高宏伟
- 作品数：17 被引量：59H指数：5
- 供职机构：黄河水产研究所更多>>
- 发文基金：国家科技基础条件平台建设计划陕西省科学技术研究发展计划项目国家水产种质资源整理整合项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程更多>>
- 秦岭生态保护区鱼类多样性研究被引量：3
- 2011年
- 实地鱼类资源考察、检视鱼类标本以及参考鱼类分类、分布文献表明,秦岭生态保护区现有鱼类7目16科79属共141种(亚种)。物种多样性G-F指数的比较分析显示,和秦岭其他区域相比,秦岭生态保护区鱼类的物种多样性最高:区内不同水系之间相比,则汉江水系最高。利用β多样性指数和Jaccard相似性系数对秦岭生态保护区4条水系的鱼类多样性进行分析,结果显示区内鱼类分布南北差异明显;南坡的3条水系中,南洛河水系和嘉陵江水系鱼类生境相似程度较高,鱼类种、属分化、隔离程度较低,而与汉江水系的生境差异显著,鱼类种属分化、隔离程度较高。根据区内自然地理及水系特征,对水系间鱼类β多样性出现的差异进行了分析。
- 周小愿韩亚慧高宏伟
- 关键词：鱼类多样性
- 大鲵肺肾囊肿的病原学研究被引量：4
- 2014年
- 为查明2010年以来陕西省养殖大鲵发病导致肺脏、肾脏囊肿的病原,在无菌条件下从发病大鲵内脏器官分离致病菌,结果从肝脏中分离到一株弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii),从肺脏、肾脏中未分离到致病菌。病理组织学观察结果显示,病鲵的肺泡、肾小管等上皮细胞变性、坏死,肝细胞广泛性空泡变性。透射电镜观察结果表明,肺脏、肾脏存在大量聚集或分散的病毒颗粒,病毒颗粒切面呈正六边形,对角直径约150nm,形态与虹彩病毒相似。根据已知虹彩病毒主要衣壳蛋白基因序列设计特异引物,提取病鲵的肝脏、肺脏、肾脏组织的DNA进行PCR扩增,将扩增片段进行序列测定与分析,结果表明该序列和推导的氨基酸序列与已报道的大鲵虹彩病毒(CGSIV)主要衣壳蛋白基因的核苷酸序列和氨基酸序列的同源性均为99%。综合试验结果判定引起病鲵肺脏、肾脏囊肿的病原是大鲵虹彩病毒。
- 周小愿贾秋红吉红韩亚慧张星朗高宏伟
- 关键词：肺脏肾脏囊肿
- 大鲵虹彩病毒MCP蛋白在杆状病毒表达系统中的表达与纯化
- 2017年
- 为研制基于杆状病毒表达系统的大鲵虹彩病毒(Chinese giant salamander iridovirus,CGSIV)新型亚单位疫苗,将CGSIV主要衣壳蛋白(major capsid protein,MCP)基因克隆至杆状病毒穿梭载体p Fast Bac1质粒中,构建了重组质粒p Fast Bac-MCP。转化E.coli DH10Bac感受态细胞,经PCR筛选和测序获得了阳性重组杆粒r Bacmid-MCP,在昆虫细胞转染试剂介导下将该重组杆粒转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒。重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞,经超薄切片电镜观察,可见大量重组杆状病毒存在于细胞中。按不同感染复数(MOI=2、5、10)将重组杆状病毒感染Sf9细胞进行CGSIV MCP的表达。SDS-PAGE检测结果表明,在MOI=10时,目的蛋白的表达量最高;间接免疫荧光观察结果显示,目的蛋白在感染细胞中得到表达,且分布在细胞表面。以抗CGSIV MCP单抗为抗体制备的免疫磁珠纯化目的蛋白并利用兔抗CGSIV MCP多抗血清检测目的蛋白的生物学活性。SDS-PAGE和Western blot结果显示,纯化的目的蛋白纯度很高,而且具有抗原活性,能够被兔抗大鲵虹彩病毒MCP多抗血清识别。利用杆状病毒表达系统成功进行了CGSIV MCP的表达,并应用免疫磁珠法进行了目的蛋白的纯化,为CGSIV新型亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 张星朗高志杨平凹周小愿贾秋红韩亚慧高宏伟
