刘家良
- 作品数：7 被引量：16H指数：3
- 供职机构：中山大学孙逸仙纪念医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- MRI活体示踪心肌梗死大鼠骨髓间充质干细胞的移植被引量：2
- 2013年
- 背景:干细胞移植的疗效和安全性评估均需要对体内干细胞的存活、分布、迁徙、增殖及分化进行连续监测。目的:观察MRI示踪超顺磁性氧化铁标记的骨髓间充质干细胞在缺血心肌组织的分布、迁徙情况。方法:直接贴壁法分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞,获得的细胞进行免疫鉴定。以新型超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞,体外MRI成像确定其体内示踪的可行性。标记后锥虫蓝拒染试验、MTT比色试验分别检测标记细胞的活力、增殖情况。60只SD大鼠随机分为3组,制备大鼠心肌梗死模型2周后再次开胸移植含标记骨髓间充质干细胞的PBS混合液、含未标记骨髓间充质干细胞的PBS混合液和等量PBS。于移植后第1天、第3周行MRI检查,动态观察移植细胞的分布、迁徙,并根据MRI图像定位选择性行CD90免疫组化检查。结果与结论:骨髓间充质干细胞标记后,普鲁士蓝染色见胞浆内蓝色铁颗粒,标记效率为99%,标记细胞与未标记细胞间锥虫蓝拒染率、MTT吸光度差异无显著性意义。体外MRI可检测到标记细胞,并在T2WI及T2W/FFE序列上呈低信号。细胞移植1d后,在T2WI及T2W/FFE序列上可见标记细胞在梗死心肌边缘呈类圆形低信号;移植3周后,移植区域信号边界模糊,范围扩大,对比度降低。CD90免疫组化检测证实移植细胞可由梗死边缘向梗死区域迁徙。结果可见新型超顺磁性氧化铁可成功对大鼠骨髓间充质干细胞进行标记,细胞标记后可被MRI检测。
- 华平王友于杨淞然刘家良刘立宝陶俊杨艳旗
- 关键词：干细胞骨髓干细胞心肌梗死骨髓间充质干细胞干细胞移植活体
- 沉默caspase-3基因影响骨髓间充质干细胞的增殖和凋亡被引量：4
- 2013年
- 背景:缺血缺氧的心肌微环境导致植入的细胞存活率低。目的:观察沉默caspase-3基因对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和体外缺血缺氧环境下凋亡的影响。方法:构建靶向caspase-3的shRNA重组慢病毒并转染骨髓间充质干细胞为转基因组,以正常细胞组和空载体组做对照,采用MTS法检测各组细胞增殖情况。建立缺血缺氧模型,real-time PCR和免疫组织化学分别检测缺血缺氧环境各组细胞的caspase-3mRNA和蛋白表达水平,应用流式细胞术检测不同缺血缺氧时间点(0,6,12,24,48h)各组细胞的凋亡率。结果与结论:重组慢病毒成功转染骨髓间充质干细胞,且细胞增殖活性升高(P<0.05)。缺血缺氧环境下,转基因组细胞caspase-3在mRNA和蛋白表达水平相比对照组下降(P<0.05)。沉默caspase-3能显著降低骨髓间充质干细胞的凋亡率(P<0.05),且随着缺血缺氧时间的延长凋亡率缓慢升高。结果提示,沉默caspase-3能加快骨髓间充质干细胞的生长速度和提高在体外缺血缺氧环境下的抗凋亡能力。
- 刘家良华平杨淞然陶俊江慧琦王萌杨艳旗
- 关键词：干细胞骨髓干细胞骨髓间充质干细胞CASPASE-3基因缺血缺氧
- 白塞病合并主动脉瓣关闭不全一例并文献复习
- 2012年
- 目的探讨白塞病合并主动脉瓣关闭不全的诊断治疗。方法对1例患有白塞病合并主动脉瓣关闭不全的20岁男性患者的临床资料进行总结和分析并复习相关文献。结果患者因在入院24h内出现急性左心功能衰竭和急性肾功能衰竭,病情危重,接受了急诊主动脉瓣置换+三尖瓣整形术。该例患者术后恢复顺利,无并发症发生,痊愈出院。目前已随访9个月,心功能恢复至Ⅰ级。复查超声心动图未发现主动脉瓣瓣周漏发生,人工机械瓣膜功能良好。结论早期诊断、选择合理的手术方式,将有效提高白塞病合并瓣膜损害患者的治疗效果。
- 华平刘家良王萌江慧琦曾宽刘立宝敖翔杨艳旗
- 关键词：贝赫切特综合征主动脉瓣关闭不全
- Caspase-3沉默对缺血缺氧大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响
- 2013年
