马亮
- 作品数：19 被引量：54H指数：4
- 供职机构：同济大学附属东方医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市教育发展基金会“曙光计划”项目上海市科学技术发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 不同性别健康人群和亚健康人群主要生化指标的比较
- 目的：比较不同性别健康人群和亚健康人群检验主要生化指标的差异。方法：选取30～55 岁的健康人群3000 例和亚健康人群1000 例，利用日立7180 全自动生化分析仪分别检测血糖(GLU)、血脂(CH、TG、HDL、L...
- 马红霞李杨马亮沈建峰
- 关键词：亚健康人群
- 大鼠心肌成纤维细胞体外培养的生物学特性及转基因研究被引量：2
- 2008年
- 目的观察大鼠心肌成纤维细胞（CFs）体外培养的生长增殖情况及肌肉转录调节因子（MyoD）基因转染对其生物学特性的影响。方法采用改良的差速贴壁法培养大鼠CFs，利用携带MyoD cDNA的真核表达载体pLenti6／V5-DEST-MyoD转导培养的大鼠CFs，用稻瘟菌素筛选2周，挑选转基因单克隆细胞，传代培养，进行细胞形态观察、生长曲线以及细胞免疫化学鉴定。结果成功建立高纯度大鼠CFs的细胞培养模型，且具有良好的细胞形态、正常的生长增殖等生物学功能。转染细胞的MyoD cDNA基因表达阳性，其下游抗α-肌动蛋白（α-actin）呈阳性表达，胞质呈棕黄色，并且含有与细胞纵轴平行排列的肌丝，细胞核用苏木素复染后呈淡蓝色。在2．0×10^5／mL细胞密度的CFs接受转MyoD基因后，抗α-actin阳性率为（27．04±9．41）％。结论真核表达载体成功介导MyoD cDNA转导入体外培养的大鼠CFs，诱导其转化为具有潜在功能的类骨骼肌细胞，CFs可成为心血管疾病基因治疗的靶细胞。
- 汪进益范慧敏刘中民卢蓉马亮李杨
- 关键词：心肌成纤维细胞细胞培养转基因靶细胞
- 自体骨髓干细胞移植联合瓣膜手术治疗扩张型心肌病被引量：1
- 2008年
- 目的探讨瓣膜手术联合自体骨髓干细胞移植术对扩张型心肌病治疗效果。方法2003年3月至2006年10月，选择8例扩张型心肌病病人，男5例，女3例；年龄15～56岁。术前射血分数（EF）0．15～0．32，平均0．26±0．08。心功能（NYHA）Ⅲ级4例；Ⅳ级4例。术日取病人自身骨髓50ml，分离自体骨髓干细胞。5例行瓣膜置换术，3例行瓣膜成形术；瓣膜手术后，取培养的自体骨髓干细胞，左心室心肌内注射。结果全组无手术死亡，未发生严重手术并发症。随访12～42个月，平均18个月。术后6个月内EF改变不明显，但心功能明显改善，生活质量明显提高。术后1年EF开始改善。超声组织多普勒以及DISA心肌灌注，代谢显像显示心脏功能术后明显改善。结论联合应用瓣膜手术加自体骨髓干细胞移植术可能改善扩张型心肌病治疗效果。
- 范慧敏卢蓉马亮李杨刘中民
- 关键词：心肌病扩张型心脏瓣膜假体植入心脏外科手术干细胞移植
- 成年犬骨骼肌成肌细胞的培养纯化、鉴定及生长特性的研究
- 2006年
- 目的建立简便、有效的成年犬骨骼肌成肌细胞(skeletal myoblast cells,SMCs)体外分离培养、纯化和鉴定的方法,并观察犬SMCs的生长特性。方法采用机械分解法与IA型胶原酶和胰蛋白酶的二步酶消化法相结合,分离消化法培养获取犬SMCs,用DMEM培养液培养,以Ficoll梯度液纯化,进行Desmin免疫组化鉴定,并观察细胞形态、生长特性。结果犬SMCs培养后经台盼蓝检查成活率达95％以上,在接种后4～5 d增殖达高峰,细胞生长旺盛;Ficoll分离纯化的SMCs纯度较高;Desmin免疫细胞化学染色有97％的SMCs胞浆呈阳性反应。结论改良方法获得的SMCs具有良好的增殖、分化能力;采用Ficoll纯化以血清培养,即可获得高产量高纯度的SMCs。
