姚俊
- 作品数：49 被引量：155H指数：6
- 供职机构：云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省农业科技创新工程项目云南省现代农业生猪产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 肺炎克雷伯菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立被引量：7
- 2014年
- 为建立肺炎克雷伯菌TaqMan荧光定量PCR检测方法,根据肺炎克雷伯菌16SrRNA基因的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,通过反应条件优化和特异性、敏感性、重复性试验以及临床样品的检测,建立了肺炎克雷伯菌TaqMan荧光定量PCR。结果显示,该方法与猪肺炎支原体、猪鼻支原体、臭鼻克雷伯菌、鼻硬结克雷伯菌、多杀性巴氏杆菌、链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌、沙门菌、肠球菌、乳杆菌、解淀粉芽胞杆菌、猪丹毒杆菌、奇异变形杆菌和化脓隐秘杆菌共15种细菌无交叉反应;标准品浓度在2.29×109~2.29×104 copies/μL范围内具有良好的线性关系,最低可检测到2.29×102 copies/μL的标准品阳性质粒;批内和批间变异系数均小于3%。临床样品的检测结果表明,该方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强和检测快速的优点,可用于肺炎克雷伯菌感染的早期诊断、样品的快速检测以及肺炎克雷伯菌的定量分析。
- 李富祥廖德芳姚俊熊和丽李华春
- 关键词：肺炎克雷伯菌16SRRNA基因
- 副猪嗜血杆菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：6
- 2013年
- 根据副猪嗜血杆菌16SrRNA基N的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针，通过反应条件优化和特异性、敏感性、重复性试验以及对临床样品的检测，建立了副猪嗜血杆菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。结果表明，该方法与猪肺炎支原体、巴氏杆菌、链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、肠球菌、乳杆菌、解淀粉芽孢杆菌、奇异变形杆菌以及猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒无交叉反应；标准品浓度在6．92×10^8-6．92×10^3 copies／μL范围内具有良好的线性关系，最低可检测到6．92×10^1copies／μL的标准品阳性质粒；批内和批间变异系数均小于3％。临床样品检测结果表明，该方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强和快速的优点，可用于副猪嗜血杆菌感染的早期诊断和流行病学调查以及副猪嗜血杆菌的定量分析。
- 李富祥熊和丽姚俊李华春
- 关键词：副猪嗜血杆菌16SRRNA基因流行病学调查
- 用乙基环丙沙星重建受猪鼻支原体污染的BHK-21细胞的研究被引量：3
- 2011年
- 为重建受猪鼻支原体人为污染的BHK-21细胞,本研究采用含10mg/L乙基环丙沙星的培养液,对受污染的BHK-21细胞进行物理、化学相结合的循环处理,并用DNA荧光染色法和PCR法对处理进行全程监测。结果发现,4次循环处理并再传3代后,猪鼻支原体污染已被彻底清除,细胞恢复了健康。此方法为抢救受支原体污染的细胞提供了参考。
- 高林廖德芳姚俊肖雷李华春张念祖李志华
- 关键词：BHK-21细胞
- 云南流产山羊中检出流产嗜性衣原体与Q热立克次氏体混合感染被引量：6
