冯岚 作品数:10 被引量:30 H指数:4 供职机构: 北京医科大学 更多>> 发文基金: 美国中华医学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
小鼠造血干细胞因子的cDNA克隆化及在大肠杆菌表达 1994年 造血干细胞因子(SCF)是一种多功能造血生长因子,与其它造血生长因子协同作用,刺激不同分化阶段的造血细胞增殖和分化。本文采用RT-PCR技术从新生BALB/C小鼠胸腺组织克隆了SCF膜外功能区cDNA,进而在大肠杆菌表达出具有生物学活性的重组蛋白。 肖波 马大龙 周宝宏 狄春辉 冯岚 宋泉声 龙振洲关键词:干细胞因子 大肠杆菌 CDNA 克隆 人重组IL-8在大肠杆菌中表达及其活性检测 被引量:4 1991年 本文报道了利用基因工程技术在大肠杆菌中表达人重组白细胞介素8(rh(?)。将质粒pGEM-hIL-8中的IL-8cDNA片段亚克隆到表达载体pMS31b中,在大肠杆菌中成功地高效表达出人IL-8融合蛋白,表达产物具有体内、体外对小鼠中性粒细胞的趋化活性。表明N端连入一段细菌蛋白并不影响IL-8的趋化活性。 周宝宏 马大龙 庞建 宋泉声 狄春辉 肖波 冯岚 龙振洲关键词:白细胞介素 基因工程 白细胞介素8片段在大肠杆菌中表达及其功能研究 1994年 利用DNA重组技术在大肠杆菌中表达出白细胞介素8的N端43氨基酸片段(IL8-N)和C端24氨基酸片段(IL8-C),经过FACS和趋化活性鉴定表明,IL8-N和IL8-C均能与中性粒细胞结合,其中IL8-N能部分封闭IL-8的趋化活性。 周宝宏 马大龙 秦建中 冯岚 宋泉声 狄春辉 李建远关键词:白细胞介素8 片段 大肠杆菌 人白细胞介素-9cDNA的PCR扩增及其在大肠杆菌的表达 被引量:5 1994年 利用PCR技术从人外周血T细胞cDNA文库中扩增出人IL-9的cDNA,将其连入大肠杆菌表达载体后,可在大肠杆菌高效表达出人重组IL-9融合蛋白,表达量占菌体蛋白的25%左右,有明显的刺激正常人骨髓细胞集落形成的活性。 马大龙 狄春辉 许风浩 劳者歌 庞建 冯岚 叶齐鲁关键词:白细胞介素 大肠杆菌 聚合酶链反应 枸橼酸酐对原核表达重组GM-CSF的修饰作用 被引量:1 1996年 根据枸橼酸酐对蛋白质中的游离氨基进行化学修饰后可使蛋白质溶解度提高的原理,以大肠杆菌表达的人重组GM-CSF为模型,研究了枸橼酸酐修饰对含凝血酶识别位点的融合蛋白的作用,发现用微量枸橼酸酐修饰的重组GM-CSF变性、复性更容易,溶解度明显提高,并对凝血酶的消化更为敏感,使凝血酶用量降低100倍.GM-CSF活性测定结果证明枸橼酸酐修饰不影响其生物学活性.这些结果为枸橼酸酐修饰法在大肠杆菌表达重组蛋白纯化中的应用提供了新途径. 冯丹 袁勇 张颖妹 冯岚 范慧 狄春辉 宋泉声 马大龙关键词:粒细胞 巨噬细胞 集落刺激因子 GM-CSF 凝血酶对人重组内皮细胞衍生IL—8融合蛋白转换作用 被引量:6 1993年 本文报道利用基因工程技术在大肠杆菌中表达出入内皮细胞衍生IL-8(EDhIL-8)与细菌蛋白lacZ 的融合蛋白lac-hIL-8和lac-T-hIL-8,后者含有一个人工合成凝血酶切点。EDhIL-8上含有一个凝血酶切点,凝血酶可以将lac-hIL-8及以前表达的MS2-hIL-8水解为有生物活性的天然IL-8,而对含有两个凝血酶切点的lac-T-hIL-8无水解作用。这些结果提示凝血酶的功能不仅依赖于所识别的氨基酸,而且依赖于这些氨基酸形成的构象。 周宝宏 马大龙 狄春辉 宋泉声 冯岚 肖波 刘劼 龙振洲关键词:凝血酶 融合蛋白 白细胞介素8 人内皮细胞衍生的重组白细胞介素8在大肠杆菌中表达成功 1993年 将质粒pMS-hIL-8中的内皮细胞衍生IL-8(EDhIL-8)cDNA片段连入本室构建的天然蛋白高效表达载体pKPL-3a中,在大肠杆菌中表达的EDhIL-8占菌体总蛋白的5%~10%。体外试验表明,表达的EDhIL-8非融合蛋白对小鼠外周血多形核细胞具有明显的趋化活性。 周宝宏 马大龙 狄春辉 宋泉声 冯岚 肖波 刘劼 龙振洲关键词:白细胞介素8 大肠杆菌 基因工程 含凝血酶识别点的人重组IL-3在大肠杆菌的表达 被引量:5 1991年 马大龙 狄春辉 庞建 冯岚 周宝宏 宋泉声 肖波关键词:凝血酶 大肠杆菌 IL-3 细胞因子 大肠杆菌表达的人重组IL-3的纯化 被引量:11 1993年 本文继大肠杆菌表达含凝血酶切点的人重组IL-3融合蛋白成功的基础上进一步探讨了天然型rhIL-3的纯化。超声破碎细菌细胞得包涵体,经洗涤处理可使包涵体纯度达90%,用8mol/L尿素变性溶解包涵体沉淀后直接稀释复性,再超滤浓缩、凝血酶消化,释放天然型rhIL-3。经DEAE Sepharose Fast Flow和Sepharcyl-100 HR层析得到天然型IL-3,纯度达96%,回收率20%以上,具有刺激正常人骨髓细胞形成集落的活性。本实验为大批量重组IL-3的生产创造了条件。 冯岚 马大龙 狄春辉 宋泉声 周宝宏 龙振洲关键词:白细胞介素3 提纯 大肠杆菌 利用制备性等电聚焦仪Rotofor^R纯化人重组IL-3 1992年 将表达人重组IL-3的工程菌热诱导表达后超声裂菌,洗涤处理沉淀物,得到纯化包涵体.8 mol/L尿素将其变性溶解后,直接利用制备性等电聚焦仪Rotofor一步纯化,获得纯度90%以上的人重组IL-3,回收率约60%,每次回收15—20mg蛋白. 冯岚 马大龙 肖波 周宝宏 狄春辉 阎海 宋泉声 龙振洲关键词:白细胞介素3