陈光慧
- 作品数：11 被引量：43H指数：5
- 供职机构：美国国立卫生研究院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 腺病毒介导的线粒体融合素基因-2感染促进大鼠主动脉血管平滑肌细胞凋亡及其信号通路研究
- 目的应用腺病毒介导的转基因技术,研究过表达线粒体融合素基因-2(Mitofusion-2,Mfn2)对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(rVSMCs)凋亡的影响,并探讨其相关的信号通路,阐明其分子作用机制。方法体外培养rVSMC...
- 刘成陈光慧郭小梅
- 文献传递
- Mfn2基因对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的促进作用及其机制被引量：20
- 2007年
- 目的研究线粒体融合蛋白基因(mitofusion-2,Mfn2)促进大鼠血管平滑肌细胞(rVSMCs)凋亡的作用及其机制。方法以空载缺陷型腺病毒(Adv-GFP)为对照,以复制缺陷型腺病毒作为载体,将Mfn2转移到rVSMCs中,Western blot法观察感染后Mfn2基因的表达;TUNEL法检测凋亡细胞阳性率;琼脂糖凝胶电泳观察过表达Mfn2基因对细胞凋亡的影响;Western blot等检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax和Caspase-9的含量。结果高表达Mfn2基因促进rVSMCs凋亡,使rVSMCs线粒体Bcl-2蛋白表达减少、Bax增多,胞质Caspases-9被激活。结论Mfn2基因促进rVSMCs的凋亡,其机制与活化线粒体凋亡途径有关。
- 李俐王剑明陈光慧郭小梅
- 关键词：血管平滑肌细胞细胞凋亡线粒体
- 线粒体融合素2基因突变体对大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生的影响被引量：1
- 2011年
- 目的探讨线粒体融合素2（mitofusin2，Mfn2）基因蛋白激酶A（PKA）磷酸化位点突变体对大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生的影响。方法建立大鼠颈动脉球囊损伤模型，感染组分别以携带全长Mfn2基因的重组腺病毒（Adv-Mfn2）、携带不同Mfn2基因突变体的重组腺病毒（Adv．Mfn2-S442A，Adv-Mfn2-S442D）和仅含有半乳糖苷酶基因的对照腺病毒（Adv-LacZ）感染损伤的颈总动脉段，以磷酸盐缓冲液（PBS）作为未感染对照组，同时以假手术组作为正常对照组。术后14d取材，采用HE染色、Image-Proplus图像分析系统进行形态学分析，同时，应用免疫组化检测Mfn2蛋白和细胞增殖核抗原（PCNA）表达，应用方差分析和Dunnett-t检验行统计学分析。结果术后14d，免疫组化证实Adv-Mfn2、Adv-Mfn2-S442A、Adv-Mfn2-S442D组Mfn2总蛋白表达水平明显增加；HE染色和PCNA染色结果显示，Adv-Mfn2组、Adv-Mfn2-S442A组内膜／中膜面积比（I／M）和PCNA阳性细胞率明显低于Control组（P〈0．01）；与Adv-Mfn2组相比，Adv-Mfn2-S442A组I／M值和PCNA阳性细胞率更低（P〈0．01）；Adv-LaeZ组和Adv-Mfn2-S442D组与Control组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论高表达Mfn2基因可抑制大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生，且Mfn2基因突变体Mfn2-S442A抑制作用更强，而Mfn2-S442D则无抑制作用。
- 曾经纬王新夺陈光慧郭小梅
- 关键词：基因突变球囊损伤再狭窄
- 线粒体融合素2突变体对血管平滑肌细胞凋亡的影响被引量：4
- 2010年
- 目的研究大鼠线粒体融合素2(mitofusin 2,Mfn2)基因蛋白激酶A(PKA)磷酸化位点的2种突变体对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡及其相关的信号通路的影响。方法构建4种重组腺病毒,分别携带磷酸化位点突变为丙氨酸(重组1组)、Mfn2基因(重组2组)、突变为天冬酰胺(重组3组)和半乳糖苷酶基因(对照组),感染培养的VSMCs,另设未感染腺病毒的空白组。流式细胞术比较各组细胞的凋亡率,JC-1染色法检测线粒体膜电位变化,Western blot分析各组Mfn2蛋白的表达以及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和活性半胱天冬酶9(caspase-9)表达。结果与空白组和对照组比较,重组1组、重组2组和重组3组Mfn蛋白显著增加(P<0.01);重组1组和重组2组细胞凋亡率显著增强(P<0.01);线粒体膜电位显著降低(P<0.01);p-Akt表达水平显著降低(P<0.01),活性caspase-9表达水平显著增高(P<0.01);且重组1组作用较重组2组更明显(P<0.01);而重组3组上述指标无显著差异(P>0.05)。结论 Mfn2突变为丙氨酸的位点PKA通过Akt信号及线粒体途径诱导VSMCs凋亡的作用较Mfn2更明显,表明PKA磷酸化位点是调控Mfn2诱导VSMCs凋亡的重要功能位点。
