刘博文
- 作品数：13 被引量：39H指数：4
- 供职机构：天津医科大学附属肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 芹菜素诱导乳腺癌MCF-7细胞株蛋白激酶B相关性自噬性死亡被引量：2
- 2013年
- 目的 探讨芹菜素对乳腺癌MCF-7细胞株增殖的影响及其机制.方法 常规培养MCF-7细胞,用噻唑蓝（MTT）法评价芹菜素（0、10、20、40、80 μmol/L）处理乳腺癌MCF-7细胞株24、48 h的增殖抑制率；DNA ladder检测芹菜素（0、10、20、40 μmol/L）处理24 h对MCF-7细胞株凋亡的影响；、丫啶橙（AO）染色观察芹菜素（0、10、20、40μmol/L）处理24 h后MCF-7细胞自噬泡的形态及数量,然后通过流式细胞术对细胞自噬率进行定量分析；Western blot法检测芹菜素（0、10、20、40 μmol/L）处理24 h后自噬相关蛋白LC3、蛋白激酶B（Akt）及其磷酸化水平的变化；Akt cDNA瞬时转染MCF-7细胞,使其过表达,流式细胞术检测细胞自噬率的变化.结果 MTT显示,芹菜素明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,具有浓度依赖性及时间依赖性；DNA ladder并未显示出明显的阶梯状条带,提示芹菜素不能有效的诱导MCF-7细胞凋亡；AO染色显示芹菜素可诱导MCF-7细胞株自噬,且流式细胞术显示细胞自噬率具有浓度依赖性,芹菜素20、40 μmol/L组与对照组比较差异有统计学意义（P ＜0.01）；Western blot显示,芹菜素可增加LC3Ⅱ的表达,同时降低Akt的磷酸化水平；自噬抑制剂3-甲基腺苷（3-MA）可使MCF-7的增殖抑制率降低,与对照组比较,差异有统计学意义（P ＜0.05）；Akt cDNA瞬时转染使Akt的表达明显增加,AO染色流式细胞术结果示Akt的过表达使得自噬率降低,与control cDNA转染组比较,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 芹菜素不能有效地诱导乳腺癌MCF-7细胞株凋亡,而是通过诱导自噬性死亡的方式抑制其增殖,该过程与芹菜素抑制Akt相关通路的活性相关.
- 刘博文张斌张伟然赵洪猛曹旭晨
- 关键词：芹菜素乳腺癌自噬
- Aurora激酶抑制剂对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响被引量：5
- 2012年
- 目的观察Aurora激酶抑制剂VX-680对人乳腺癌MDA—MB-231细胞株增殖和凋亡的影响。方法不同浓度的VX-680处理MDA—MB-231细胞，倒置显微镜下观察细胞形态变化，用噻唑蓝（M1Tr）比色法和克隆形成实验检测乳腺癌细胞增殖，碘化丙锭（PI）单染法榆测细胞周期，免疫荧光观察核和纺锤体形态变化，免疫印迹法检测AuroraA／B蛋白、组蛋白和凋亡相关蛋白表达，Yo—Pro-1荧光染色观察细胞凋亡形态学变化。结果VX-680显著抑制MDA—MB-231增殖，24、48h半数抑制浓度（Ic50）分别为（2．362±0．599）、（0．102±0．556）μmol／L；经药物作用24h后，贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落；克隆形成率由（93．00±0．03）％降至（0．01±0．01）％，G0／G1期细胞由（51．27±0．75）％降至（5．87±0．49）％，G2／M期细胞由（17．67±1．25）％升高至（91．93±1．96）％，荧光染料法显示凋亡细胞数由（4．33±0．03）％增高至（44．00±0．04）％，实验组与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；细胞核与纺锤体结构紊乱；免疫印迹检测提示磷酸化AuroraA／B、磷酸化Histone H3表达水平降低，Caspase-3和PARP被剪切。结论VX-680抑制乳腺癌细胞MDA—MB-231增殖、诱导凋亡呈剂量依赖性。
- 张月张斌冯炜红李媛媛刘博文曹旭晨
- 关键词：乳腺癌AURORA增殖脱噬作用
- 芹菜素诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞系非P53依赖性凋亡的研究被引量：9
- 2013年