- 汪进益范慧敏刘中民马亮丁一李杨
- 关键词：骨骼肌成肌细胞细胞培养纯化免疫细胞化学
- 脑钠素和心电图评价细胞移植治疗急性心肌梗死的实验研究被引量：2
- 2008年
- 目的探讨肌肉转录调节因子(myogenic determination,MyoD)基因和连接蛋白43(connexin 43,Cx43)基因体外共转染大鼠皮肤真皮成纤维细胞(dermal fibroblasts,DFs)后在心肌梗死部位原位移植修复梗死心肌组织的近期疗效及其安全性。方法60只SD雄性大鼠随机分成4组(n=15)。正常对照组:取100μl细胞培养液基质植入到正常心肌组织中;心梗对照组:取等量细胞培养液基质植入到心肌梗死大鼠瘢痕组织中;正常移植组:在正常心肌组织中植入等量用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记经MyoD和Cx43基因联合转染DFs细胞悬液;心梗移植组:在心梗后瘢痕组织中植入等量同样的细胞悬液,细胞密度均为2.0×106/ml。在细胞移植前、移植后4周内动态监测心电图和血浆脑钠肽(B-type natriuretic peptide,BNP)水平的变化。结果心梗对照组和心梗移植组血浆BNP浓度较正常对照组和正常移植组明显升高(P<0.01);心梗移植组较心梗对照组血浆BNP浓度在术后1 d、1周及2周无差异,在4周后明显降低(P<0.01)。心梗大鼠Ⅱ导联心电图的QRS波增宽,ST段、T波抬高;细胞移植早期ST段、T波快速回落,2周内回落大于50%;4周后正常移植组和心梗移植组大鼠均未见致命性心律失常,且心梗移植组与心梗对照组(或移植前)相比QRS波变窄,R波相对升高,ST段回到基线。结论用MyoD和Cx43基因转染DFs后原位心肌移植,可以降低血浆BNP水平和改善心电图,两者的动态监测为评价细胞移植治疗急性心梗提供了有效实用的方法。
- 汪进益范慧敏刘中民张旭敏马亮李杨
- 关键词：脑钠素心电图急性心肌梗死细胞移植
- 体质量对大鼠胰岛分离纯化产量的影响被引量：3
- 2009年
- 背景：由于实验条件对胰岛的产量影响较大,因此需要在动物种属、动物周龄、体质量以及胶原酶的浓度、胰腺消化时间等方面进行优化组合,筛选出最佳条件,以期得到高产量的胰岛。目的：观察体质量因素对大鼠胰岛分离纯化产量的影响,筛选出获取高产量胰岛素的最佳体质量。设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-01/12在上海市东方医院细胞治疗室及中心实验室等相关单位完成。材料：60只雄性SD大鼠按照体质量随机分为100-150g组、150-200g组、200-250g组、250-300g组、300g以上组,每组12只。方法：通过胆总管灌注胶原酶V来消化大鼠胰腺,分离胰岛,采用不连续密度梯度Ficoll离心法纯化胰岛。主要观察指标：以双硫腙染色鉴定胰岛,丫啶橙/碘丙啶染色鉴定胰岛细胞活率,根据胰岛直径计数所获胰岛的数量及胰岛当量,葡萄糖刺激胰岛素释放试验评估胰岛功能。结果：分离的大鼠胰岛具有较好的质量,胰岛纯度为95%左右,活率为90%左右,体外培养中生长良好。