谭小青
- 作品数：8 被引量：22H指数：3
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- hTERT启动子调控的SEA-CD80基因共表达重组腺病毒载体的构建及在不同肿瘤细胞中的表达鉴定
- 2014年
- 目的:构建肿瘤靶向性葡萄球菌肠毒素A和CD80基因共表达重组腺病毒载体。方法:采用PCR技术从质粒pShuttle-AFP-CD80扩增人CD80全长cDNA片段,克隆至已构建载体pMD18-T-BIS,取代小鼠CD80 cDNA片段。重组质粒命名为pMD18-T-hBIS。经酶切,将CWV增强子修饰的人端粒酶反转录酶启动子从已构建载体pGL3-CWVE-hTP,亚克隆至穿梭质粒pShuttle2,然后经酶切将片段hCD80-IRES-SEA从pMD18-T-hBIS质粒亚克隆至CWV增强子修饰的人端粒酶反转录酶启动子下游,构建质粒pShuttle2-CE-hTP-hBIS。再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化E.coli BJ5183,以获得的重组子(命名为Ad-CE-hTP-BIS)转染Ad293细胞制备病毒并纯化。将病毒分别感染人肝癌细胞H7721、宫颈癌细胞株Hela细胞和原代培养的人牙龈成纤维细胞,经免疫荧光染色后,激光共聚焦显微镜观察SEA和CD80在细胞膜的表达情况。结果:重组腺病毒能够使CD80和SEA在人肝癌细胞H7721、宫颈癌细胞株Hela细胞膜上共表达,而在人牙龈成纤维细胞中不表达。结论:成功地构建了多肿瘤靶向性SEA和CD80基因共表达重组腺病毒载体。为应用SEA和CD80基因对人多种肿瘤进行靶向基因治疗奠定了基础。
- 司少艳刘俊丽王晓菲谭小青宋淑军
- 关键词：葡萄球菌肠毒素A腺病毒
- 模拟微重力条件下成骨生长肽促进MC3T3-E1成骨样细胞的增殖与分化被引量：5
- 2012年
- 目的研究回转模拟微重力(simulated microgravity,SMG)条件下成骨生长肽(OGP10-14)对MC3T3-E1成骨样细胞增殖与分化的影响。方法利用回转器模拟失重,MTT法检测OGP10-14对回转24 h,48h,72 h MC3T3-E1细胞增殖的效应,并观察培养液中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨桥素(osteopontin,OPN)活性变化。结果回转模拟微重力条件下,10-8mol/L OGP10-14能够显著促进成骨细胞系MC3T3-E1的增殖(P<0.01)并促进成骨细胞系MC3T3-E1的ALP和OPN活性。结论回转模拟微重力条件下,OGP10-14对成骨细胞系MC3T3-E1的增殖与分化具有促进作用。
- 刘俊丽牛忠英宋淑军司少艳周金莲赵刚谭小青张建中
- 关键词：模拟微重力回转器成骨生长肽
- 腹腔注射胶原蛋白肽增强糖皮质激素免疫抑制模型小鼠的免疫功能被引量：6
- 2014年
- 目的观察腹腔注射胶原蛋白肽对糖皮质激素诱导的免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用。方法采用糖皮质激素诱导的免疫抑制小鼠模型,连续7 d腹腔注射给予100、300、600 mg胶原蛋白肽/kg体质量。分别测量小鼠体质量、胸腺和脾脏质量,计算胸腺和脾脏指数;采用全自动血球计数仪检测外周血白细胞总数、中性粒细胞和淋巴细胞数、中性粒细胞和淋巴细胞百分比,采用流式细胞术检测CD4+/CD8+比值;采用MTT法检测刀豆蛋白A(ConA)诱导的脾脏T淋巴细胞增殖能力。