赵俊琴
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中南大学湘雅医学院病原生物学系更多>>
- 发文基金：湖南省科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 丙型肝炎病毒5’端非编码区结构域Ⅱ在其翻译启动活性中的作用被引量：1
- 2009年
- 目的分析丙型肝炎病毒（HCV）5’端非编码区（NCR）的结构域Ⅱ序列（nt44—118）在其翻译启动活性中的作用。方法用PCR扩增技术获得缺失5’端118nt的截短型HCV5’NCR片段，并以之替换萤火虫荧光素酶（Fluc）真核表达质粒pCMVNCRluc中的完整HCV5’NCR，构建截短型HCV5’NCR调控Fluc基因表达的真核表达质粒pCNl-d3。将pCNl-d3、pCMVNCRluc和pCMVNCRluc缺失HCV5’NCRntl-43后的重组质粒pCNl-d2以脂质体方法分别转染人肝癌细胞株HepG2，用双荧光素酶报告基因检测系统检测Fluc相对表达活性，RT-PCR检测FlucmRNA的相对表达水平。结果酶切和测序结果表明，重组质粒构建成功。各质粒转染细胞后FlucmRNA的相对表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）；pCNl—d2表达的荧光素酶活性与pCMVNCRluc差异无统计学意义（P〉0．05），pCN1-d3的Fluc活性显著低于pCMVNCRluc（P〈0．01）。结论HCV5’NCR的结构域Ⅱ（nt44—118）含有其发挥翻译启动功能的重要序列。
- 刘水平赵俊琴李洪涛杨滔
- 关键词：肝炎病毒荧光素酶
- 丙型肝炎病毒5’端非编码区的5’端序列对其翻译启动活性的影响被引量：3
- 2005年
- 目的分析丙型肝炎病毒(HCV)5’端非编码区(5’NCR)的5’端序列对其翻译启动活性的影响。方法用PCR技术扩增获得全长和5’端17个碱基缺失的HCV5’NCR片段,定向克隆至表达质粒pSEAP2Control的SEAP基因上游,分别构建成全长和5’端截短的HCV5’NCR调控SEAP表达的重组质粒pNCRSEAP和pdNCRSEAP。用脂质体方法将重组质粒转染至肝细胞株QSG7701,并用化学发光法检测SEAP的表达。结果酶切和测序结果表明,重组质粒pNCRSEAP和pdNCRSEAP构建成功。表达的发光强度分别为390482±42856和635265±52285RLU,二者有差异显著性(P<0.01)。结论HCV5’NCR的5’端碱基缺失提高了它对SEAP基因的翻译启动活性,为进一步分析HCVIRES的结构提供了实验基础。
- 刘水平赵俊琴谭德明朱海鹏余俊龙
- 关键词：内部核糖体进入位点
- 结构域Ⅰ缺失的丙型肝炎病毒5′NCR调控荧光素酶基因的表达被引量：1
- 2007年
- 目的:分析丙型肝炎病毒(HCV)5′端非编码区(NCR)的结构域Ⅰ序列在其翻译启动活性中的作用。方法:以质粒pCMVN CRluc为模板,PCR扩增分别得到缺失5′端20nt和43nt的HCV 5′NCR片段,并分别替换pCMVNCRluc中的完整HCV 5′NCR,构建结构域Ⅰ缺失的HCV 5′NCR调控萤火虫荧光素酶(luc)基因表达的真核表达质粒(pCN1-d1、pCNl-d2)。以脂质体方法转染人肝癌细胞株HepG2,用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶相对于内参考的海肾荧光素酶表达活性,同时采用RT-PCR方法检测转染后细胞中萤火虫荧光素酶基因的相对表达水平。结果:酶切和测序结果表明,各重组质粒构建成功。各重组质粒转染细胞后luc mRNA的相对表达水平与pCMVNRluc相比差异无显著性(P＞0．05);pCNl-dl、pCNl-d2表达的荧光素酶活性与pCMVNCRluc差异无显著性(P＞0．05)。结论:HCV 5′NCR的5′端20nt和43nt序列缺失不影响它的翻译启动活性。
- 杨滔赵俊琴刘水平李洪涛李建华
- 关键词：丙型肝炎病毒荧光素酶
- 丙型肝炎病毒5’端非编码区的不同结构域对其翻译启动活性的影响
- 目的丙型肝炎病毒(HCV)感染是慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌的主要原因，已成为全球性的公共卫生问题。HCV 5'端非编码区(5'NCR)含内部核糖体进入位点(IRES)，以非帽依赖机制介导着-HCV基因翻译，且碱基序列高度...
