刘宝明
- 作品数：6 被引量：20H指数：3
- 供职机构：北京大学基础医学院病原生物学系更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- A～D基因型乙型肝炎病毒全长逆转录酶区PCR方法的建立及应用被引量：6
- 2008年
- 目的建立适用于扩增我国常见的乙型肝炎病毒(HBV)A～D基因型全长逆转录酶(RT)区(包含全长HBsAg编码区)的聚合酶链反应(PCR)法,并确定其在分析临床标本中的应用价值。方法建立我国HBV基因序列库,设计适用于扩增A～D基因型HBV全长RT区引物,以A～D基因型HBV重组质粒为模板建立半巢式PCR(snPCR)法,并确定该法灵敏度。用所建立的snPCR对44份HBV DNA定量阳性(>5.0×102拷贝/ml)慢性乙型肝炎患者血清标本进行扩增及PCR产物直接测序。结果琼脂糖凝胶电泳及测序证实,snPCR可扩增A～D基因型HBV全长RT区,对A、B、C和D基因型HBV质粒扩增的灵敏度分别为1.2×103、7.0×102、6.0×102和6.0×102拷贝/ml。snPCR检测HBV DNA>5×102拷贝/ml血清标本的阳性率为88.64%(39/44),扩增阴性血清标本HBV DNA滴度均处于103拷贝/ml水平。扩增目的产物经直接测序确证无误。生物信息学分析显示,样品中B和C基因型分别占35.90%(14/39)和64.10%(25/39);其中15.38%(6/39)发生RT区变异,包括4例为已知耐药变异;7例(17.95%)存在HBsAg编码区变异,其中2例为已知免疫逃逸变异;6例(15.38%)发生RT区和HBsAg编码区"镜像改变"。结论建立了一种新的扩增全长RT区(涵盖全长HBsAg编码区)的snPCR。该法结合直接测序法,可同时分析我国HBVA～D基因型已知和潜在的耐药变异位点。
- 刘宝明李彤董建平胥婕李晓光严平王凤水闫玲李文鹏金晖杨靖娴庄辉
- 关键词：乙型肝炎病毒逆转录酶区耐药变异
- A～D基因型乙型肝炎病毒全长逆转录酶区PCR方法的建立及应用
- 目的建立适用于扩增我国常见的乙型肝炎病毒(HBV)A～D基因型全长逆转录酶(RT)区(包含全长HBsAg编码区)的聚合酶链反应(PCR)法,并确定其在分析临床标本中的应用价值。方法建立我国HBV基因序列库,设计适用于扩增...
- 刘宝明李彤董建平胥婕李晓光严平王凤水闫玲李文鹏金晖杨靖娴庄辉
- 关键词：乙型肝炎病毒逆转录酶区耐药变异
- 文献传递
- 1.2倍基因组长度C基因型HBV重组体构建及其在HepG2细胞中表达和复制研究
- 目的构建基于pBlueBac4.5质粒的1.2倍基因组长度C基因型HBV重组体,并研究其在HepG2细胞中的表达和复制。方法以重组质粒pWT上的1.2倍基因组长度C基因型HBV DNA序列和pBB4.5HBV1.3(D基...
- 李文鹏李彤闫玲刘宝明庄辉
- 关键词：HEPG2瞬时转染
- 文献传递
- 1.2倍基因组长度C基因型乙型肝炎病毒重组体构建及其在HepG2细胞中表达和复制被引量：8
- 2008年
- 目的构建基于pBlueBac4．5质粒的1．2倍基因组长度C基因型乙型肝炎病毒（HBV）重组体，并研究其在HepG2细胞中的表达和复制。方法以重组质粒pWT上的1．2倍基因组长度C基因型HBVDNA序列和pBB4．5HBV1．3（D基因型）上的pBlueBac4．5载体序列为模板，构建重组质粒pBB4．5HBV1．2（C基因型）。用FuGENEHD瞬时转染法，将pBB4．5HBV1．2导人HepG2细胞。用化学发光免疫分析法、Southern印迹杂交法、荧光定量PCR法，分别检测转染后不同时间点HBsAg和HBeAg、HBV复制中间体及HBVDNA水平。此外，对转染时重组质粒用量进行优化。结果酶切和序列分析证实，pBB4．5HBV1．2重组质粒构建成功。初步转染实验证实，在转染细胞培养上清中可检测到HBsAg和HBeAg。优化后转染条件为：使用60mm细胞培养皿，8～11tLgpBB4．5HBV1．2，质粒与转染试剂5：9（μg：μl）。在此条件下，5d实验周期内可检测到HBsAg和HBeAg持续表达（峰值一般出现在转染后第3天）、HBVDNA持续复制（10^6～10^8拷贝／ml）及HBVDNA复制中间体形成。结论在HepG2细胞中，建立了以杆状病毒转移载体pBlueBac4．5为基础的1．2倍基因组长度C基因型HBV体外培养体系，有望为研究HBV耐药、筛选新抗病毒药物等提供新技术平台。
- 李文鹏李彤闫玲刘宝明庄辉
- 关键词：乙型肝炎病毒HEPG2瞬时转染
- 核苷酸类似物治疗前慢性乙型肝炎病毒感染者乙型肝炎病毒反转录酶区突变序列分析被引量：1
- 2010年
- HBV变异率远高于其他DNA病毒，这是因为HBV有很高的复制率，并存在由RNA中间体到DNA负链的反转录环节，而此环节所需的HBV聚合酶缺失校正活性，不能去除错误掺入的碱基。HBV变异可以在慢性持续感染过程中自然发生，并受各种内、外源性因素影响，核苷酸类似物的长期使用，使我们已经非常关注耐药性HBV的产生，
- 焦秀娟孙谢文李彤刘宝明杨靖娴
- 关键词：慢性乙型肝炎核苷酸类似物反转录酶乙型肝炎病毒病毒感染者治疗前HBV变异
- 未经治疗的慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒耐药变异、基因型和血清型研究被引量：6
- 2010年
- 目的研究未经核苷（酸）类似物（NA）治疗的慢性乙型肝炎患者HBV耐药变异、基因型、基因亚型和血清型特点。方法从北京大学附属医院收集97例未经NA治疗的慢性乙型肝炎患者血清，用半巢式聚合酶链反应-直接测序法获得HBV全长逆转录酶区序列，用生物信息学技术筛查该区内11个经典耐药变异位点并鉴定基因型、基因亚型和血清型。用统计分析软件SPSS11．0进行t检验和Х^2检验。结果HBV在11个经典耐药变异位点上均为野生型氨基酸；B基因型和C基因型分别占36．1％（35／97）和63．9％（62／97），前者均属B2亚型，后者C2亚型占91．9％（57／62），CI亚型占6．5％（4／62），1例未能分出亚型。已知出生地的患者中，71．9％（23／32）B基因型感染者出生于我国南方地区，81．6％（40／49）C基因型感染者出生于北方地区，基因型地域分布特点明显，Х^2=23．19，P〈0．01。血清型为adr者占60．8％（59／97），与C基因型相关；为adw者占38．1％（37／97），与B基因型相关，Х^2=87．83，P〈0．01。结论未经NA治疗的慢性乙型肝炎患者体内野毒株为优势株，其基因型、基因亚型和血清型与患者出生地有关。
- 李晓光胥婕刘宝明杨靖娴闫玲李彤庄辉
- 关键词：抗药性基因型血清分型
