刘永
- 作品数：4 被引量：13H指数：2
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- 高三尖杉酯碱诱导的白血病耐药细胞基因表达谱的变化
- 2009年
- 目的探讨高三尖杉酯碱（HHT）诱导的人白血病细胞耐药相关分子。方法在前期建立的HHT诱导的人白血病多药耐药细胞株K562／HHT的基础上，采用基因芯片技术比较K562／HHT细胞、其亲本K562细胞以及用耐药逆转剂米非司酮（RU486）作用后的K562／HHT（K562／HHT／RU486）细胞三者基因表达谱的差异，选择在这三种细胞中呈动态变化的骨髓细胞X染色体上酪氨酸激酶（BMX）基因用RT—PCR和Westernblot法在转录和翻译水平进行验证，进而转染BMX基因到K562和K562／HHT细胞，观察BMX过表达时这两种细胞内柔红霉素（DNR）含量的变化，确定BMX是否在K562／HHT细胞耐药形成中发挥作用。结果耐药细胞K562／HHT与其亲本K562细胞相比，共有117个基因表达有显著差异，其中57个基因表达明显上调，60个基因表达明显下调，耐药细胞K562／HHT中多药耐药基因mdr-1表达明显上调；K562／HHT／RU486细胞与K562／HHT细胞相比，13个基因表达明显上调，37个基因表达明显下调。这些差异表达的基因涉及耐药、细胞信号传导、细胞分化、细胞增殖、转录调节以及离子转运等。基因NM-001721（BMX）、NM-031459（SESN2）、NM-033642（FGF13）和AL049309（SFRS12）在两组芯片中的表达均有显著差异。其中BMX基因在K562／HHT细胞中的表达与K562细胞相比，明显上调，在K562／HHT／RU486细胞则较K562／HHT细胞减低。进一步用RT—PCR和Westernblot法检测得到了相同的结果。RT—PCR和Westernblot证实BMX质粒转染的K562及K562／HHT细胞BMX表达均上调，流式细胞术检测到K562及K562／HHT细胞内DNR含量荧光强度分别为79．28±4．04和29．84±2．67，均较转染前荧光强度158．52±8．08和58．58±6．53显著减低。结论BMX在高三尖杉酯碱诱导的人白血病多药耐药细胞株K562／HHT耐药性产生中发挥作用。
- 于晓林刘永王涓冬孔德晓陈春燕
- 关键词：K562细胞多药高三尖杉酯碱基因BMX
- 胃癌多药耐药细胞株BGC823/5-FU的建立及其耐药机制的研究被引量：6
- 2008年
- 目的:建立5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导的胃癌多药耐药细胞株BGC823/5-FU,探讨凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2、Bax及caspase-3与其耐药性产生的关系。方法:采用反复短期暴露并逐渐增加5-FU浓度的方法建立胃癌耐药细胞株BGC823/5-FU,MTT法检测此耐药细胞株对5-FU的耐药倍数及其对临床常用化疗药物阿霉素、丝裂霉素和顺铂的交叉耐药性,流式细胞术检测细胞P-糖蛋白的表达和柔红霉素积累量;Western blotting法检测耐药胃癌细胞株BGC823/5-FU与其亲代药物敏感胃癌细胞株BGC823凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2、Bax及caspase-3的表达。结果:成功诱导出胃癌多药耐药细胞株BGC823/5-FU,较其亲代细胞BGC823对5-FU、阿霉素、丝裂霉素和顺铂的耐药性分别提高10.82、2.50、22.23和2.00倍。其P-糖蛋白表达较BGC823细胞增高(P<0.01),柔红霉素积累量较BGC823细胞减低(P<0.01)。与亲代药物敏感BGC823细胞相比,耐药细胞株BGC823/5-FU细胞Survivin表达上升(P<0.05),Bcl-2表达升高(P<0.05),Bax表达下降(P<0.05),caspase-3表达减低(P<0.05)。结论:胃癌细胞株BGC823在5-FU的诱导下可形成多药耐药细胞株BGC823/5-FU,P-糖蛋白、凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2、Bax及caspase-3可能参与其耐药性的形成。