- 关键词：杆状病毒表达系统蛋白纯化
- 大鲵虹彩病毒的形态结构及其包涵体特征被引量：11
- 2015年
- 运用电镜和免疫荧光技术,对纯化的大鲵(Andrias davidianus)虹彩病毒粒子、感染病毒的EPC细胞以及确诊感染病毒的病鲵组织样品进行观察和分析。结果表明,纯化的大鲵虹彩病毒负染后电镜下显示球形结构,具囊膜,直径约150 nm;感染EPC细胞中的病毒颗粒呈典型的正二十面体结构,由核衣壳和核心构成,核衣壳呈正六边形,对角直径为(150±5)nm(N=30),核衣壳厚度约5 nm,核心直径为(98±18)nm(N=27)。在病鲵病变的肺和肾组织中发现存在大量聚集或分散的病毒颗粒,其形态特征和感染EPC细胞超薄切片观察的结果一致。免疫荧光电镜观察结果显示,感染病毒的细胞可观察到明显的红色荧光信号,且呈斑块状分布,大小不等。综合大鲵虹彩病毒初步的形态发生和免疫荧光观察结果,认为病毒感染细胞后在不同的发生时期会形成不同类型的病毒包涵体。
- 周小愿张星朗吉红韩亚慧贾秋红高宏伟
- 关键词：虹彩病毒包涵体
- 抗大鲵虹彩病毒MCPCOE蛋白单克隆抗体的制备及初步应用被引量：3
- 2016年
- 制备抗大鲵虹彩病毒(CGSIV)MCP COE蛋白的单克隆抗体,并对其基本特性进行鉴定及开展初步应用。用纯化的重组CGSIV MCP COE蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA法检测阳性孔,经有限稀释法亚克隆,筛选单克隆杂交瘤细胞株。采用间接ELISA法、免疫印迹法和单克隆抗体亚型检测试剂盒等鉴定单抗的稳定性、特异性和亚型;采用腹水诱生法制备单抗腹水,饱和硫酸铵法纯化腹水单抗;间接ELISA法分别测定单抗杂交瘤细胞上清液和腹水单抗的效价;利用间接免疫荧光法观察CGSIV的增殖。结果显示,细胞融合克隆率为98.68%,阳性率为20.52%,得到1株能够稳定分泌特异性抗体的阳性杂交瘤细胞,命名为1M6。单克隆抗体的亚型属于Ig G2b,κ链;免疫印迹法和间接ELISA法测定结果显示,单抗具有很好的特异性;杂交瘤细胞株培养上清液的效价为1∶1600,腹水单抗效价为1∶2×106,亲和常数为2×105。间接免疫荧光显示CGSIV感染EPC细胞24 h后在宿主细胞质中可以观察到成熟的病毒粒子形成的包涵体,而且在宿主细胞核内也能发现病毒粒子。抗CGSIV MCP COE蛋白单克隆抗体的成功制备为CGSIV免疫学检测方法的建立和其他相关研究的开展奠定了基础。
- 周小愿张星朗贾秋红韩亚慧高宏伟
- 关键词：虹彩病毒单克隆抗体
- 养殖环境生物除氮脱氮技术研究进展被引量：3
- 2010年
- 随着我国水产养殖业的快速发展,养殖环境中氮的污染问题日益严重。生物除氮脱氮技术由于具有无可比拟的优势而受到人们的重视,近年来无论在基础理论还是应用实践方面发展迅速。本文总结了水产养殖中该项技术的最新研究进展,并指出今后的研究方向和重点。
- 周小愿金卫荣高宏伟韩亚慧高志
- 关键词：养殖环境
- 大鲵虹彩病毒主要衣壳蛋白主要抗原表位区的原核表达及抗血清制备被引量：4
- 2016年
