高永鹏
- 作品数：12 被引量：12H指数：2
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- SEA联合K562细胞体外诱导正常人脐带血单核细胞TCRζ链表达的作用被引量：1
- 2010年
- 目的:研究金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对K562细胞体外诱导脐血T细胞活化TCRζ链基因表达情况。方法:常规分离4例脐带血单核细胞,分别与抗CD3单克隆抗体、单纯K562细胞、SEA以及SEA联合K562细胞共培养,诱导T细胞活化增殖,并设空白对照组。刺激培养48 h后收集各组细胞提取mRNA并合成cD-NA,采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量检测TCRζ链在不同组别T淋巴细胞中的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式:2-ΔΔCt计算TCRζ链表达差异倍数。结果:抗CD3单抗组、K562细胞组、SEA组、SEA联合K562细胞组诱导培养T细胞中TCRζ链表达差异倍数分别是(4.52±0.96)、(1.65±0.26)、(1.43±0.44)、(3.41±0.30),表明各组均有活化T细胞的作用,但各组TCRζ链表达水平有差异,其中SEA联合k562细胞组的T细胞ζ链基因表达均明显高于单纯k562组及单纯SEA组(P<0.01)。结论:超抗原SEA有助于增强K562细胞体外诱导T细胞活化作用。
- 高永鹏林晨田红霞高珂郜世隽江振友陈少华沈琦李扬秋
- 关键词：脐带血BCR-ABL融合蛋白
- BCR-ABL-SEA DNA疫苗诱导BALB/c小鼠特异性免疫应答的研究
- 目的：了解BCR-ABL-SEA双表达DNA疫苗诱导BALB/c小鼠特异性细胞和体液免疫应答效应,为进一步开发慢性粒细胞白血病(CML)疫苗提供可行性研究资料;研究金黄色葡萄球菌肠毒素A (SEA)对K562细胞体外诱导...
- 高永鹏
- 关键词：BCR-ABL基因DNA疫苗
- 文献传递
- BCR-ABL-SEA DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的免疫应答被引量：2
- 2011年
- 目的:了解BCR-ABL-SEA双表达DNA疫苗诱导BALB/c小鼠特异性细胞和体液免疫应答效应。方法:用已成功构建的重组双表达BCR-ABL多肽和SEA多肽的质粒BCR-ABL-pIRES-SEA(B-P-S)免疫小鼠,间隔14 d共3次。相同方法用单表达BCR-ABL多肽或SEA多肽的质粒BCR-ABL-pIRES和SEA-pIRES免疫小鼠作对照。利用CCK-8比色法检测小鼠脾脏T细胞对K562细胞株的杀伤活性;流式细胞术测定小鼠脾脏CD4+与CD8+T细胞表达情况;ELISA法检测小鼠血清中干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)生成情况;间接免疫荧光法检测血清中抗BCR-ABL抗体。结果:免疫后第7周时,双表达重组质粒B-P-S组小鼠脾脏CTL细胞针对K562杀伤率、血清中INF-γ含量均明显高于单表达BCR-ABL-pIRES组和SEA-pIRES组(P<0.05);CD4+/CD8+T细胞比值、血清中IL-4含量各组之间无明显差异(P>0.05);荧光显微镜检测到血清中有抗BCR-ABL抗体。结论:所构建的BCR-ABL-SEA重组双表达质粒可诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫应答效应。
- 高永鹏林晨田红霞陈琛秦雅楠周羽竝李扬秋
- 关键词：葡萄球菌肠毒素A疫苗
- 超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A对活化T细胞端粒长度影响及其相关机制研究
- 2011年
- 目的:研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对T细胞端粒长度的作用及机制。方法:SEA、K562细胞、SEA联合K562细胞以及抗CD3单克隆抗体分别刺激脐带血单核细胞,SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测端粒、hTERT及IL-7R表达。结果:SEA组、K562细胞组、SEA联合K562细胞组及抗CD3单抗组活化T细胞的端粒相对长度比值为1.63±0.08、1.06±0.06、3.24±0.61、1.37±0.07;hTERT的表达差异倍数为1.88±0.07、1.95±0.05、3.93±0.23、1.30±0.06;IL-7R表达差异倍数为6.61±0.52、12.81±0.34、17.42±0.50、4.87±0.66;SEA联合K562细胞组均明显高于其他3组(P<0.01),SEA组对端粒长度影响大于单纯K562细胞组。结论:超抗原SEA可以直接刺激T细胞的端粒酶活性及上调表达IL-7R,联合特异性抗原K562细胞株诱导T细胞活化上调效果更明显。
- 秦雅楠王冠明张鹏林晨高永鹏田红霞李扬秋
- 关键词：肠毒素类端粒长度
- 特异性抗髓性白血病多肽疫苗的研制和应用被引量：2
- 2010年
- 化疗和造血干细胞移植是治疗白血病的主要方法，但是由于受供者来源和年龄的限制，化疗后微小残留病灶的存在使白血病容易复发。对白血病化疗缓解后给予疫苗治疗是消除残留病灶的理想方法。白血病相关抗原（LAAs）是目前研究最多的免疫治疗的靶抗原，对于髓性白血病，大多数LAAs既是白血病细胞过度表达的自身抗原，也是染色体易位的融合蛋白。由于许多LAAs不是膜蛋白，不能作为抗体治疗的对象。
