孙彤
- 作品数：12 被引量：217H指数：6
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 泡盛曲霉(Aspergillus awamori)葡萄糖淀粉酶基因克隆及在酒精酵母中的表达与分泌被引量：6
- 1997年
- 泡盛曲霉(Aspergillus awamori)产生的葡萄糖淀粉酶是一种诱导的糖蛋白,它具α-1,4和α-1,6-D-glucan glucohydrolase活性,广泛用于需糖化淀粉的工艺.若将该酶基因导入啤酒酵母,构建能直接利用淀粉的酵母工程菌株,可省去淀粉液化和糖化的过程.国际上已有将泡盛曲霉的葡萄糖淀粉酶导入啤酒酵母的报道.该酶作用最适温度为60℃,对食用乙醇生产工艺较为有利.因此,我们用RT-PCR技术克隆了泡盛曲霉葡萄糖淀粉酶Ⅰ基因,将其置于酵母烯酸酶(Enolase)启动子(Promotor)和终止子(Terminator)之间,构建了表达载体,转化非营养缺陷型酒精酵母AS.2.1364,获得能将淀粉转化为葡萄糖并可发酵产生酒精的转基因酵母菌株.1 材料与方法(1)菌种及培养基 泡盛曲霉(Aspeergillus awamori)NMRL3112,葡萄糖淀粉酶Ⅰ基因供体,采用文献的培养基;酒精酵母(Sacchromyces cerevisiae)AS.2.1364为葡萄糖淀粉酶基因受体,采用YPD培养基;转化酵母采用YPDS培养基,含1%葡萄糖和1%可溶性淀粉.大肠杆菌TG1作为pAC1(由刘宏迪保存)及测序质粒pGEM-3zf(+)的宿主菌,采用LB培养基,氨卞青霉素抗性.
- 王永吉刘宏迪孙彤张树政
- 关键词：泡盛曲霉葡萄糖淀粉酶基因克隆酒精酵母
- 西方许旺酵母α-淀粉酶的基因克隆及其在啤酒酵母中的高效表达与分泌被引量：4
- 1998年
- 以E .coli/yeast穿梭质粒YCEp1为载体构建许旺酵母部分基因组文库 ,在大肠杆菌中扩增后提取混合质粒DNA ,经电转化非缺陷标志啤酒酵母AS .2 1 36 4 ,在YPDS平板 ( 1 %葡萄糖和 1 %可溶性淀粉 )上用淀粉水解活力筛选含水解淀粉能力的阳性转化子 .从阳性转化子中分离融合质粒证实含 5 0kb的插入片段 .用α 淀粉酶基因两端序列设计的引物PCR扩增及扩增片段序列分析证实该片段中含有α 淀粉酶全部编码序列 .该片段能在啤酒酵母中表达α 淀粉酶 ,说明该片段带有α 淀粉酶基因 5′ 上游序列和 3′ 下游序列 .该转化子在YPDS平板 30℃培养 48h形成清晰可见的水解淀粉圈 .发酵液 (YPDS) 48℃可获得 740～ 780mU/mL产酶活力和高的生物量 .PAGE证实发酵液有α 淀粉酶蛋白带 ,占胞外总蛋白含量的 1 2 %以上 .说明在载体YCEp1上许旺酵母α 淀粉酶基因自身启动子 ( promoter)和终止子(terminator)在啤酒酵母AS .2 .1 36 4中同样被识别且高效表达 .有工业应用前景的水解淀粉酵母菌株构建成功 .
- 王永吉刘宏迪孙彤张树政
- 关键词：Α-淀粉酶基因表达啤酒酵母
- 深圳地区不同人群TTV感染情况的调查被引量：61
- 1998年
- 目的了解深圳地区不同人群ＴＴＶ的感染情况。方法在ＴＴＶＯＲＦ１保守区设计两对套式引物，建立了检测ＴＴＶＤＮＡ的巢式聚合酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ），用该法对深圳地区９０例一般人群、８８例职业献血员、７９例静脉毒瘾者及２９例非甲庚型肝炎病人进行ＴＴＶＤＮＡ的检测。结果ＴＴＶＤＮＡ在以上４种人群中的阳性率分别为７８％，９０％，４１７％与４４８％，前者与后两者比较差异均有显著性（Ｐ＜００５）。９０例一般人群与８８例职业献血员中，１４例ＴＴＶＤＮＡ阳性者丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）均正常。结论深圳地区一般人群与职业献血员中ＴＴＶ携带者较常见；静脉毒瘾者是ＴＴＶ感染的高危人群；
- 周伯平马为民王火生徐六妹徐六妹付涌水袁静
- 关键词：TT病毒聚合酶链反应职业献血员静脉毒瘾者
- RT－PCR检测烟草环斑病毒的研究被引量：23
- 1995年
- 本文报道应用ＲＴ一ＰＣＲ技术检测烟草环斑病毒（ＴＲＳＶ）的结果。根据ＴＲＳＶＲＮＡ－２序列３末端非编码区设计、合成引物一１和引物一２；用ＴＲＳＶＲＮＡ作模板，引物一２作引物，反转录合成ｃＤＮＡ，并以此作模板进行ＰＣＲ扩增，５～６小时内可得到结果，检测粗提液中ＲＮＡ灵敏度达４００ｐｇ，并且可以直接从受侵染的叶片汁液中检出ＴＲＳＶ，为口岸快速检疫推出一个更灵敏、准确的分子生物学新方法。值得推广应用。
- 相宁周雪荣孙彤刘宏迪张成良杨莉
- 关键词：RT-PCR烟草环斑病毒
- 抗真菌药物增效剂及其制备方法和应用
- 一种抗真菌药物增效剂及其制备方法和应用,包括首先选择如下克分子配比的原料:乳链菌肽0.01—10mM0l,赖氨酸0.01—0.03mMol,二价盐0.1—1.0mMol;将上述原料混合均匀,用物理方法除菌,粉碎至10μ以...