- 2017年
- 建立山羊流产嗜性衣原体与Q热立克次氏体基因组DNA特异扩增检测方法,对云南省河谷地区可疑流产病料时行病原检测并最终证实病原的存在,在此基础上了解病原的进化。获得特异基因产物完成测序验证后递交GenBank,能过BLAST初步分析后调取相关基因,应用DNAstar5.0计算序列间的相似性,计算遗传距离,应用MEGA5.2软件进行比对并构建系统发育树,进行聚类分析。云南流产嗜性衣原体KR778870与有参考序列的衣原体毒株比较其核苷酸同源性均为100%,属同一基因型,与鹦鹉热衣原体同源率最高为94.9%;Q热立克次氏体云南毒株KR697576与纳米比亚毒株CP007555同源性为100%,其次美国毒株为CP00102同源率99.7%,台湾株EU000273为99.4%,同源率最低的毒株EU009657仅为42.6%。通过基因特异性PCR确定流产山羊中检测到流产嗜性衣原体及Q热立克次氏体,流产嗜性衣原体PMP基因无变异,Q热立克次氏体TransⅢ基因则有一定的变异。
- 赵国洪姚俊赵文华杨仕标高华峰
- 关键词：流产嗜性衣原体Q热立克次氏体
- 山羊痘病毒SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法的建立被引量：4
- 2012年
- 为了建立一种灵敏、特异、快速的山羊痘病毒实时定量检测方法,根据山羊痘病毒(AY077835)gp006基因序列,应用Beacon Designer 7.7软件设计合成一对PCR引物。将被检测的目的 DNA片段克隆PEASY-T1质粒,制备重组质粒标准品,以期建立以质粒拷贝数为单位的标准曲线。通过反应条件的优化及引物浓度的筛选,建立了山羊痘病毒SYBR GreenⅠ实时定量PCR(real-time PCR)检测方法,最佳引物浓度为400nmol/L。组内重复试验和组间重复试验变异系数均低于2%,最低检测限为1×101 copies/μL,上机检测时间在1h以内。用该方法对2011年流行于云南华坪、景谷及2003年流行于云南宣威、寻甸和昆明的山羊痘临床组织样品进行定量检测,结果送检组织样品抽提DNA中病毒含量分别为1.03×105、5.30×103、1.51×104、4.74×103、7.20×104 copies/μL。结果表明,所建立的real-time PCR具有灵敏、特异、快速的特点,适合于山羊痘临床组织样品的定量检测。
- 姚俊杨永军彭海生陈官国段国军鲁富有李华春
- 关键词：山羊痘病毒实时定量PCR
- 国内猪源睾丸酮丛毛单胞菌的分离与鉴定
- 2019年
- 为查明2018年8月云南省曲靖市富源县某规模化猪场发生母猪产死胎、弱仔猪的病因,本试验采集弱仔猪内脏组织病料进行病原菌的分离培养、生化鉴定、16S rRNA扩增、药敏试验及致病性试验。结果显示,从弱仔猪大脑组织内分离培养出1株菌落形态呈圆形、半透明的革兰氏阴性短杆菌。生化鉴定结果显示,衣康酸盐同化(ITA)、辛二酸盐同化(SUB)、乙酸盐(ACE)、DL-乳酸盐同化(LAT)、丙酸盐同化(PROP)、3-羟基-丁酸盐(3OB)、脯氨酸(PRO)生化反应结果呈阳性;丙氨酸同化(ALA)、D-甘露醇(MAN)、D-葡萄糖(GLU)、癸酸盐(CAP)、丝氨酸同化(SER)等生化反应结果呈阴性,其16S rRNA序列与GenBank中丛毛单胞菌属(Comamonas sp.)EB172株(登录号:EU847238.1)的16S rRNA核苷酸序列同源性达99%。药敏试验结果显示,其对阿莫西林/克拉维酸、头孢噻吩、多黏菌素E、复方新诺明、大观霉素、呋喃妥因和多西环素敏感。致病性试验结果显示,以0.3 mL 9.3×10 8 CFU/mL的细菌悬液腹腔接种小鼠,72 h内共有7只死亡(7/12)。本试验结果表明,弱仔猪及流产胎儿存在睾丸酮丛毛单胞菌感染。
- 詹建举张昇朱来萍马粉姚俊高林王生奎
- 抗原捕获ELISA对猪瘟的诊断效果被引量：12
- 2003年
