关晓峰
- 作品数：10 被引量：48H指数：4
- 供职机构：长春生物制品研究所更多>>
- 发文基金：卫生部临床学科重点项目广东省自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程农业科学更多>>
- 精制胸腺活性肽药效学研究被引量：1
- 2003年
- 目的 考察精制胸腺活性肽免疫学活性。方法 建立BALB/c小鼠肝细胞肿瘤(腹水型)模型,经腹腔连续注射肝肿瘤细胞15d,检测各种生命指标,以观察抗肿瘤效果。同时用E-玫瑰花环实验及淋巴细胞转化实验评价其生物学活性。结果 抗肿瘤实验表明,生命各项指标均优于盐水对照组,用药组10d、15d的存活率明显高于对照组;E-玫瑰花环及淋巴细胞转化实验均显示精制胸腺活性肽组明显高于对照组。结论 精制胸腺活性肽具有明显的免疫增强作用。
- 王志武白春杰关晓峰夏天瑶李光谱张秀霞迟春萍
- 关键词：肝癌细胞免疫学活性药效学
- 重组嗜热脂肪酶工程菌发酵工艺的研究被引量：2
- 2003年
- 目的研究重组嗜热脂肪酶表达菌株E.coli BL21(DE3)的生长条件及产物表达规律.方法在发酵过程中,采用补加葡萄糖和蛋白胨,控制pH、溶氧值和温度的方法.结果最终发酵液在600nm的光密度值达到54,发酵液细菌湿重达96g/L,脂肪酶活性达到6.8×105U/L.结论确定了工程菌培养的最佳条件,提高了目的蛋白和菌体的收获量.
- 翁樑王智韩四平曹淑桂冯雁关晓峰刘丹迟春萍王志武
- 关键词：工程菌发酵工艺
- 聚乙二醇-重组人干扰素α2b结合物冻干保护剂的筛选被引量：3
- 2008年
- 目的筛选聚乙二醇-重组人干扰素α2b(PEG-rhIFNα2b)结合物的冻干保护剂。方法采用两步筛选法,以氨基酸、甘露醇和糖类作为冻干保护剂,与PEG-rhIFNα2b在适宜条件下制备成冻干制剂,分别于40、25和4℃放置不同时间取样,检测其理化性质和生物学稳定性,筛选最佳保护剂配比。结果通过6～12个月的试验,证实该冻干制剂外观、pH无明显改变,但再溶解速度略慢于以人血白蛋白作保护剂的冻干制剂;采用15mmol/L精氨酸+10mmol/L谷氨酸+4%甘露醇+1%蔗糖/海藻糖的冻干保护剂配方,在4℃和25℃放置12个月后,抗病毒活性仍较好,相当于人血白蛋白的冻干保护效果。结论已筛选出不含人血白蛋白的PEG-rhIFNα2b结合物的冻干保护剂。
- 张雪梅石晓丽姚为民陈云声赵大鹏关晓峰赵虹盛军孙金海
- 关键词：聚乙二醇重组人干扰素Α2B结合物保护剂
- 应用pET系统表达rhIFN-α2b基因的研究被引量：8
- 2003年
- 目的 以构建的pET28a为表达载体,探讨人 IFN-α2b基因在pET系统中的表达。方法 合成引物,通过PCR扩增人 IFN-α2b基因并引入点突变,在不改变天然 IFN-α2b氨基酸序列的前提下,使原 IFN-α2b基因4个大肠杆菌稀有密码子改变为偏爱密码子,在起始密码子后,编码前16个氨基酸的碱基序列均成为大肠杆菌的偏爱密码子。将PCR产物次级克隆人pET28a载体,构建重组表达载pET28a-IFN-α2b。筛选正确的重组表达质粒pET28a-IFN-α2b转入感受态表达菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,粗提并检测 IFN-α2b活性。结果 重组质粒pET28a-IFN-α2b在宿主菌 BL21(DE3)中表达出的rhIFN-α2b以可溶性蛋白形式存在于粗提上清液中,与原来 pBV889系统表达的干扰素相比,具有更高的生物学活性。结论 应用pET表达系统可表达出具有更高生物学活性的rhIFN-α2b蛋白。
- 张一折刘照惠吴隼关晓峰
- 关键词：氨基酸序列点突变偏爱密码子
- 幽门螺杆菌尿素酶的纯化及其特性被引量：2
- 2000年
- 本文利用Sephacry1S 2 0 0和Q Sepharose两步层析 ,从HP蒸馏水浸液中提取纯化尿素酶 ,并对其特性进行了测定 ,证明HP尿毒酶各含一个 6 6kD和 2 9 5kD的亚单位 ,并以 6个分子聚合成 6 2 5kD大分子蛋白 ,有很好的抗原性 ,并显示特异的血清学反应。用HP超声浸液抗原和尿素酶 ,加入 2 μg霍乱毒素粘膜佐剂 ,给SPFBALB/C小鼠口服免疫 ,可使 80 %小鼠抵抗HP活菌的攻击 ,证明尿素酶是一种抗HP的保护性抗原。
- 陈爽李立申文生关晓峰陈旻湖于丰彦杨景芳沈红杰
- 关键词：尿素酶柱层析SDS-PAGE纯化幽门螺杆菌
