侯晓军
- 作品数：61 被引量：102H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金军队医药卫生科研基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>
- 抑制2型志贺毒素活性的多肽TF1及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种抑制2型志贺毒素活性的多肽TF1及其编码基因与应用。本发明提供的多肽，命名为TF1(又名P1)，其氨基酸序列如序列表中序列1所示。该多肽P1可以做成药物以预防和/或治疗由2型志贺毒素或产2型志贺毒素的病原...
- 王慧李涛侯晓军王琴屠伟刘越男史晶蔡昆
- 人源抗狂犬病毒糖蛋白稳定型抗体精氨酸密码子突变株的构建及其在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达被引量：2
- 2008年
- 目的:对人源抗狂犬病毒糖蛋白(GPRV)单链二硫键稳定抗体(ScdsFv)进行精氨酸密码子修饰,实现其在酵母中的分泌表达,并检测其生物学活性。方法:参照巴斯德毕赤酵母偏好密码子,对抗GPRV ScdsFv原核表达基因进行密码子修饰,并通过点基因融合技术构建ScdsFv重组酵母表达基因,连接pPIC9K构建重组表达质粒pPIC9K-ScdsFv,电转化毕赤酵母GS115,经筛选后进行甲醇诱导表达。结果:SDS-PAGE及Western blot检测到重组表达质粒在30℃经甲醇诱导表达的蛋白相对分子质量为30000;荧光抗体试验验证ScdsFv能靶向结合GPRV;MTT试验说明ScdsFv能中和狂犬病毒,具有一定的细胞保护作用。结论:重组ScdsFv在酵母系统中可以有效表达,具有较好的生物学活性。
- 蔡昆王慧史晶包士中侯晓军荫俊
- 关键词：狂犬病毒糖蛋白巴斯德毕赤酵母分泌表达
- 一种新型融合蛋白SSI、其用途及专用基因
- 本发明公开了一种融合蛋白SSI，该融合蛋白包含EHEC O157的Stx2B、Stx1B和Int281三种保护性抗原。它具有序列表中序列1所示的氨基酸序列，其编码基因具有序列表中序列2所示的核苷酸序列。该融合蛋白是将EH...
- 王慧高翔蔡昆侯晓军王琴李涛
- A型产气荚膜梭菌α毒素全基因的分子克隆与核苷酸序列分析被引量：2
- 2003年
- 应用PCR技术,从A型产气荚膜梭菌菌株NCTC64609中扩增出A型产气荚膜梭菌α毒素全基因(cpa1229基因)并将其克隆至pMD18-T载体中。经转化、IPTG/X-gal选择培养,提取质粒,PCR和EcoRI/PstI双酶切鉴定,筛选阳性重组克隆。经核苷酸序列分析证实,cpa1229基因阅读开放框架由1194bp组成。经GenBank检索对照分析,cpa1229基因序列与国外文献报道者同源性达98.3%,表明本实验所克隆的cpa1229基因即为A型产气荚膜梭菌α毒素基因。
- 林明辉荫俊王慧宋伟邢洪光侯晓军
- 关键词：A型产气荚膜梭菌Α毒素分子克隆核苷酸序列
- 志贺毒素B亚单位及其模拟表位的制备和免疫保护效应
- 2008年
- 目的:对重组表达的StxB和预测的模拟表位肽进行免疫保护效应评价。方法:用分子生物学方法构建基因工程菌,IPTG诱导表达重组StxB,经复性后进行离子交换层析纯化。同时采用生物信息学手段对StxB的表位相关参数进行分析,预测StxB可能的抗原表位。以纯化的StxB和合成的模拟表位肽免疫小鼠后攻毒,评价StxB及其模拟表位肽的免疫保护效应。结果:表达并制备了90%以上纯度重组StxB;发现p14和p17多肽易形成转角和无规卷曲的柔性区段,可及性、极性和亲水性较强,是可能的抗原表位。免疫保护试验显示,经重组StxB和合成多肽免疫的小鼠发病延迟,症状减轻,存活率显著提高。结论:重组StxB和预测的模拟表位肽具有良好的免疫保护效果,为亚单位疫苗及其作用机制的研究奠定了基础。
- 包士中史晶蔡昆侯晓军高翔刘昊荫俊王慧
- 关键词：模拟表位
- 人源抗狂犬病毒二硫键稳定抗体在大肠杆菌中的融合表达被引量：4
- 2007年