- 周炜曹文静陈莉莉郭小梅陈光慧
- 关键词：线粒体点突变细胞凋亡蛋白激酶类
- Mfn2基因突变体诱导大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞凋亡被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨线粒体融合素2(Mfn2)基因蛋白激酶A(PKA)磷酸化位点突变对大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞凋亡的影响。方法:建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,感染组分别以携带全长Mfn2基因的重组腺病毒(Adv-Mfn2)、携带不同Mfn2基因PKA磷酸化位点突变体的重组腺病毒(Adv-Mfn2-S442A,Adv-Mfn2-S442D)和仅含有半乳糖苷酶基因的对照腺病毒(Adv-LacZ)感染损伤的颈总动脉段,以注射磷酸盐缓冲液(PBS)作为未感染对照组,同时以假手术组作为正常对照组,分别于术后5 d、14 d取材,应用免疫组化检测外源基因的表达,原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测凋亡细胞,苏木精-伊红染色行组织形态学分析。结果:术后5 d,免疫组化证实Adv-Mfn2、Adv-Mfn2-S442A、Adv-Mfn2-S442D 3组Mfn2蛋白表达水平明显增加,TUNEL染色显示Adv-Mfn2、Adv-Mfn2-S442A组凋亡细胞数较对照组、Adv-LacZ组和Adv-Mfn2-S442D组明显增加(P<0.01);与Adv-Mfn2组相比,Adv-Mfn2-S442A组凋亡细胞数更多(P<0.01)。术后14 d,苏木精-伊红染色显示Adv-Mfn2组、Adv-Mfn2-S442A组内膜/中膜面积比明显低于对照组、Adv-LacZ组和Adv-Mfn2-S442D组(P<0.01);且Adv-Mfn2-S442A组内膜/中膜面积比值较Adv-Mfn2组更低(P<0.01)。结论:高表达Mfn2基因可促进大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞凋亡,且Mfn2-S442A促凋亡作用更强,而Mfn2-S442D无此作用。
- 廖华曾经纬张远恒王新夺童雪影陈光慧郭小梅
- 关键词：颈动脉疾病基因突变凋亡球囊损伤
- 线粒体融合素基因2突变体Mfn2-1A抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖及机制研究被引量：5
- 2012年
- 目的:研究线粒体融合素基因2(Mfn2)的突变体片段Mfn2-1A,对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞的增殖抑制作用,并进一步探讨相关作用机制。方法:用已构建的重组腺病毒Adv-Mfn2-1A感染大鼠血管平滑肌细胞,利用细胞计数、四甲基偶氮唑盐比色法检测血管平滑肌细胞增殖,流式细胞仪检测细胞生长周期,蛋白免疫印迹法分析Mfn2-1A对信号通路Mek-Erk1/2蛋白表达水平的影响。结果:重组腺病毒Adv-Mfn2-1A感染平滑肌细胞能正常表达相应蛋白;转染Adv-Mfn2-1A后能抑制平滑肌细胞增殖(P<0.05),第3天开始效果明显;Adv-Mfn2-1A较Adv-Mfn2作用效果更显著(P<0.05);转染Adv-Mfn2-1A和Adv-Mfn2后阻滞于G0/G1期的细胞明显增多,转染Mfn2-1A后阻滞在G0/G1期细胞达到(77.74±3.67)%;Mfn2-1A可降低平滑肌细胞中磷酸化Erk1/2蛋白的表达,效果比Mfn2更明显(P<0.05)。结论:Mfn2基因突变体片段1A可明显抑制血管平滑肌增殖,使细胞阻滞在G0/G1期,其机制与抑制Mek-Erk1/2信号通路有关。
- 范玉璟廖华陈光慧郭小梅
- 关键词：细胞增殖血管平滑肌细胞
- 腺病毒介导的线粒体融合素基因-2诱导大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞凋亡被引量：10
- 2006年
- 目的研究腺病毒介导的线粒体融合素基因2(mitofusin2gene,Mfn2)对大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)凋亡的影响。方法建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,用携带大鼠Mfn2基因(rMfn2)的重组腺病毒Adv rMfn2GFP和含有绿色荧光蛋白基因的对照腺病毒Adv GFP分别感染球囊损伤动脉段,以磷酸缓冲液(PBS)作为未感染对照组,假手术组作为正常对照组,采用免疫组织化学方法检测外源基因表达水平;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞;Image Pro图像分析系统进行血管定量组织形态学分析。结果病毒感染后5d,免疫组织化学证实Adv rMfn2GFP组Mfn2蛋白表达水平明显;TUNEL染色显示,Adv rMfn2GFP组的VSMCs凋亡率明显高于PBS组和Adv GFP组,假手术组未见TUNEL阳性VSMCs(n=10,P<0.01);感染后21d,Adv rMfn2GFP组的血管内膜面积及内膜中膜面积比明显低于对照组(n=10,P<0.01)。结论高表达Mfn2基因可诱导大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞凋亡。