- 【目的】探讨沉默caspase-3对大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)在体外缺血缺氧环境下凋亡的影响。【方法】构建靶向caspase-3的shRNA重组慢病毒并转染MSC。建立缺血缺氧模型,流式细胞术和Hoechst荧光染色法检测细胞的凋亡情况。Western blot检测caspase-3的蛋白表达,Real-time PCR检测caspase-3、Bcl-2和Bax的mRNA表达。【结果】重组慢病毒成功转染MSC。缺血缺氧环境下,转染组的细胞凋亡率为(13.66±0.20)%,低于空载体组的(21.86±0.43)%和空白对照组的(22.28±0.48)%(P<0.01)。沉默caspase-3后caspase-3表达下调,Bcl-2表达上调,Bax表达下调,Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05)。【结论】沉默caspase-3能显著提高MSC在缺血缺氧环境下的存活能力。
- 华平刘家良杨淞然陶俊江慧琦王萌杨艳旗
- 关键词：骨髓间充质干细胞基因沉默CASPASE-3缺血缺氧凋亡
- RNA干扰抑制骨髓间充质干细胞中caspase-3基因的表达被引量：5
- 2012年
- 背景:研究发现,骨髓间充质干细胞移植入心肌梗死区域后易发生凋亡导致移植细胞存活率较低。目的:构建caspase-3基因的小分子干扰RNA片段(small interfering RNAs,siRNAs)表达质粒,探讨其在体外对骨髓间充质干细胞中caspase-3基因表达的抑制作用。方法:根据siRNA设计原则,针对caspase-3基因设计并合成siRNAs,构建caspase-3siRNA表达载体并利用脂质体介导方法瞬时转染骨髓间充质干细胞。实验分为正常对照组,阴性序列对照组(si-ncg)和3个干扰组(si-caspase-3-1、si-caspase-3-2和si-caspase-3-3)。结果与结论:成功构建了caspase-3siRNA表达载体并转染骨髓间充质干细胞。Westernblot和RT-PCR检测转染后的骨髓间充质干细胞中caspase-3蛋白和mRNA的表达下降,以转染si-caspase-3-3的骨髓间充质干细胞下降最明显。结果提示构建的caspase-3siRNA表达质粒在体外能抑制骨髓间充质干细胞中caspase-3基因的表达。
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- 关键词：骨髓间充质干细胞凋亡CASPASE-3RNA干扰
- 慢病毒介导的caspase-3沉默对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和凋亡的影响被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨沉默caspase-3对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法:构建靶向caspase-3的shRNA重组慢病毒并转染MSCs,通过real-time PCR和Western blotting在mRNA及蛋白水平鉴定转染结果。采用MTS法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期。Real-time PCR检测bcl-2和bax mRNA的表达。Hoechst荧光染色法检测细胞的凋亡情况。结果:Real-time PCR和Western blotting结果均表明成功建立稳定转染shRNA-caspase-3的大鼠MSCs细胞株。沉默caspase-3使MSCs的增殖率明显提高(P<0.05),且S期细胞百分比明显增多,为(52.66±0.30)%。沉默caspase-3后bcl-2 mRNA表达上调,bax mRNA表达下调,bcl-2/bax比值升高(P<0.05)。转染组的细胞凋亡率为(15.01±1.73)%,低于空载体组的(25.67±3.05)%和空白对照组的(23.67±1.16)%(P<0.05)。结论:沉默caspase-3能调控MSCs的细胞周期,促进细胞增殖,减少细胞凋亡。
- 华平刘家良杨淞然江慧琦王萌陶俊杨艳旗
- 关键词：骨髓间充质干细胞基因沉默半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3
- 猪红斑丹毒丝菌主动脉瓣心内膜炎一例报道及文献复习被引量：3
- 2013年
- 目的探讨猪红斑丹毒丝菌感染性心内膜炎的临床特点。方法对1例患有猪红斑丹毒丝菌致主动脉瓣心内膜炎的65岁男性患者的临床资料进行总结和分析并复习相关文献。结果患者因反复胸闷、心悸、气促2个月入院,术前血培养证实为猪红斑丹毒丝菌,超声心动图提示主动脉瓣脱垂、赘生物形成并重度关闭不全。考虑到患者心功能不全且赘生物较大,在应用青霉素抗感染24 h后,实施了急诊主动脉瓣置换+二尖瓣整形术。手术过程顺利,术后继续抗感染治疗4周后恢复良好,已痊愈出院。结论猪红斑丹毒丝菌是一种人兽共患病原体,与职业暴露有关,累及人的心脏瓣膜极为罕见,死亡率高。详细采集病史,早期诊断,早期治疗有助于改善预后。
- 华平王萌刘家良江慧琦曾宽杨艳旗
- 关键词：心内膜炎丹毒丝菌属心脏瓣膜