- 目的在大肠杆菌pMAL-P2x系统中表达anti-rabiesMBP-ScdsFv融合蛋白,酶切获得目的蛋白ScdsFv,进行纯化、鉴定及简单活性分析。方法利用DNA重组技术,将全长的ScdsFv蛋白基因克隆至原核表达载体pMAL-p2x中,重组质粒转化大肠杆菌E.coliER2566,IPTG诱导表达。表达产物经Xa酶切后,经Ni柱、AmyloseResin亲和层析进行纯化,SDS-PAGE和Western blot对其进行鉴定,ELISA检测其结合活性。结果成功地构建了重组质粒pMAL-ScdsFv,经诱导表达、蛋白酶切、亲和纯化后获得目的蛋白。ELISA检测其具有抗原特异结合活性,其热稳定性有显著提高。结论抗狂犬病毒ScdsFv蛋白具有良好的结合活性和生物学活性稳定性,可作为候选分子用于狂犬病的防治研究。
- 蔡昆王慧史晶包士中侯晓军荫俊
- 关键词：原核表达
- 肠出血性大肠杆菌毒力相关基因突变株的构建
- 2012年
- 目的:利用Red重组系统敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7的毒力基因espA、espB、espD,构建3株突变株。方法:以肠出血性大肠杆菌O157∶H7为模板,PCR扩增基因两翼的同源序列;将PCR产物插入pEASY-T1载体并测序,将测序正确的上、下游同源序列分步酶切,构建于pUC19-kan质粒上,经PCR获得两端同源序列中间嵌合卡那霉素抗性基因标记的线性片段,利用质粒pKD46介导的重组技术,敲除espA、espB、espD基因,之后转入pCP20质粒以去除抗性标记,最后测定突变株及野生菌株的生长曲线。结果:敲除了肠出血性大肠杆菌O157∶H7的毒力基因espA、es pB、espD,获得3株突变株,突变株与野生株的生长曲线相近。结论:为进一步研究espA、espB、espD基因在肠出血性大肠杆菌O157∶H7致病过程中的作用奠定了基础。
- 姜楠王琴李涛侯晓军肖乐房华丽罗森王慧
- 关键词：RED重组系统
- SNAP-25基因克隆及其在大肠杆菌中的表达与鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:构建SNAP-25基因的原核表达载体pET22b-SNAP-25,对表达产物活性进行初步鉴定。方法:根据GenBank中已报道的SNAP-25基因序列,设计特异引物,通过RT-PCR从小鼠全脑组织总RNA中得到基因。将全长基因克隆至原核表达载体pET22b中,重组质粒转化大肠杆菌E.coliBL21感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析进行纯化。通过SDS-PAGE和免疫印迹对其进行鉴定,并对该蛋白进行活性的初步分析。结果与结论:成功构建了原核表达载体pET22b-SNAP-25,Western印迹证实重组蛋白获得表达。表达的重组蛋白与A型肉毒毒素混合反应,经SDS-PAGE验证,重组蛋白具有被毒素特异性切割的活性。
- 刘昊史晶蔡昆高翔侯晓军王慧
- 关键词：肉毒毒素底物原核表达
- 重组A型产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原的制备及初步免疫保护作用研究被引量：13
- 2004年
- 诱导表达重组工程菌pBV cpa4 0 8后 ,将表达菌体超声破碎 ,上清经 80 %饱和硫酸铵一次沉淀 ,经透析 ,上凝胶过滤层析柱进行分离纯化 ,薄层凝胶扫描结果显示 ,纯化的蛋白纯度达 95 %以上 ;用纯化蛋白免疫昆明小鼠 ,以 1 0MLD1 0 0 腹腔进行攻击 ,被免疫小鼠获得了 10 0 %的保护。
- 林明辉荫俊邢洪光侯晓军王慧宋伟
- 关键词：保护性抗原免疫保护作用产气荚膜梭菌
- 幽门螺旋杆菌ureB、vacA基因的原核表达产物及其与感染病人血清的免疫反应性
- 2008年
- 目的在大肠杆菌中重组表达幽门螺旋杆菌UreB、VacA蛋白,并对目的产物与感染病人血清的反应性进行验证。方法PCR扩增获得ureB、vacA基因,分子生物学方法将基因片段克隆入pET22b(+)表达载体并在大肠杆菌中诱导表达,表达产物经Ni离子亲和层析进行纯化,纯化产物采用Western Blot方法鉴定其与感染病人血清的免疫反应性。结果构建的重组大肠杆菌高效表达UreB、VacA蛋白,Ni离子亲和层析后获得90%以上纯度的目的蛋白,与感染病人血清具有良好的免疫反应性。结论重组UreB、VacA蛋白可作为幽门螺旋杆菌感染检测的候选分子。
- 包士中史晶蔡昆侯晓军荫俊王慧
- 关键词：尿素酶B亚单位空泡毒素免疫反应性