随着体质量增加,胰岛数量和胰岛当量明显增加（P〈0.05）,具有明显的相关性（r=0.918,r=0.922,P〈0.01）,并且最大直径的胰岛数量也在增加（P〈0.05）,以300g以上组所获得的胰岛数量及胰岛当量最多（P〈0.05）。在低糖和高糖刺激下胰岛素释放分别为（62.33±9.67）mU/L和（125.5±22.04）mU/L,差异具有显著性意义（P〈0.05）,刺激指数为2.01±0.21,提示胰岛细胞功能良好。结论：大鼠体质量是获得高产量胰岛的关键性因素之一,在其他条件不变的情况下,体质量高的大鼠所获得的胰岛产量较高。实验选择300g以上的大鼠进行胰岛分离纯化可获得稳定的高产量胰岛。
- 钱滔来王新华刘圣马亮任丹妮
- 关键词：体质量胰岛
- 联合化疗法对人脑胶质瘤的细胞周期和凋亡水平的影响
- 华咏徐荣徐启武王跃闽马亮陈翠玲
- 该实验通过将102例脑胶质瘤组织，分离胶质瘤细胞，用淋巴细胞分离液去除PBMC，用细胞裂解液去除红细胞后，用流式细胞仪分别进行细胞周期和bcl-2，bax的测定，同时收集相应的病理分级资料，用SAS软件进行相关性分析。结...
- 关键词：
- 关键词：脑胶质瘤凋亡化疗药物
- 肌肉转录调节因子和连接蛋白43转基因成纤维细胞移植对心肌梗死大鼠脑钠素及梗死面积的影响
- 2008年
- 背景:研究表明基因工程将成纤维细胞改造为可兴奋细胞是可能的;而真皮成纤维细胞是机体内数量最大的"种子细胞库"。目的:观察肌肉转录调节因子(myogenic determination,MyoD)和连接蛋白43(connexin43,Cx43)基因共转染真皮成纤维细胞后在心肌梗死部位原位移植对急性心肌梗死大鼠血浆脑钠素浓度和心肌梗死面积的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-06/2007-03在同济大学附属东方医院细胞治疗室和上海中医药大学动物实验中心完成。材料:雄性SD大鼠60只随机分成正常对照组、心肌梗死对照组、正常移植组和心肌梗死移植组,每组15只。方法:结扎左冠状动脉前降支制备心肌梗死模型。4周后再次开胸在自结扎远端紧靠结扎处,心肌梗死区与非梗死区交界处用微量注射器将100μL经BrdU标记的MyoD/Cx43-FB细胞悬液(细胞数1.0×106)注入左冠状动脉前降支,在结扎远端已缺血的心肌上用同样的针头于靠近心尖部、室间隔部、左室前侧壁缺血的心肌上多点多位置将另外100μL移植细胞悬液注入到心肌内,深度约4mm;对照组同法等量注入未含细胞的DMEM细胞培养液。主要观察指标:细胞移植前和移植后1d,1,2,4周动态检测血浆脑钠素浓度;同时监测各组大鼠心率、动脉压、左心室内压及左心室等容收缩期室内压最大上升速率和下降速率等血流动力学指标的变化;4周后处死大鼠取心肌标本染色后测定心肌梗死面积。结果:①免疫组织化学检测结果显示心肌瘢痕区边缘有BrdU阳性细胞存在。②细胞移植可显著改善心肌梗死大鼠的血流动力学。③心肌梗死对照组和心肌梗死移植组大鼠的血浆脑钠素浓度较正常对照组和正常移植组明显升高(P<0.01);在移植后1d、1周、2周心肌梗死移植组与心肌梗死对照组血浆脑钠素浓度差异无显著性意义,4周后明显降低(P<0.01)。④心肌梗死移植组�
- 汪进益范慧敏卢蓉张旭敏马亮李杨刘中民
- 关键词：CX43基因心肌梗死脑钠素心肌梗死面积
- 自体骨髓干细胞移植联合瓣膜手术治疗扩张型心肌病被引量：1
- 2007年