- 高永鹏田红霞林晨
- 关键词：多肽疫苗白血病免疫治疗
- 超抗原SEA体外对Jurkat T淋巴细胞增殖活性与表面超微结构的影响
- 2009年
- 目的：通过显微形态观察和功能检测分析超抗原（SEA）对JurkatT淋巴细胞的影响。方法：应用CCK-8法，原子力显微镜（AFM）体外检测JurkatT淋巴细胞增殖活性、及其细胞膜超微结构的改变。结果：与对照组比较，不同浓度的SEA随着作用时间的增加，细胞膜超微结构与R且值明显发生改变。JurkatT淋巴细胞经过质量浓度为0．1—100mg／LSEA，作用48h期间，JurkatT细胞的表面超微结构（平均粗糙度，Ra）和增殖活性（A值）变化非常明显。其中，质量浓度10mg／LSEA作用24h，JurkatT淋巴细胞表面结构变化最明显，而细胞增殖活性在48h达最强。结论：SEA作为超抗原作用于JurkatT淋巴细胞后，JurkatT淋巴细胞的活化表现出表面形态结构改变先于代谢水平的改变，较后者更灵敏。
- 郜世隽林晨龚超群杨力建李扬秋蔡继业田红霞高永鹏
- 关键词：JURKAT超抗原原子力显微镜CCK-8增殖活性
- 超抗原SEA对K562细胞诱导脐带血单个核细胞上CD3ε链表达的影响被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对K562细胞诱导正常人脐带血单个核细胞(MNCs)中CD3ε链基因表达的影响。方法:常规分离4例脐带血单个核细胞,分别与抗CD3单克隆抗体(mAb)、单纯K562细胞、单纯SEA以及SEA联合K562细胞共培养,诱导MNCs活化增殖,并设空白对照组。刺激培养48 h后,收集各组细胞提取mRNA并合成cDNA,以β2微球蛋白基因作为内参照,采用实时荧光定量PCR检测在各组MNCs中CD3ε链基因的表达,并根据公式2-△△C t对CD3ε链表达的差异倍数进行相对定量分析。结果:K562细胞组MNCs中CD3ε链基因表达的水平略有降低,抗CD3 mAb组、SEA组、SEA联合K562细胞组的诱导活化的MNCs中CD3ε链基因的表达均有增强,而SEA联合K562细胞组MNCs中CD3ε链基因的表达明显高于单纯SEA组(P<0.01)。结论:超抗原SEA可以增加K562细胞在体外诱导脐带血MNCs中CD3ε链基因的表达。
- 田红霞高永鹏林晨陈少华杨力建李扬秋
- 关键词：K562细胞脐带血单个核细胞
- 慢性粒细胞白血病DNA疫苗BCR/ABL-pIRES-SEA及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种慢性粒细胞白血病DNA疫苗BCR/ABL-pIRES-SEA及其制备方法和应用。该DNA疫苗含有pIRES质粒、BCR/ABL基因和SEA基因，BCR/ABL基因和SEA基因分别位于pIRES质粒上的IR...
- 林晨田红霞高永鹏陈少华杨力建周羽竝李扬秋
- 人脐带血来源树突状细胞、巨噬细胞和单核细胞体外培养及鉴定被引量：5
- 2011年
- 目的建立从人脐带血体外诱导扩增树突状细胞、巨噬细胞和单核细胞的方法。方法从正常人脐带血中分离出单核细胞,经3种细胞因子—重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rh GM-CSF)、重组人白细胞介素4(rh IL-4)和重组人肿瘤坏死因子(rh TNF-α)联合诱导培养,7 d后收获细胞,并利用光学显微镜、免疫组化的方法进行鉴定。结果培养收获了高纯度的树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞,细胞高水平表达CD1a、CD86、CD68和CD14。结论人脐带血单核细胞经细胞因子诱导培养可以得到大量的成熟树突状细胞、巨噬细胞和单核细胞。
- 陈琛江振友高永鹏于斌陈孝银
- 关键词：树突状细胞巨噬细胞单核细胞脐带血
- BCR/ABL和SEA双基因重组载体的构建和表达被引量：2
- 2010年
- 目的:构建和表达含BCR/ABL融合基因和葡萄球菌肠毒素A(SEA)的真核双表达质粒。方法:利用RT-PCR技术从K562细胞中扩增出含BCR/ABL融合位点基因片段,提取金黄色葡萄球菌基因组DNA扩增出SEA基因,分别将两基因片段连在pIRES载体的多克隆位点A和B上,构建BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA-pIRES-BCR/ABL重组质粒。将重组质粒转染K293细胞,RT-PCR鉴定重组质粒在真核细胞的转录情况,SDS-PAGE电泳鉴定目的蛋白在真核细胞的表达。结果:成功扩增出BCR/ABL和SEA基因片段;双酶切鉴定BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA-pIRES-BCR/ABL重组质粒中含有BCR/ABL和SEA基因,测序证实完全正确;将重组质粒转染K293细胞后,经RT-PCR扩增鉴定,插入到重组质粒的BCR/ABL和SEA基因能在真核细胞正常转录,经SDS-PAGE电泳鉴定重组质粒能够在真核细胞中表达BCR/ABL和SEA蛋白。结论:成功构建BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA-pIRES-BCR/ABL真核双表达质粒,可在真核细胞中正常转录并表达BCR/ABL和SEA蛋白。
- 田红霞林晨查显丰周羽竝黄欣高永鹏李扬秋
- 关键词：BCR/ABL融合基因金黄色葡萄球菌肠毒素A慢性粒细胞白血病DNA疫苗