- 应用抗原捕获ELISA方法分别对现行猪瘟疫苗毒及接种疫苗后产生定型热的兔脾、不同地区可疑猪瘟组织样品进行检测。结果表明 ,ELISA方法对猪瘟强毒组织样品的检测效果良好 ,但对弱毒的检测并不敏感 。
- 高华峰单于乃纯姚俊解天珍
- 关键词：单克隆抗体猪瘟病毒
- PIC猪经口、鼻途径感染猪瘟石门毒株及兔化弱毒株后病毒的组织嗜性及动态分布规律研究被引量：1
- 2014年
- 猪瘟（classical swine fever,CSF）是由猪瘟病毒（classical swine fever virus,CSFV）引起的一种高度接触性、症状差异极大的传染病〔1〕。病原属黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Pestivirus）成员,只有一个血清型〔1〕。瘟病毒属（Pestivirus）是一群小的、有囊膜的、正链单股RNA病毒,其基因组大小约12.5kb,编码1个大的单一开放读码框架（ORF）,
- 姚俊高林熊和丽肖雷李富祥杨荣丽李华春
- 关键词：组织嗜性FLAVIVIRIDAE开放读码框架黄病毒科
- 云南省部分地区牛流行热血清学初步调查被引量：1
- 2019年
- 为了调查近年来云南省牛流行热的自然感染情况,本文采集了临沧市沧源县、普洱市孟连县、西双版纳州勐腊县、昆明市五华区及曲靖市马龙县5个州市共计356份牛血清样品进行了牛流行热病毒抗体检测,检测结果显示总体样本阳性率为8.4%。从样品采集地区检测结果比对来看,普洱市孟连县和西双版纳勐腊县采集的样品阳性率较高,分别为15.52%(9/58)和15%(9/60);其次为临沧市沧源县样品,阳性率为11.11%(1/9);曲靖市马龙县样品阳性率最低,为4.93%(11/223);昆明市五华区的血清样品未检出牛流行热抗体。对不同品种牛群感染阳性率进行比较,结果显示黄牛感染阳性率最高为21.69%(18/83);其次为婆罗门牛,阳性率为11.1%(1/9);西门塔尔杂交肉牛阳性率为4.93%(11/223);水牛和奶牛阳性率为0。
- 詹建举何辉朱来萍张昇马粉李云辉熊芳张娟南董桂英姚俊
- 关键词：牛流行热血清学
- 山羊痘云南流行毒株及疫苗株P32基因序列分析被引量：1
- 2007年
- 将本实验室分离到的山羊痘病毒云南流行毒株MYS、XW、XD及疫苗株VF4主要结构蛋白基因P32基因克隆到PMD18T载体后进行双向测序,所得序列与Genbank中羊痘病毒属成员:山羊痘病毒(GTPV)、绵羊痘病毒(SPPV)、疙瘩皮肤病病毒(SLDV)参考毒株相应序列作对比分析(ByClustalWMethod),结果显示:(1)MYS、XD毒株P32基因全长969bp,疫苗株VF4为974bp,XW毒株为975bp。(2)XW、疫苗株VF4在100～105bp位置处均插入6个A,在947bp位置缺失一个T;SPPV参考毒株在169～171bp位置插入GAT。(3)由于疫苗株VF4P32基因核苷酸序列第414位置处发生了T/A突变,在该处形成一个新的终止密码子TAA,导致完整的开放读码框架(ORF)被打断,只表达第1～411bp(137个Aa)的基因片段,而不能表达出完整的P32蛋白。其余6株毒株的开放读码框架均很相似。(4)在所构建的系统发生树中,LSDV与SPPV参考毒株、MYS和XD株、VF4和XW株、GTPV参考毒株各被划分为一组。所有7个毒株P32基因核苷酸序列的同源性都很高,均在97%以上。其中疫苗株VF4与SPPV参考毒株的同源性最低,为97.6%。XD与XW毒株的同源性最高,为99.8%。(5)酶切位点分析结果显示,MYS、XW、XD、VF4及GTPV和SLDV参考毒株具有唯一的HinfI酶切位点,大约在第694bp位置。SPPV参考毒株具有2个HinfI酶切位点,分别在第391bp和691bp位置处,该酶切位点较适合用来鉴别山羊痘和绵羊痘病毒,而疙瘩皮肤病在临床上就很容易与山羊痘和绵羊痘鉴别开来。
- 姚俊李华春高华峰单于乃纯高林张念祖
- 关键词：山羊痘病毒P32基因测序