结果与对照组相比,模型组小鼠中性粒细胞数及其百分比显著升高(P<0.05),体质量、胸腺指数、脾脏指数、淋巴细胞数及其百分比、CD4+/CD8+比值、脾脏T淋巴细胞增殖能力显著降低(P<0.05);腹腔注射胶原蛋白肽后,这些指标均向对照组水平恢复,并呈剂量依赖性关系;其中剂量最高600 mg/kg组的小鼠体质量、脾脏指数、淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+比值显著高于模型组,中性粒细胞百分比显著低于模型组(P<0.05),与对照组相比无显著差异。结论腹腔注射胶原蛋白肽能够增强小鼠的免疫功能。
- 司少艳刘俊丽郭燕川王晓菲徐冰心谭小青宋淑军
- 关键词：胶原蛋白肽免疫功能
- 小鼠TERT启动子调控的CD80-SEA基因重组腺病毒载体的构建及在肝癌细胞中的表达鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:构建小鼠端粒酶反转录酶(mTERT)启动子调控的葡萄球菌肠毒素A(SEA)和CD80基因共表达重组腺病毒载体,并观察其介导的SEA和CD80在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中的表达情况。方法:采用AdEasy腺病毒体系,亚克隆mTERT核心启动子区至穿梭质粒pShuttle2,并在其上游插入myc-Max反应元件MMRE,用来调控SEA及CD80基因的表达,构建SEA和CD80基因共表达重组腺病毒载体Ad-MMRE-mTERT-BIS,制备病毒并纯化,然后将病毒以感染复数为100的浓度分别感染肝癌细胞系Hepa1-6和成纤维细胞系NIH3T3。采用免疫荧光染色法检测SEA和CD80在细胞膜表面的表达情况。结果:重组腺病毒载体Ad-MMRE-mTERT-BIS感染的Hepa1-6肝癌细胞膜上能够共表达SEA和CD80;而病毒感染的NIH3T3细胞不能表达SEA和CD80。结论:成功地构建了mTERT启动子调控的SEA和CD80基因共表达重组腺病毒载体,能够调控SEA和CD80基因在肝癌细胞中的靶向表达,为进一步研究肝癌的靶向基因治疗奠定了基础。
- 司少艳宋淑军徐冰心赵刚谭小青刘俊丽张建中刘志国
- 关键词：葡萄球菌肠毒素ACD80腺病毒
- mTERT启动子调控SEA/CD80基因治疗小鼠肝癌被引量：1
- 2012年
- 目的观察我们以前构建的端粒酶反转录酶启动子调控的葡萄球菌肠毒素A(SEA)/CD80基因重组腺病毒载体对肝癌的疗效和诱导的免疫学效应。方法重组腺病毒采用瘤体内直接注射的方式对小鼠皮下移植性肝癌进行治疗,采用RT-PCR和Western blot方法检测腺病毒注射部位的SEA和CD80 mRNA和蛋白的表达情况;采用ELISpot方法和LDH释放实验分别检测脾脏淋巴细胞中肝癌特异性IFN-γ分泌细胞的频数和细胞毒性T细胞(CTLs)对Hepa1-6细胞的特异杀伤活性;通过观察荷瘤小鼠经治疗后肿瘤体积的变化及生存时间,评价重组腺病毒对肝癌的治疗作用。结果我们构建的腺病毒能够使SEA和/或CD80mRNA和蛋白靶向地在肝癌组织中表达;与空载体组和PBS对照组相比,双基因组和单基因组分泌IFN-γ的T细胞数量均明显增多,CTL对Hepa1-6细胞的特异性杀伤作用均明显增强,荷瘤小鼠肿瘤体积明显减小,生存期明显延长;双基因组的疗效和对免疫系统的激活作用明显高于单基因组。结论我们制备的肿瘤靶向性重组腺病毒对肝癌有良好的治疗作用,联合基因治疗优于单个基因治疗。
- 司少艳宋淑军史亮刘俊丽谭小青刘昌叶张建中