- 杨皎娃牛建花曾季平刘永贾继辉陈春燕
- 关键词：胃肿瘤氟尿嘧啶
- 高三尖杉酯碱白血病多药耐药细胞系K562/HHT的诱导及米非司酮逆转耐药的研究被引量：7
- 2007年
- 目的:研究高三尖杉酯碱(HHT)诱导的白血病多药耐药细胞株耐药机制以及米非司酮(RU486)逆转其耐药效应。方法:采用反复短期暴露并逐渐增加HHT浓度的方法建立白血病多药耐药细胞系K562/HHT,MTT法检测K562/HHT细胞对化疗药物的敏感性及RU486对该细胞的细胞毒效应,RT-PCR法检测细胞MDR1基因、葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)基因的表达,流式细胞术检测细胞P-糖蛋白的表达和柔红霉素积累量,免疫组化法检测细胞Bcl-2、Bax、caspase-3的表达状况。结果:成功诱导出多药耐药细胞系K562/HHT,K562/HHT较其亲代细胞K562对HHT、阿霉素、长春新碱、依托泊苷的耐药性分别提高462.6、2.8、1183.4、2.6倍,K562/HHT细胞MDR1基因、GCS基因、P-糖蛋白和Bcl-2/Bax比值明显高于K562细胞(P<0.05),caspase-3表达、柔红霉素积累量明显低于K562细胞(P<0.05)。10μmol/L的RU486对K562/HHT细胞无明显杀伤(存活率94.67%±2.48%),该浓度RU486可不同程度地逆转K562/HHT细胞对上述化疗药物的耐药性,RU486作用后K562/HHT细胞caspase-3表达、柔红霉素积累量明显高于作用前(P<0.05),Bcl-2/Bax比值明显低于作用前(P<0.05)。结论:白血病细胞系K562在HHT的作用下可形成多药耐药细胞系K562/HHT,其耐药性的形成与P-糖蛋白、GCS、Bcl-2/Bax比值及caspase-3等机制有关,RU486可通过提高细胞内药物积累、调节Bcl-2/Bax比值和caspase-3的表达逆转此细胞的耐药性。
- 刘永陈春燕孔德晓王琳琳曹倩贾继辉
- 关键词：高三尖杉酯碱米非司酮多药
- 源于细菌DNA的寡核苷酸对K562/A02细胞来源的树突细胞促成熟作用被引量：1
- 2007年
- 目的研究源于细菌 CpG 基序的寡核苷酸和含细菌短磷酸二酯骨架的寡核苷酸对K562/A02细胞来源的树突细胞(DC)的促成熟作用。方法联合应用细胞因子 rhGM-CSF 和 rhIL-4诱导 K562/A02细胞成为 DC。7 d 后以瑞特-姬姆萨染色观察细胞形态的变化,流式细胞术检测细胞免疫表型的变化,用同种混合淋巴细胞反应、细胞毒性 T 淋巴细胞(CTL)杀伤活性检测、IL-12和 IL-6的分泌实验评价 DC 的成熟程度。然后在 DC 中分别加入源于细菌 CpG 基序的寡核苷酸 CpG2006以及含细菌短磷酸二酯骨架的寡核苷酸 A-ODN 和 T-ODN,处理3 d 后再次检测该 DC 成熟度。结果K562/A02细胞可在细胞因子 rhGM-CSF 和 rhIL-4联合作用下分化成为 DC,免疫表型检测发现 CD83、HLA-DR 和 CD86分子的表达分别为(65.5±8.4)%、(32.0±4.3)%和(18.6±3.2)%,经 CpG2006作用后表达升高到(88.9±3.6)%、(53.9±3.2)%和(39.9±7.3)%;经 A-ODN 作用后升高到(97.0±5.3)%、(63.9±7,3)%和(40.2±7.4)%;经 T-ODN 作用后升高到(93.3±4.6)%、(58.3±5.6)%和(36.2±6.8)%,与作用前相比差异均有统计学意义。经 CpG2006、A-ODN 和 T-ODN 作用后具有典型DC 形态的细胞增多。上述3种寡核苷酸处理的 DC 均可刺激 T 细胞产生较强的增殖效应、诱导产生的 CTL 对靶细胞 K562/A02的杀伤率明显增强,IL-6和 IL-12分泌明显增高。结论源于细菌 CpG 基序的寡核苷酸以及含细菌短磷酸二酯骨架的寡核苷酸对白血病源性 DC 有促成熟作用。
- 于晗孔德晓牛建花刘永贾继辉陈春燕
- 关键词：寡核苷酸类树突细胞