- 目的表达大鲵虹彩病毒(CGSIV)主要衣壳蛋白(MCP)主要抗原表位区蛋白,并制备兔抗血清。方法以大鲵虹彩病毒略阳株(CGSIV-LY)基因组为模板,PCR扩增MCP基因,然后克隆到p ET-21a(+)表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot法检测重组蛋白的表达和免疫活性,用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白。以纯化的重组蛋白为免疫原免疫兔制备抗血清,采用Western blot法和ELISA检测抗血清的免疫特异性并测定效价,利用间接免疫荧光法检测鲤鱼上皮瘤(EPC)细胞CGSIV。结果表达了相对分子质量(Mr)为29 000的重组蛋白。制备的兔抗MCP血清具有良好的特异性和高滴度,间接免疫荧光法检测结果显示制备的多抗血清能识别EPC细胞中的CGSIV。结论成功表达了大鲵虹彩病毒MCP主要抗原表位区蛋白,并制备高滴度和良好特异性的兔抗血清。
- 周小愿张星朗贾秋红韩亚慧高宏伟
- 关键词：原核表达抗血清
- 秦岭生态保护区野生鱼类的物种多样性及其保护对策被引量：8
- 2010年
- 秦岭生态保护区地表径流众多,南北气候差异明显,因而孕育了种类丰富的野生鱼类。实地鱼类资源考察、检视鱼类标本以及参考鱼类分类、分布的文献表明,区内现有野生鱼类共7目16科75属141种(亚种)。通过物种多样性G-F指数的比较分析表明:区内鱼类的物种多样性在邻近省份中是最高的,而且该地区的鱼类区系地跨古北界和东洋界,具有显著的过渡区特点;区内不同水系间鱼类组成差异显著。目前,秦岭生态保护区野生鱼类的物种多样性正面临来自不合理捕捞、水工程建设、环境污染以及生态破坏等多方面的压力。为恢复和保护这一地区的野生鱼类的物种多样性,本文提出了有针对性的建议。
- 周小愿金卫荣韩亚慧高宏伟陈媛媛
- 关键词：野生鱼类物种多样性
- 渭河陕西段浮游植物群落结构及水质评价被引量：5
- 2015年
- 为全面了解渭河陕西段枯水期水质状况,于2014年4月对渭河陕西段7个采样断面的浮游植物进行调查研究,并利用多样性指数对该区段水质进行初步评价。调查表明：调查期间共检出浮游植物5个门类35种属,其中硅藻和绿藻在种类组成中占主导地位。浮游植物密度为2.00×10^6-60.88×10^6 ind./L,平均密度为23.57×10^6 ind./L,生物量变化范围为2.84-123.78 mg/L,平均生物量为48.60 mg/L。ShannonWiener多样性指数的变化范围为0.75-3.14,平均值为1.69,通过综合分析认为渭河陕西段水质整体受到中度污染,流域生态保护形势严峻。
- 高宏伟李晓春陈晓霞侯淑敏王博涵白海锋袁永锋贾秋红
- 关键词：渭河陕西段浮游植物群落结构水质评价
- 大鲵虹彩病毒-LY株主要衣壳蛋白基因克隆和分子特征研究被引量：5
- 2015年
- 为明确大鲵虹彩病毒-LY株主要衣壳蛋白（mcp）基因分子特征和中国不同CGSIV毒株mcp基因变异及病毒的系统进化关系。克隆了CGSIV-LY株mcp基因,并运用生物信息学软件对获得的基因信息进行了分析。结果表明CGSIV-LY株mcp基因全长1392 bp,可编码463个氨基酸。预测蛋白质分子量为50.03 ku,理论等电点是5.75,为亲水性可溶蛋白。CGSIV-LY株mcp不含有信号肽;没有跨膜区存在;抗原表位预测显示抗原性良好;结构预测显示,存在8个潜在的N-糖基化位点,存在17个潜在的O-糖基化位点和20个潜在的磷酸化位点。CGSIV-LY株mcp二级结构中无β-折叠,无规则卷曲占57.66%,延伸链占31.11%,α-螺旋占11.23%,主要以延伸链和无规则卷曲为主。氨基酸序列包含3个结构域：氨基酸N末端,氨基酸C末端和capsid_NCLDV保守区结构域,并在氨基酸序列的第414~436区存在一个低复杂度域。氨基酸序列多重比对和基于mcp氨基酸序列构建的蛙病毒属成员系统进化树分析结果显示,包括CGSIV-LY株在内的中国出现的不同CGSIV毒株之间mcp基因差异很小,为平行进化关系,共同聚为蛙病毒属成员独立的一支。中国出现的不同CGSIV毒株mcp基因应具有基本一致的分子结构和特征。
- 周小愿张星朗韩亚慧贾秋红高宏伟
- 关键词：虹彩病毒克隆
