键词：甘蔗外壳蛋白原核表达抗血清制备
- 文献传递
- 海南岛巴西橡胶和香蕉cat相关基因的克隆及分析被引量：2
- 2012年
- 根据GenBank上已有的植物cat基因序列,设计一对兼并引物。在海南岛采集香蕉、巴西橡胶、黄灯笼辣椒、菠萝、甘蔗、番木瓜等作物的叶片并提取总RNA,反转录成cDNA,PCR进行同源克隆。结果获得了巴西橡胶cat-1和香蕉的cat-2基因,而未获得其它4种作物cat相关基因。序列分析发现,巴西橡胶cat-1和香蕉的cat-2基因开放阅读框(ORF)都为1 479 bp,编码492个氨基酸,GenBank登陆号分别为HQ660587和HQ660588。生物信息学软件分析巴西橡胶CAT-1和香蕉CAT-2蛋白的三级结构分别与Exiguobacteriu Oxidotolerans(PDB code:2j2mA0)和Pseudomonas Syringae(PDB code:1m7sA)相似。构建系统发育树表明巴西橡胶CAT-1与蓖麻CAT-1氨基酸序列(Ricinus communis:XP_002521709.1)同源性最高,为92.1%;香蕉CAT-2与油棕CAT-2氨基酸序列(Elaeisguineensis:ACF06566.1)同源性最高,达90.9%。
- 余乃通孙玉娟张雨良罗志文刘志昕
- 关键词：香蕉巴西橡胶CAT基因克隆
- 高粱花叶病毒外壳蛋白的原核表达及其抗血清制备被引量：3
- 2013年
- 高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)是世界上分布最广的侵染甘蔗的病毒之一,引起甘蔗花叶病,对甘蔗产业危害很大。根据SrMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因序列合成一对引物,以海南(SrMV-HN)染病植株总RNA为材料,采用RT-PCR方法克隆了长约987 bp的目的片段。将CP基因与质粒pET32a(+)连接,构建了含SrMV CP基因的融合蛋白原核表达载体pET32a-SrMVCP。然后用正确的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测出一条约36kD的特异融合蛋白表达谱带。融合蛋白主要以可溶性蛋白形式稳定表达。通过优化诱导条件,确立了CP基因表达的最佳条件:IPTG终浓度为0.1 mmol/L,诱导时间为4 h,诱导温度为30℃。用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白,免疫家兔制备出抗血清。通过酶联法(ID-ELISA)测定本试验制备的SrMV CP抗血清工作浓度为1∶1 000,Western blotting检测结果表明,抗血清与SrMV-HN诱导表达的CP蛋白发生特异性反应。对田间25个甘蔗样品进行检测,结果表明该抗血清的效价高、灵敏度高、特异性强,可以应用于田间样品的检测。
- 王洪星龚殿孙玉娟张雨良王健华刘志昕
- 关键词：外壳蛋白原核表达抗血清
- 辣椒脉斑驳病毒文昌分离物基因组测序及分析被引量：5
- 2011年
- 辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)近年来严重危害海南黄灯笼辣椒的产量,开展针对该病毒的研究以求达到对其有效防控迫在眉睫。本研究分7段克隆了ChiVMV文昌分离物(ChiVMV Wenchang isolate,ChiVMV-WC)的基因组。分段克隆的测序结果通过拼接,共获得ChiVMV-WC基因组9717个核苷酸(nt)序列(GenBank登录号:GQ981316)。在核苷酸序列的第164位～第9270位存在一个大的开放阅读框(ORF),编码一个多聚蛋白(分子量为350.44kD)。近年来被证实的马铃薯Y病毒科的一个新的ORF(pretty interesting potyviridae ORF,PIPO)存在于ChiVMV-WC基因组核苷酸序列的第2892位～第3110位,编码一个由72个氨基酸聚合而成的多肽(分子量为8.26kD)。ChiVMV-WC与ChiVMV其它分离物的基因组核苷酸序列比较发现该病毒存在着较高的变异率。本研究通过与同属内病毒的同源性分析以及系统进化树分析,确定了ChiVMV-WC在生物进化史上的地位。
- 龚殿王健华吴育鹏张雨良王洪星孙玉娟刘志昕
- 关键词：马铃薯Y病毒属基因组系统进化树
- 番木瓜的PRSV接种及其组培苗的RT-PCR检测被引量：1
- 2011年
- 随着番木瓜环斑病毒病的加重,对番木瓜进行PRSV病毒接种,是有效防治PRSV和番木瓜抗PRSV重要措施之一。根据GenBank上已有的PRSV-CP基因序列,设计1对特异引物PRSVCP3/PRSVCP4,同时根据EF183499、HQ424465和美国夏威夷PRSV-CP序列设计保守区特异性引物PRSVCP1/PRSVCP2,并对接种后的番木瓜组培苗进行RT-PCR检测。
- 孙玉娟张雨良黄启星王红星龚殿刘志昕
- 关键词：番木瓜环斑病毒接种
- 香蕉束顶病毒DNA5调控区特异结合蛋白的筛选
- 香蕉束顶病(Banana bunchy top disease, BBTD)是香蕉毁灭性病害之一。在我国台湾、福建、广东、广西、海南和云南等几乎所有的香蕉产区均有不同程度的发病危害,重病蕉园发病率可高达80%以上,已发展...
- 孙玉娟
- 关键词：香蕉束顶病毒酵母单杂交文库构建
- 文献传递
- 短期降水减少对海南橡胶林土壤有机碳矿化及有机碳组分的影响
- 2024年
- 为了探究短期降水减少对不同土层有机碳矿化速率及其碳组分变化的影响,以海南典型人工林类型橡胶林土壤为研究对象,通过搭建野外隔离穿透雨控制平台,并结合室内恒温培养实验,测定了不同降水条件下土壤有机碳矿化速率及有机碳组分等参数。结果表明:短期降水减少导致0~10 cm土层中SOC累积矿化量、矿化率及微生物代谢熵(qCO_(2))显著降低;土壤易氧化有机碳(EOC)、微生物生物量碳(MBC)及惰性有机碳(NEOC)的含量均随土壤含水量的降低而降低,但仅对0~10 cm土层的EOC影响显著;相关分析表明,土壤SOC累积矿化量及SOC矿化率均与土壤碳氮含量(SOC、TN)、各碳组分含量(EOC、MBC、NEOC)、qCO_(2)呈显著正相关。总之,短期降水减少会抑制橡胶林土壤SOC的矿化,这一变化可能与不同水分条件下土壤基质供应的有效性及微生物代谢的变化有密切关系。
- 孙玉娟钟丽爽杨小波张翔
- 关键词：橡胶林土壤含水量
- 海南甘蔗病毒病原鉴定与检测技术体系建立及应用
- 刘志昕张雨良王健华张树珍王洪星杨本鹏熊国如杨文君余乃通章绍延官梅花孙玉娟龚殿王文治周朋
- 该成果调查了海南甘蔗病毒危害情况，从海南8个市(县)的24个乡镇采集了108份甘蔗样品，利用RT-PCR、序列测定、质谱分析、血清学等技术手段，鉴定明确海南甘蔗病毒病的主要病原为高粱花叶病毒(Sorghummosaicv...
- 关键词：
- 关键词：甘蔗