- 目的评价辦膜手术联合自体骨髓干细胞移植术对扩张性心肌病治疗效果。方法2003年3月至2006年12月,共选择10例扩张性心肌病患者,其中男性5例,女性5例,年龄15至56岁。术前EP:15％-32％,平均24．2％。NYHA心功能分级:心功能Ⅲ级6例,心功能Ⅳ级4例。手术当日取患者自身骨髓50 ml,分离自体骨髓干细胞．全部患者中,有8例进行辦膜置换术,2例进行辦膜成形术。手术同常规心脏外科辦膜置换术。在辦膜手术后,取已经分离的自体骨髓干细胞,在左心室心肌内注射,各点间距离约0．5 cm左右。术后处理同常规心脏术后处理,尤其注意心率失常的监测以及处理。术后应用类固醇类激素3 d。分别于术后1、3、6个月和1年、2年测定患者的心脏超声、同位素扫描以及心电图等指标,全面评估患者的心功能以及术后生活质量。结果全组患者无手术死亡,无严重手术并发症发生。平均随访16个月(12至36个月)。术后6个月内EF改变不明显,但心功能分级明显改善,生活质量明显提高;术后1年以后EF开始改善。超声组织多普勒随访观察到,手术1年后,前间隔各心肌节段收缩期平均应变率从治疗前平均-0．62 S-1增加至治疗后的-1．28 S-1,应变从3．57％增至7．76％。左室后侧壁各个心肌节段收缩期平均应变率从-1．61 S-1增至2．54 S-1,应变从3．86％增至8．25％,表明左室收缩功能改善。全部患者心肌细胞移植术前,心肌摄取18F-FDG代谢相,经x2检验,差异无统计学意义;术后3个月以及6个月,心肌代谢无明显变化;术后1年6例患者中有4例心肌细胞移植术前后对照,取垂直长轴轴距最大18F-FDG代谢相经X2检验,差异有统计学意义;2例无差异。2例患者手术超过2年,心肌细胞移植术前后对照,取垂直长轴轴距最大18F-FDG代谢相经X2检验,差异有统计学意义。结论联合应用辦膜手术加自体骨髓干细胞移植术能够明显改善扩张
- 范慧敏卢蓉马亮李杨刘中民
- 关键词：瓣膜手术扩张型心肌病干细胞移植术自体骨髓干细胞组织多普勒
- 肌肉转录调节因子和连接蛋白43基因表达对大鼠成纤维细胞分化的生长特性及生物学功能影响被引量：10
- 2007年
- 目的通过观察转染肌肉转录调节因子(myoblast determining,MyoD)基因和连接蛋白43(connexin43,Cx43)基因的大鼠成纤维细胞(fibroblast,FB)分化生长及生物学功能的改变,初步探讨MyoD和Cx43基因转染FB治疗缺血性心脏病(ischemic heart disease,IHD)的可能机制和途径。方法构建真核表达的质粒载体pLenti6/V5-DEST-MyoD和pLenti6/V5-DEST-Cx43,利用慢病毒表达系统,将MyoD和Cx43基因转入大鼠RFL-6FB;经终浓度为50μg/ml的Blasticidin进行筛选培养后,通过RT-PCR、Western blot等分子生物学手段确定MyoD和Cx43的转录和表达情况;借助免疫细胞化学、显微镜观察等手段对MyoD的肌肉特异性蛋白和Cx43连接蛋白进行检测,并观察转染后FB的生长情况。结果RT-PCR和Western blot检测出MyoD和Cx43基因转染后FB表达了相应mRNA及其蛋白,免疫细胞化学检测转染的FB细胞中Desmin、α-actin呈阳性表达。经分化培养基诱导,培养1周后,FB出现多细胞融合及肌管形成。结论MyoD及Cx43基因转染可改变FB的生物学特性,转向分化为成肌细胞,并能形成多核肌管及连接蛋白,形态学也得以证实,为进一步研究MyoD和Cx43基因转染FB治疗IHD提供了实验基础。
- 汪进益范慧敏刘中民李杨马亮
- 关键词：连接蛋白43基因转染慢病毒载体成纤维细胞