- 胸腺肽纯化工艺的改进被引量：6
- 2003年
- 目的 建立高效、快速、简便的纯化胸腺肽方法,以便提高胸腺素α1含量及活性,减少过敏反应。方法 采用 DEAE Sepharose FF、CM-Sephrose两种串联柱层析纯化。结果 纯化后的胸腺肽电泳结果出现明显的胸腺素α1带、玫瑰花结率可达33％(绝对值)以上,相对分子质量明显在3 100左右,无过敏反应。结论 建立了高效、规模化的胸腺肽纯化方法,提高了胸腺肽质量。
- 李光谱迟春萍张秀霞关晓峰王志武盛军郭岩
- 关键词：胸腺肽纯化工艺胸腺素Α1活性过敏反应
- 用乳糖作为诱导剂进行重组蛋白的表达被引量：12
- 2005年
- 目的研究用乳糖替代IPTG作为诱导剂进行重组蛋白的表达。方法以表达SARS刺突蛋白片段的工程菌BL21(DE3)/S为模型菌株,采用葡萄糖、甘油作为碳源,不同浓度的乳糖和异乳糖作为诱导剂,在摇瓶中进行表达实验。在40L发酵罐中进行验证。结果在摇瓶实验中,乳糖浓度大于0.5mmol/L即可以很好地诱导目的蛋白的表达,表达量与IPTG诱导时相当;葡萄糖的存在可以抑制乳糖,但不能抑制异乳糖的诱导作用;使用甘油作为碳源,既不抑制乳糖,也不抑制异乳糖的诱导作用。在发酵罐实验中,诱导初始阶段葡糖糖的存在抑制乳糖的诱导作用。结论在以乳糖操纵子为调控手段的工程菌表达系统中,可以使用乳糖作为诱导剂,诱导阶段应采用非葡萄糖碳源。
- 郝淑美王宣军张秀霞方勇关晓峰盛军
- 关键词：乳糖操纵子重组蛋白诱导剂乳糖目的蛋白IPTG
- 应用篮式生物反应器培养1A_5杂交瘤细胞及单克隆抗体分泌
- 2001年
- 目的 为了提高体外培养的杂交瘤细胞单克隆抗体的合成分泌，并为治疗型人源化单克隆抗体生 产摸索条件。方法 应用５Ｌ篮式及非篮式生物反应器培养１Ａ５杂交瘤细胞，以分泌干扰素单克隆抗体，从中对 １Ａ５细胞的接种浓度、反应动态、培养方式等进行研究。结果 细胞最适的接种浓度为２．０×１０５／ｍｌ左右；同非篮式 培养相比，在篮式培养过程中，通过葡萄糖消耗率的监测，及时地调节培养条件及换液时间，延长了培养周期，增加 了每罐收液批次，并且每次是全量换液，最高收液效价为１：４０９６。结论（１）１Ａ５ 细胞分泌干扰素单抗属于负生长 耦连型，葡萄糖消耗率与细胞的生长呈线性关系，可以利用糖消耗率的变化判断篮式生物反应器中细胞生长状况； （２）篮式生物反应器载体培养优于非篮式生物反应器悬浮培养；（３）适当地增加培养基中葡萄糖的量，可以提高干 扰素单抗的合成分泌。
- 李云富王妍李健平张秀霞迟春萍滕洪刚关晓峰王秋香
- 关键词：单克隆抗体杂交瘤细胞
- 尿素酶疫苗在防治幽门螺杆菌感染的动物实验研究被引量：15
- 1999年
- 目的利用人类幽门螺杆菌（Ｈｐ）感染的小鼠模型研究Ｈｐ粗抗原及纯化尿素酶在预防与治疗Ｈｐ感染的作用。方法超声粉碎制备Ｈｐ全菌抗原，化学提纯制备Ｈｐ尿素酶，霍乱毒素（ＣＴ）为免疫佐剂。实验分为预防与治疗两部分。预防部分把实验动物无特定致病菌（Ｓ．Ｐ．Ｆ．）ＢＡＬＢ／ｃ小白鼠分成５组，分别通过灌胃方法给予尿素酶（２５０μｇ）加ＣＴ（２μｇ）、Ｈｐ粗抗原（１ｍｇ）加ＣＴ（２μｇ）、生理盐水、单纯尿素酶（２５０μｇ）、单纯ＣＴ（２μｇ），每周１次，共４次。２周后再用活Ｈｐ灌胃，再４周后处死动物。治疗部分把已感染Ｈｐ的小白鼠分成５组，分组与治疗方法同预防部分，治疗结束后４周处死动物，取胃粘膜行尿素酶试验与改良Ｇｉｅｍｓａ染色检查Ｈｐ情况。结果预防实验的保护率分别为，尿素酶加ＣＴ７０％（７／１０），Ｈｐ粗抗原＋ＣＴ８０％（８／１０），生理盐水、单纯尿素酶、单纯ＣＴ保护率均为０。治疗实验各组Ｈｐ根除率分别为：尿素酶加ＣＴ６３．６％（７／１１），Ｈｐ粗抗原加ＣＴ４４．４％（４／９），生理盐水组、单纯尿素酶、单纯ＣＴ组均无治疗作用。结论由尿素酶加免疫佐剂组成的口服疫苗，不仅有预防Ｈｐ感染的作用，同时也有根除已感染的Ｈｐ的作用。
- 陈湖刘德铮于丰彦申文生曾志荣陈爽陈为陈爽陈为杨景芳张嘉铭李立
- 关键词：幽门螺杆菌尿素酶疫苗动物实验
- 高效表达人IL-2工程菌株的稳定性监测
- 2003年
- 目的 为IL - 2的规模化生产提供可靠的生产用菌种。方法 冻干 2年的工作种子批经理化、微生物、生物学活性等分子水平的检测 ,进行定期监测。结果 经全面检测 ,包括基因序列分析等与原始菌种一致。结论 高效重组人IL - 2生产用菌种 ,符合《中国生物制品规程》2 0 0 0版检标准 ,冻干菌种 - 2 0℃保存 2年 。
- 关晓峰郭桥徐福平魏宪志宋昌玲冷梅
- 关键词：工程菌