- 关键词：葡萄球菌肠毒素ACD80腺病毒肝癌
- 慢性荨麻疹患者外周血单个核细胞Toll样受体和DC-SIGN的检测和分析被引量：3
- 2014年
- 目的检测慢性荨麻疹(CU)患者外周血单个核细胞(PBMC)Toll样受体2(TLR2)、TLR7、TLR9与树突状细胞特异性细胞间黏附分子-3-结合非整合素分子(DC-SIGN)的表达。方法分离CU患者20例与正常对照组20例外周血PBMC,部分细胞提取RNA,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测TLR2、TLR7、TLR9和DC-SIGN mRNA表达,采用流式细胞术检测剩余PBMC中TLR2、TLR7、TLR9和DC-SIGN的蛋白表达。结果 CU患者PBMC的DC-SIGN mRNA表达明显低于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。CU患者PBMC TLR2蛋白表达高于正常对照组(P<0.05),DC-SIGN蛋白表达低于正常对照组(P<0.05)。结论 CU患者PBMC的DC-SIGN表达降低,TLR2蛋白表达增强。
- 王晓菲刘军连宋淑军徐冰心谭小青司少艳
- 关键词：TOLL样受体慢性荨麻疹
- 模拟失重抑制荷黑素瘤小鼠的T淋巴细胞抗肿瘤免疫功能被引量：2
- 2013年
- 目的研究模拟失重对小鼠T淋巴细胞抗肿瘤免疫功能的影响。方法小鼠右后肢皮下注射B16细胞建立移植性恶性黑素瘤模型,采用头低位-15°～20°尾吊小鼠模拟失重模型。观察模拟失重对荷瘤小鼠肿瘤体积和生存时间的影响;采用全自动血细胞分析仪和流式细胞仪分别检测模拟失重条件下荷瘤小鼠外周血白细胞、淋巴细胞的变化和T淋巴细胞亚群的变化;采用ELISA法和LDH释放法分别检测模拟失重对肿瘤细胞诱导T淋巴细胞产生IL-2、TNF-α、IFN-γ的水平和肿瘤特异性CTL对肿瘤细胞杀伤活性的影响。结果与对照组相比,模拟失重组荷瘤小鼠肿瘤生长速度加快,生存期缩短,外周血淋巴细胞总数降低,淋巴细胞比例降低,CD3+、CD4+/CD3+、CD8+/CD3+T淋巴细胞所占比例降低,丝裂原诱导的脾脏T淋巴细胞增殖能力降低(P<0.05或P<0.01)。模拟失重条件下,肿瘤细胞诱导产生的细胞因子IL-2、IFN-γ和TNF-α水平降低,肿瘤特异性CTL对肿瘤细胞的杀伤活性降低(P<0.05或P<0.01)。结论模拟失重抑制小鼠T淋巴细胞抗肿瘤免疫功能。
- 司少艳宋淑军史亮刘俊丽徐冰心易勇谭小青张建中
- 关键词：模拟失重恶性黑素瘤T淋巴细胞抗肿瘤免疫
- 重组人骨保护素片段OPG^(179)与人血清白蛋白在毕赤酵母中的融合表达被引量：4
- 2011年
- 目的:在毕赤酵母中融合表达人骨保护素(OPG)片段OPG179与人血清白蛋白(HSA)。方法:通过RT-PCR扩增获得OPG179基因,构建表达质粒pHILD2-rhOPG179-HSA,转化至毕赤酵母菌中进行表达、纯化,对分泌表达产物进行SDS-PAGE及Western印迹检测。结果:酶切鉴定与测序结果显示重组表达质粒pHILD2-rhOPG179-HSA正确;经Western印迹检测,融合蛋白rhOPG179-HSA的相对分子质量约为97×103,符合预期值;rhHSA-OPG179在毕赤酵母中的表达量约为80 mg/L。结论:表达并纯化制备了重组骨保护素片段与人血清白蛋白的融合蛋白,为后续的生物学活性研究奠定了一定的基础。
- 刘俊丽刘波宋淑军司少艳谭小青吴军景青萍张建中
- 关键词：人骨保护素人血清白蛋白融合蛋白毕赤酵母