- 廖华曹文静陈莉莉陈光慧郭小梅
- 关键词：线粒体融合素基因-2血管平滑肌细胞凋亡腺病毒科
- RIP3新功能的研究：PI3K-Akt信号通路的反馈性抑制调节因子
- ＜正＞背景：细胞在受到生长因子的刺激后进行增殖。正常情况下,细胞的这种增殖是受到严格调控的。如果这种调控机制失常,细胞就会增殖过度或凋亡不足,从而发生动脉粥样硬化、肿瘤等疾病。受体相关蛋白3
- 兰晓梅李黔曹春梅郑铭金莉陈光慧肖瑞平
- 文献传递
- tMfn2基因抑制血管平滑肌细胞增殖的作用与机制被引量：5
- 2009年
- 目的比较线粒体融合素基因2（Mfn2）和去除穿膜区序列的大鼠线粒体融合素基因2（tMfn2）对大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的作用，探讨tMfn2基因对VSMCs增殖的影响及其相关的信号通路。方法用携带tMfn2基因和Mfn2基因的重组腺病毒（Adv—tMfn2和Adv-Mfn2）感染VSMCs，检测tMfn2蛋白和Mfn2蛋白在细胞中的表达水平；细胞计数法、四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测VSMCs的增殖；流式细胞术检测tMfn2基因对VSMCs周期的影响；Western blot分析各组磷酸化ERK1／2和磷酸化Raf-1蛋白表达水平的变化；采用方差分析对数据进行统计学处理。结果Adv-tMfn2和Adv—Mfn2感染VSMCs后能有效表达出相应蛋白；细胞计数和MTT结果显示，tMfn2和Mfn2均使VSMCs增殖受到明显抑制（P〈0．01），且前者较后者抑制效果更明显（P〈0．01）；流式细胞术结果表明tMfn2和Mfn2使多数VSMCs停滞于G0／G1期，细胞比例为（88．01±4．38）％和（67．43±6．21）％，可见tMfn2基因对细胞周期的影响更明显（P〈0．01）。进一步研究表明tMfn2比Mfn2更能降低磷酸化ERK1／2（p-ERK1／2）和磷酸化Raf-1（p-Raf-1）的表达水平（P〈0．01）。结论与Mfn2基因相比，tMfn2基因更能显著抑制VSMCs增殖，使细胞周期停滞于G0／G1期。这一作用主要通过抑制Ras-Raf-ERK1／2信号通路，下调磷酸化Raf-1蛋白表达，进而抑制ERK1／2的磷酸化而实现。
- 赵丽王四坤周炜廖华张文娟陈光慧郭小梅
- 关键词：细胞增殖腺病毒血管平滑肌细胞
- tMfn2基因诱导血管平滑肌细胞的凋亡(英文)
- 2009年
- 背景:线粒体融合素2蛋白,主要通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B诱导血管平滑肌细胞凋亡。去除穿膜区序列的线粒体融合素2蛋白,相对分子质量减小41%,诱导凋亡作用可能更强。目的:观察比较去除穿膜区序列的大鼠线粒体融合素基因2对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及其相关的信号通路。设计、时间及地点:基因水平的对比观察实验。于2008-01/10在华中科技大学同济医学院附属同济医院分子心脏病中心实验室完成。材料:大鼠血管平滑肌细胞及携带半乳糖甘酶基因、携带线粒体融合素2基因和携带去除穿膜区序列线粒体融合素2基因的重组腺病毒均由陈光慧教授惠赠。方法:将大鼠血管平滑肌细胞传代培养3～10代后随机分为4组,①空白对照组:不加干预。②携带半乳糖甘酶基因的对照组:感染携带半乳糖甘酶基因的重组腺病毒。③携带线粒体融合素2基因的实验组:感染携带线粒体融合素2基因的重组腺病毒。④携带去除穿膜区序列线粒体融合素2基因的实验组:感染携带去除穿膜区序列线粒体融合素2基因的重组腺病毒。主要观察指标:①重组腺病毒感染血管平滑肌细胞24h后观察完整的和去除穿膜区序列的线粒体融合素2基因的表达情况。②感染后24,48和72h采用流式细胞术、酶联免疫吸附法观察细胞凋亡情况。③免疫印迹分析病毒感染血管平滑肌细胞24h后磷酸化蛋白激酶B表达变化。结果:①感染后完整的和去除穿膜区序列的线粒体融合素2基因在血管平滑肌细胞中均有表达。②去除穿膜区序列的线粒体融合素2基因诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用显著增强,且呈时间依赖性(P<0.01)。③两个实验组中磷酸化蛋白激酶B水平均明显降低,但去除穿膜区序列的线粒体融合素2基因实验组更显著(P<0.01)。结论:去除穿膜区序列的线粒体融合素基因2诱导血管平滑肌细胞凋�
- 赵丽周炜陈光慧郭小梅
- 关键词：凋亡腺病毒血管平滑肌细胞