- 赵俊琴
- 关键词：丙型肝炎病毒结构域
- 文献传递
- B族I型清道夫受体与丙型肝炎病毒感染被引量：1
- 2005年
- SR-BI是一种细胞表面糖蛋白,属于清道夫受体家族,主要在肝脏和非胎盘期类固醇生成组织中表达。除了其天然配体HDL外,还可与天然LDL、化学修饰的LDL以及阴离子磷脂等结合,主要介导HDL胆固醇酯的选择性摄取,为类固醇生成组织提供胆固醇。新近发现人SR-BI在体外也能特异结合丙型肝炎病毒(HCV)的E2蛋白,提示SR-BI可能是该病毒的一种新受体。本文就SR-BI分子的结构分布、生物学活性以及与HCV感染之间的关系作一综述。
- 赵俊琴刘水平
- 关键词：丙型肝炎病毒病毒感染胆固醇
- 人巨细胞病毒UL123基因全长及其外显子4的克隆与表达被引量：2
- 2006年
- 【目的】克隆人巨细胞病毒（HCMV）UL123基因cDNA全长（iel）及其外显子4（iel-exon4），构建原核表达重组质粒，诱导立即早期蛋白1（IE1）及其C-端86-491氨基酸（IE1-C86-491）表达，并鉴定表达产物。【方法】分别用RT-PCR和PCR法将iel和iel-exon 4从感染了HCMV的人胚肺成纤维细胞（HEL）中扩增出来，再分别克隆入原核表达载体pTWIN1上intein2的N端，转化大肠杆菌，经PCR、限制性酶切和测序鉴定阳性重组子，在低温和低IPTG浓度下诱导重组子表达可溶性重组融合蛋白rIE1／intein2和rIE1-C86-491／intein2，用SDS-PAGE和Western Blotting对表达产物进行鉴定。【结果】经PCR、限制性酶切和测序鉴定重组质粒pTWIN1／iel和pTWIN1／iel-exon4构建成功，sDS-PAGE和Western Blotting分析表明融合蛋白在大肠杆菌中表达。【结论】成功克隆并表达了iel和iel-exon4。
- 文兰陈利玉邬国军傅鹰罗罗敏华赵俊琴
- 关键词：基因表达
- 丙型肝炎病毒5’端非编码区的结构与功能研究进展被引量：1
- 2008年
- 丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）为单股正链有包膜RNA病毒，为黄病毒科丙型肝炎病毒属成员，基因组长约9．6kb，5’端和3’端分别有一个非编码区（NCR），中间的编码区含有一个单一的长开放读码框架（ORF），转译出一条约3011个氨基酸残基的聚蛋白前体。该聚蛋白前体被宿主细胞信号肽酶和病毒蛋白酶水解加工成为至少十种成熟的功能蛋白，其排列顺序为：NH2一核心蛋白C-包膜蛋白E1-E2／NS1-非结构蛋白P7-NS2-NS3-NS4A—NS4B—NS5A-NS5B-COOH。
HCVORF的翻译是由其5’NCR指导的，该序列可作为一个内部核糖体起始位点（internal ribosome entry site，IRES），被小核糖体亚基（40S）和真核起始因子3（eukaryotic initiation factor3，eIF3）特异识别，允许ORF起始密码子近端与核糖体直接结合，使得病毒聚蛋白的翻译以非帽子（7-甲基鸟苷酸）依赖机制进行。由于宿主细胞mRNAs主要以帽子依赖机制起始翻译，因此IRES的功能特点使得5’NCR成为抗病毒作用研究和研制药物评价系统的理想靶位点，而5’NCR的结构及其IRES元件起始聚蛋白合成的机制也成为近年来的研究热点。本文将就这些方面的研究进展作一综述。
- 赵俊琴刘水平
- 关键词：非结构蛋白非编码区开放读码框架包膜蛋白宿主细胞