- 骆爱群还连栋陈秀珠孙彤
- 文献传递
- 烟草环斑病毒PCR产物的克隆及部分序列分析被引量：8
- 1998年
- 将ＴＲＳＶ的ＰＣＲ产物与ｐＧＥＴ－ＴＥａｓｙＶｅｃｔｏｒ连接，克隆到大肠杆菌ＴＧ１中，得到白色菌落，重组质粒通过酶切鉴定、ＰＣＲ扩增和部分序列分析，表明ＴＲＳＶ的ＰＣＲ产物确实插入了质粒，并已克隆到大肠杆菌中，测序列２４０个碱基，与资料显示的序列相比较，同源性达９２．５％，可用于解决病毒检疫应用中阳性对照有扩散危险的疑难问题。
- 相宁孙彤刘宏迪刘宏迪张成良
- 关键词：烟草环斑病毒PCR产物克隆
- TTV在非甲-庚型肝炎患者中的检测、克隆及测序被引量：58
- 1998年
- 目的分析ＴＴＶ（Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎｔｒａｎｓｍｉｔｅｄｖｉｒｕｓ）深圳分离株ＯＲＦ１部分基因序列。方法在ＴＴＶＯＲＦ１设计引物，建立巢式聚合酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ），检测４０例广东地区非甲－庚型肝炎患者血清中ＴＴＶＤＮＡ。对ＰＣＲ产物进行分子克隆，以荧光法（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，３７３Ａ）测序。结果４０例非甲－庚型肝炎中２１例ＴＴＶＤＮＡ阳性（５２．５％）。对其中一株ＴＴＶ（ＳＺ１）ＯＲＦ１部分基因克隆、测序，并与Ｏｋａｍｏｔｏ等报道的２株（Ｎ２２、Ｇ１ａ）相比较，其核苷酸序列的同源性分别为９６．７％与９７．４％。结论本研究证实我国华南地区存在ＴＴＶ感染。
- 周伯平马为民孙彤王火生徐六妹袁静蒋小玲付涌水
- 关键词：病毒性肝炎非甲-庚型肝炎克隆测序
- 一种新的可经输血传播病毒(TTV)的分子流行病学研究被引量：80
- 1998年
- 目的分析深圳地区不同人群中 TTV(transfusion transmitted virus,TTV)感染情况及其基因型。方法在 TTV ORF1 设计引物,建立巢式聚合酶链反应,检测深圳地区不同人群血清中 TTV DNA。对 PCR 产物进行分子克隆,以荧光法(Applied Biosystems,373A)测序。结果 90例一般人群、88例有偿献血员、79例静脉毒瘾者、52例非甲～非庚型肝炎、67例乙型肝炎及72例丙型肝炎患者中,TTV DNA 阳性率分别为7.8%、9.0%、41.8%、48.0%、22.3%与27.8%。5株深圳 TTV(SZ1～SZ5)ORF1部分基因核苷酸序列同源性为66.2%～96.7%。基因分型5株中2株属Gl型(Gla亚型),3株属 G2型,其中2株为 G2b 型。结论深圳地区一般人群与职业献血员中 TTV 健康携带者较常见:静脉毒瘾者与非甲～非庚型肝炎患者是 TTV 感染的高危人群;乙型及丙型肝炎常重叠 TTV 感染;不同 TTV 分离株 ORF1部分基因序列变异可达33%,基因分型以 G1a 与 G2b 为主。
- 马为民周伯平王火生徐六妹袁静付涌水孙彤
- 关键词：输血传播病毒分子流行病学
- 人神经生长因子β亚基的基因在P.pastoris和E.coli中的表达被引量：2
- 1999年
- 将hNGFB基因插入甲醇营养性酵母P .pastoris分泌表达载体pHIL S1和E .coli表达载体pET 15b中 ,相应转化P .pastorisGS115 (Mut+,His- )和E .coliBL2 1(DE3 ) .在不含组氨酸平板上生长的酵母转化子通过PCR进一步筛选阳性克隆 ,P .pastoris重组菌株的蛋白电泳表明发酵液中有特异表达带 ,扫描分析占细胞外泌总蛋白的 14 .4% ,Westernblotting证实该分泌蛋白具有hNGF的免疫活性 .E .coli重组菌株在IPTG的诱导下表达融合蛋白 .电泳扫描分析表达的融合蛋白占细胞总蛋白量的 10 .3 % ,Westernblotting检测表明具有免疫活性 .
- 范乔刘宏迪孙彤赫荣乔
- 关键词：神经生长因子酵母融合蛋白Β亚基
- 抗真菌药物增效剂及其制备方法和应用
- 一种抗真菌药物增效剂及其制备方法和应用，包括首先选择如下克分子比的原料：乳链菌肽0.01-10mMol，赖氨酸0.01-0.03mMol，二价镁盐或钴盐0.1-1.0mMo l；将上述原料混合均匀，用物理方法除菌，粉碎至...
- 骆爱群还连栋陈秀珠孙彤
- 文献传递