- 目的:探讨芹菜素(Apigenin)对乳腺癌MDA-MB-231细胞系凋亡的影响。方法:常规培养MDA-MB-231细胞,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法评价芹菜素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响。荧光染色法观察细胞形态学变化。流式细胞术(FCM)Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率。Western blot检测不同浓度芹菜素对Caspase-3,PARP,突变型P53,P73,PIG3,Bax,Bcl-2等凋亡相关蛋白表达的影响。RNA干扰技术检测P73对凋亡及下游靶基因PIG3表达的影响。结果:MTT结果显示,芹菜素10、20及40μM分别处理细胞24 h,发现芹菜素可有效抑制MDA-MB-231细胞增殖,且具有浓度依赖性和时间依赖性,实验组与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05),两组组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);荧光染色结果显示,对照组未观察到凋亡细胞,芹菜素10μM、20μM及40μM组细胞中均可见凋亡小体,其数目随芹菜素浓度的增加而逐渐增加,具有浓度依赖性;流式细胞术结果显示,与对照组比较,芹菜素10μM,20μM及40μM组早期凋亡率逐渐增加,呈明显的量效关系,实验组与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);Western blot结果显示,与对照组相比,芹菜素10μM、20μM及40μM组Caspase-3、PARP剪切带含量明显增加,P73、PIG3及Bax表达增加,而突变型P53与Bcl-2表达减少,且具有浓度依赖性。RNA干扰结果显示,与阴性对照组相比,p73-siRNA可有效抑制芹菜素诱导的PIG3表达,Caspase-3和PARP剪切含量也相应降低,实验组与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:芹菜素可通过非P53依赖性凋亡有效抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,其机制可能与下调突变型p53表达,上调P73介导的PIG3表达,以及Bax/Bcl-2比值增加有关。
- 张伟然张斌刘博文曹旭晨
- 关键词：芹菜素乳腺癌凋亡突变型P53
- PXD101对人乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡影响的机制探讨被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂PXD101对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、细胞周期及凋亡的影响及分子机制研究。方法:应用不同浓度PXD101处理培养的乳腺癌细胞株MCF-7,通过赛唑蓝比色(MTT)法和平板克隆形成实验检测药物对细胞增殖的影响;HoechSt33342荧光染色法观察细胞形态变化;流式细胞仪PI染色法检测细胞周期变化以及AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况;Westen blot检测p21、CyclinB1、PARP、Bcl-2以及Bax的蛋白表达。结果:PXD101以剂量时间依赖性抑制MCF-7细胞的增殖;荧光显微镜观察发现细胞核碎裂,出现凋亡小体;0、0.1、1、10μmol/L PXD101作用24 h后,G_2/M期细胞比例增加,分别为(12.66±1.55)%、(20.63±1.32)%、(23.20±1.82)%、(32.19±2.37)%(P<0.05),凋亡细胞也增加(P<0.05);p21表达增多,CyclinBl表达减少,PARP剪切明显增加,Bcl-2表达减少,Bax表达增加。结论:PXD101在体外条件下能够明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,诱导细胞周期阻滞及凋亡,并呈剂量依赖性。
- 李媛媛张斌赵洪猛冯炜红张月刘博文陈祖锦曹旭晨
- 关键词：乳腺癌细胞周期细胞凋亡
- c—Met抑制剂PHA665752诱导乳腺癌MDA—MB-231细胞凋亡的作用被引量：1
- 2011年
- 肝细胞生长因子（HGF）的特异性受体c—Met与乳腺癌的发生发展密切相关，其过度表达可以作为判断乳腺癌预后差的独立指标。本研究旨在观察PHA665752诱导乳腺癌细胞凋亡的作用。
- 冯炜红张斌张月赵洪猛李媛媛陈祖锦刘博文曹旭晨
- 关键词：癌细胞凋亡乳腺癌MDA特异性受体预后差
- 3-甲基腺苷对芹菜素诱导乳腺癌T47D细胞系自噬和凋亡的影响被引量：3
- 2011年
- 目的:研究自噬抑制剂3-甲基腺苷(3-methylaclenine,3-MA)对芹菜素诱导乳腺癌T47D细胞系自噬和凋亡的影响。方法:常规培养人乳腺癌T47D细胞,分为对照组、3-MA组、芹菜素组、3-MA+芹菜素组。MTT法检测各组的细胞增殖抑制率;GFP-LC3质粒转染观察各组细胞自噬情况;Hochest/Mito-Red/YO-PRO-1染色法观察各组细胞凋亡形态;Annexinv/PI双染法流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;western hlot法检测LC3及PARP的变化。结果:MTT示3-MA+芹菜素组的增殖抑制率明显高于其他各组(P<0.05);GFP-LC3质粒转染结果显示:对照组,3-MA组及3-MA+芹菜素组自噬不明显,而芹菜素组与其他各组相比自噬明显增多(P<0.05);3-MA+芹菜素组的凋亡细胞增多,各组凋亡率分别为(12.73±0.05)%,(18.46±0.03)%,(23.27±0.07)%,(34.14±0.05)%,与对照组相比有统计学意义(P<0.05);Western blot结果显示,芹菜素组LC3-Ⅱ增高,而3-MA组及3-MA+芹菜素组的LC3-Ⅱ显著减少,3-MA+芹菜素组PARP的剪切带相比其他各组明显增加。结论:自噬抑制剂3-MA抑制细胞自噬后,能够明显增强芹菜素对乳腺癌T47D细胞系的凋亡诱导效应。
