严思
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 供职机构：广东药科大学更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 重组人白细胞介素7蛋白的表达、复性和纯化被引量：4
- 2014年
- 目的表达、复性和纯化重组人白细胞介素7(recombinant human interleukin-7,rhIL-7)蛋白,为其功能研究打下基础。方法在已经对IL-7基因TA克隆的基础上进行亚克隆,插入pET-21b载体中,构建rhIL-7的原核表达载体,阳性克隆经测序成功后转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,优化rhIL-7蛋白表达条件,并对表达的蛋白进行复性及纯化,利用免疫印迹鉴定重组蛋白。结果表达的蛋白与预期相对分子质量17 400相符,经优化后确定蛋白表达条件为:诱导温度为37℃、IPTG诱导浓度为1.0 mmol/L、诱导时间为2 h,且rhIL-7的复性效率较好(约50%),纯化后蛋白纯度高达95%以上,并经Western blot证实表达的蛋白为rhIL-7。结论成功获得高纯度的rhIL-7复性蛋白。
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- 关键词：白细胞介素7复性纯化
- 白细胞介素7剪接变异体蛋白的表达、复性和纯化被引量：1
- 2016年
- 目的表达、复性和纯化重组人白细胞介素7剪接变异体蛋白(interleukin-7 splice variants,IL-7splice variants),为下一步功能研究奠定基础。方法在IL-7剪接变异体(IL-7δ4/5以及IL-7δ3/4)cDNA克隆的基础上进行亚克隆,插入细菌表达载体pET-21b中,构建相应的原核表达载体,阳性克隆测序,证实其构建成功,转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,对各蛋白表达条件进行优化、复性及纯化,利用Western blot鉴定重组蛋白。结果各表达蛋白与预期相对分子质量(10.3 ku、9.3 ku)相符,纯化后蛋白纯度高达95%以上,并经免疫印迹鉴定证实表达的蛋白为IL-7δ4/5和IL-7δ3/4。结论成功获得高纯度的IL-7剪接变异体复性蛋白。
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- 关键词：复性纯化
- 缺第4外显子的IL-7剪接变异体的表达、纯化与活性研究被引量：1
- 2015年
- 目的构建、表达和纯化缺乏第4外显子的IL-7剪接变异体IL-7δ4(interleukin-7 splice variant lacking exon4,IL-7δ4),并对其生物活性进行初步研究。方法将TA克隆成功的IL-7δ4基因克隆至p ET-21b载体中,构建p ET-21b-IL-7δ4的原核表达载体,阳性克隆经测序正确后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,进行IL-7δ4重组蛋白的表达、复性、纯化、Western blot法鉴定,分析其对外周血单核细胞凋亡蛋白BCL-2表达及凋亡的影响。结果成功构建重组原核表达质粒p ET-21b-IL-7δ4,表达蛋白的相对分子质量为12 400,与预期大小一致;复性效率较高(约65%),纯化后获得的蛋白纯度大于95%,Western blot证实其为rh IL-7δ4;与对照组比较,rh IL-7δ4能明显诱导外周血单核细胞凋亡蛋白BCL-2的表达,并抑制其凋亡(P<0.01)。结论成功表达高纯度且具有生物活性的rh IL-7δ4复性蛋白,它能明显上调外周血单核细胞凋亡蛋白BCL-2的表达,起抑制PBMCs凋亡作用。
- 陈鉴华严思李小波金小宝朱家勇潘德顺
- 关键词：剪接变异体纯化活性鉴定
- 缺第4和5外显子的IL-7剪接变异体蛋白表达及活性研究
- 研究背景： 机体多种细胞都能产生IL-7，其主要生物作用是参与机体的免疫调节;IL-7有多个剪接变异体，其生物活性的研究才刚刚开始。研究报道 IL-7具有强大的抗纤维化作用，其作用机制主要为通过激活 JAK1/STAT...
- 严思
- 关键词：肺纤维化原核表达成纤维细胞
