吴凌娟
- 作品数：7 被引量：10H指数：2
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- 绿脓杆菌ATCC27853菌株外毒素A全长编码基因的克隆及其在HEK293T细胞中的表达
- 采用 PCR 方法从绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC27853菌株基因组扩增绿脓杆菌外毒素 A(Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,PEA)全长编码基因,并...
- 吴凌娟仲飞解民靳慧君王微韩冬梅
- 文献传递
- 猪β防御素-2基因在HEK293T细胞中的表达被引量：2
- 2009年
- 用Trizol试剂提取猪血白细胞总RNA,根据已发表的序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增出猪β防御素-2(pBD-2)基因,并将该基因插入到真核表达载体pcDNA3.1A中,构建成猪β防御素-2基因的真核表达载体pcDNA3.1A/pBD-2,经磷酸钙介导转染HEK293T细胞进行表达。结果表明:本试验扩增的pBD-2基因与已发表的序列完全一致。表达产物经Western-blot检测,证明pBD-2能够在真核细胞HEK293T中表达。
- 王微解民吴凌娟靳慧君韩冬梅仲飞
- 重组猪β防御素2在毕赤酵母中的表达及其鉴定被引量：3
- 2010年
- 根据GenBank猪β防御素2(pBD-2)的氨基酸序列,参照酵母偏爱的密码子,设计无信号肽序列的pBD-2的基因编码序列,并由公司合成。将合成的基因通过SnaBⅠ和NotⅠ位点插入到酵母表达载体pPIC9K的α因子信号肽序列下游,构建成pBD-2基因的分泌表达载体pPIC9K/pBD-2。利用电穿孔法将经SalⅠ线性化的pPIC9K/pBD-2质粒导入毕赤酵母GS115中,通过G418加压筛选得到His+Mut+表型的高拷贝转化子。经PCR检测证明pBD-2基因在毕赤酵母染色体上得到整合。阳性重组酵母经摇瓶发酵培养和甲醇诱导,用SDS-PAGE方法在发酵上清中检测到重组pBD-2的存在,说明构建重组酵母菌能够分泌性表达pBD-2。琼脂孔穴扩散法检测结果显示,pBD-2对金黄色葡萄球菌有较好的抑菌活性。
- 解民仲飞李秀锦吴凌娟李凌李巍
- 关键词：毕赤酵母分泌表达抗菌活性
- 犬β防御素-1真核表达载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达被引量：4
- 2008年
- 哺乳动物的β-防御素是一类具有广谱抗微生物活性的阳离子小肽。为了克隆和分析犬β防御素-1基因,并建立一套在HEK293T细胞中高效表达犬β防御素-1的方法,本研究采用RT-PCR方法从犬睾丸组织中扩增出犬β防御素-1(cBD-1)的cDNA基因,并将其克隆到pcDNA3.1A载体中,构建了犬β防御素-1基因的真核表达载体pcDNA3.1A-cBD-1,经磷酸钙介导转染HEK293T细胞进行表达。结果表明:克隆的犬β防御素-1基因序列与已发表序列(GenBank编号:NM-001024641)的同源性为99.7%。表达犬β防御素-1经Western-blot检测,证明构建的犬β防御素-1基因表达载体能够在真核细胞中表达,表达产物能够分泌到细胞外。为进一步研究犬β防御素的功能奠定了基础。
- 靳慧君仲飞吴凌娟解民王微韩冬梅
- 犬β防御素-1真核表达载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达
- 哺乳动物的β-防御素是一类具有广谱抗微生物活性的阳离子小肽。为了克隆和分析犬β防御素-1基因,并建立一套在 HEK293T 细胞中高效表达犬β防御素-1的方法,本研究采用 RT-PCR 方法从犬睾丸组织中扩增出犬β防御素...
- 靳慧君仲飞吴凌娟解民王微韩冬梅
- 文献传递
- 绿脓杆菌ATCC27853菌株外毒素A全长编码基因的克隆及其在真核细胞中的表达
- 目的绿脓杆菌/(Pseudomonas aeruginosa/)是重要的人畜共患病原菌。绿脓杆菌感染可发生在人体任何部位和组织,引起心内膜炎、胃肠炎、脓胸甚至败血症;在幼小畜禽中往往大群暴发,常与大肠杆菌混合感染,或者是...
- 吴凌娟
- 关键词：绿脓杆菌PEA真核表达
- 文献传递