- 刘博文张斌张伟然张月冯炜红李媛媛曹旭晨
- 关键词：芹菜素乳腺癌细胞凋亡
- 树突状细胞免疫治疗的新进展
- 2011年
- 树突状细胞（DC）为目前发现的体内最强的专职抗原提呈细胞，但在体内并不能进行充分的交叉提呈。目前可通过在体外制备DC疫苗或者与化疗等促凋亡治疗联用的方法，增强DC的抗原提呈能力，提高机体免疫系统的抗肿瘤作用。
- 刘博文张斌曹旭晨
- 关键词：树突细胞抗肿瘤药免疫疗法
- c-Met抑制剂SGX523诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞系的凋亡被引量：5
- 2012年
- 目的:研究c-Met小分子抑制剂SGX523对人乳腺癌细胞株的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法:以不同浓度的SGX523作用于乳腺癌细胞MDA-MB-231。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot法检测凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)、PARP的表达和c-Met及Akt磷酸化水平的变化。结果:SGX523能明显抑制乳腺癌细胞的增殖(P<0.05),其对MDA-MB-231细胞的半数抑制浓度(IC_(50))值为(0.767±0.115)μmoL/L。SGX523处理MDA-MB-231细胞48 h后,可诱导乳腺癌细胞凋亡和细胞周期G_0/G_1期阻滞。同时,SGX523可促进凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP的剪切,并有效抑制c-Met及AKT的磷酸化水平,呈一定的剂量依赖关系。结论:c-Met抑制剂SGX523通过诱导凋亡和G_0/G_1期阻滞来抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,其机制可能与c-Met/PI3K/AKT信号转导通路的磷酸化水平受抑制相关。
- 冯炜红张斌赵洪猛张月李媛媛陈祖锦刘博文曹旭晨
- 关键词：乳腺癌C-MET凋亡
- 芹菜素诱导乳腺癌T47D细胞系p53依赖性凋亡及G2/M期阻滞被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨芹菜素(apigenin)对乳腺癌T47D细胞系凋亡及细胞周期的影响。方法:常规培养T47D细胞,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测芹菜素对乳腺癌T47D细胞系细胞增殖的影响。荧光染色法观察凋亡细胞的形态变化流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布。Western blot检测不同浓度(0、10、20、40、80μM)芹菜素对凋亡及周期相关蛋白表达的影响。结果:随着芹菜素浓度的增加,芹菜素对T47D细胞的增殖抑制作用明显增强(P<0.05);凋亡荧光染色及流式细胞仪显示,芹菜素能够诱导乳腺癌T47D细胞凋亡,随着其浓度的增高,各组凋亡率分别为(2.41±0.072)%、(10.87±0.028)%、(18.02±0.056)%、(37.05±0.092)%和(78.38±0.082)%,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);流式周期分析显示,芹菜素能够使T47D细胞系G_2/M期阻滞,随着芹菜素浓度的增高,不同浓度组细胞G_2/M期所占的比例逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot显示P53、p21、Bax和p-Cdc2的含量及Caspase-3,PARP剪切明显增加,而Bcl-2、CyclinB1及Cdc2的含量却显著减少。结论:芹菜素能够诱导乳腺癌T47D细胞系p53依赖性凋亡及G_3/M期阻滞,从而明显抑制其增殖、
- 刘博文张斌张月冯炜红李媛媛张伟然曹旭晨
- 关键词：芹菜素乳腺癌细胞凋亡细胞周期
- 芹菜素诱导乳腺癌T47D细胞株自噬的研究被引量：4
- 2011年
- 芹菜素是一种植物提取物，广泛存在于水果、蔬菜、豆类和茶叶中。我们以乳腺癌T47D细胞株为研究对象，研究了不同浓度芹菜素处理后T47D细胞自噬水平的变化，探讨其机制。
- 刘博文张斌张月冯炜红李媛媛张伟然曹旭晨
- 关键词：T47D细胞自噬芹菜素细胞株乳腺癌植物提取物
