魏传杰
- 作品数：8 被引量：2H指数：1
- 供职机构：南华大学公共卫生学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- pGenesil-1-Atg7-shRNA真核表达载体的构建
- 2014年
- 目的利用RNA干扰技术,构建pGenesil-1质粒载体介导靶向自噬基因Atg7的shRNA真核表达载体。方法根据GenBank中Atg7基因的cDNA序列(NM-001136031),设计有小发卡结构的三条寡核苷酸序列,连接到空载体pGenesil-1中,转化到JM109菌株,选取阳性克隆,进行酶切鉴定和DNA测序分析。结果经双酶切结果显示合成的shRNA序列成功连接到pGenesil-1质粒载体中,DNA测序结果证实干扰序列和目的序列相同,重组载体pGenesil-1-Atg7-shRNA构建成功。结论成功构建干扰人Atg7基因的重组表达载体,为研究Atg7蛋白的生物学功能提供了研究基础。
- 魏传杰肖双夏炎龙鼎新
- 关键词：RNA干扰自噬
- 钙信号转导在TOCP诱导人成神经瘤母细胞SH-SY5Y细胞自噬中的作用
- 目的:从细胞层面探讨三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)的神经毒性作用机制。方法:采用人成神经瘤母细胞SH-SY5Y为模型,全反式维甲酸诱导细胞分化,不同浓度的TOCP染毒未分化与分化的SH-SY5Y细胞6~72 h,荧光分光光...
- 肖双魏传杰江岚龙鼎新
- 关键词：自噬泛素蛋白酶体系统
- 文献传递
- 稳定沉默Beclin1的人成神经瘤SH-SY5Y细胞系的构建
- 2014年
- 为了构建pGenesil-1-Beclin1真核表达载体,并建立Beclin1稳定沉默的人成神经瘤SH-SY5Y细胞系,将合成的shRNA片段连接pGenesil-1质粒,构建成重组质粒pGenesil-1-Beclin1,转化其至感受态大肠杆菌JM109,挑取阳性克隆进行双酶切和DNA测序鉴定。常规培养SH-SY5Y细胞,将重组质粒pGenesil-1-Beclin1和空白对照质粒pGenesil-1转染SH-SY5Y细胞,G418抗性筛选,在荧光显微镜下挑取单细胞克隆并扩大培养至稳定细胞株,经RT-PCR和Western blot检测Beclin1基因的表达。经酶切和DNA测序鉴定重组真核表达载体构建正确,成功筛选出两株细胞系。和对照组转染pGenesil-1的细胞系相比,转染pGenesil-1-Beclin1细胞系的Beclin1mRNA表达下降71.28%±1.45%(P<0.05),Beclin1蛋白表达下降75.50%±2.63%(P<0.05)。提示已经成功构建pGenesil-1-Beclin1真核表达载体并建立了Beclin1基因稳定沉默的SH-SY5Y细胞系,为研究Beclin1功能提供了细胞模型。
- 魏传杰肖双江岚谭琰黄波龙鼎新
- 关键词：SH-SY5Y细胞克隆
- 三邻甲苯磷酸酯对人成神经瘤SH-SY5Y细胞calpain活性的影响被引量：1
- 2014年
- 目的研究三邻甲苯磷酸酯(TOCP)对人成神经瘤细胞(SH-SY5Y)calpain活性的影响。方法用全反式维甲酸诱导SH-SY5Y细胞分化,用不同浓度的TOCP(0、0.25、0.5、1.0mM)染毒未分化或分化的SH-SY5Y细胞不同时间(12、24、48h),用20μM盐酸维拉帕米(verapamil)和100μM二苯基硼酸-2-氨基乙酯(2-APB)预处理细胞15min后染毒TOCP 1.0mM 48h,采用荧光分光光度法测calpain活性。结果随着染毒浓度和时间的增加,TOCP活化未分化与分化的SH-SY5Y细胞calpain活性(P<0.05),钙通道抑制剂verapamil和2-APB预处理细胞能抑制TOCP引起的calpain活性升高(P<0.05)。结论 TOCP通过SH-SY5Y细胞内钙紊乱而活化calpain活性。
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- 关键词：SH-SY5Y细胞钙蛋白酶盐酸维拉帕米
- 抑制Beclin1促进TOCP诱导人成神经瘤SH-SY5Y细胞产生凋亡
- 目的
探讨自噬与凋亡在三邻甲苯基磷酸酯（Tri-ortho-cresyl phosphate，TOCP）诱发SH-SY5Y细胞神经毒性中的关系，进一步阐述TOCP神经毒性的作用机制。
方法
1．采用RN...
- 魏传杰
- 关键词：BECLIN1凋亡
- 文献传递
- 三邻甲苯基磷酸酯对人成神经瘤SH-SY5Y细胞内PKC活性及转位的影响被引量：1
- 2013年
- 目的研究三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)对人成神经瘤SH-SY5Y细胞蛋白激酶C(PKC)活性和转位的影响。方法以TOCP(0、0.25、0.5、1.0 mmol/L)对人成神经瘤细胞系SH-SY5Y细胞进行染毒,染毒时间为12、24和48 h,用PKC活性检测试剂盒检测PKC的活性,间接免疫荧光术检测PKC在细胞内的定位,荧光倒置显微镜观察结果。结果 1.0 mmol/L TOCP作用SH-SY5Y细胞24 h,PKC的活性最强,并能导致PKC由胞质向胞膜转位。结论 TOCP作用SH-SY5Y细胞后,能激活PKC,增加膜转位。
- 江岚李小玲魏传杰肖双谭琰刘瑶龙鼎新
- 关键词：SH-SY5Y细胞PKC
- 抑制自噬促使TOCP诱发人成神经瘤细胞发生凋亡
- 目的探讨自噬与凋亡在TOCP引发的神经毒性中的关系。方法采用RNAi技术,构建pGenesil-1-Beclin1-shRNA真核表达载体;将重组质粒转染SH-SY5Y细胞,G418筛选稳定表达Beclin1-shRNA...
- 魏传杰肖双江岚龙鼎新
- 关键词：TOCPBECLIN1RNAI自噬凋亡
- 文献传递
- 钙信号转导在TOCP诱导SH-SY5Y细胞自噬中的作用
- 目的为了更进一步了解三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)的神经毒性和钙信号转导在TOCP诱导自噬中的作用,探讨泛素蛋白酶体系统在TOCP诱导自噬过程中的变化。方法采用人成神经瘤母细胞SH-SY5Y为模型,全反式维甲酸诱导细胞分化...
- 肖双魏传杰江岚龙鼎新
- 关键词：自噬钙泛素蛋白酶体系统
- 文献传递
