谢夏阳 作品数:12 被引量:44 H指数:4 供职机构: 上海交通大学 更多>> 发文基金: 国家科技重大专项 上海市科学技术委员会科研基金 上海市科委科研计划项目 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 生物学 轻工技术与工程 更多>>
绿色荧光蛋白基因在转基因小鼠体内的表达 被引量:1 2005年 建立绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠,继而传代建系。采用显微注射法,将GFP基因注入FVB/NJ小鼠受精卵原核内,获得子代鼠。分娩后3周剪取仔鼠尾,提取基因组DNA,应用PCR、Southern印迹技术进行整合检测。结共用雌性小鼠200只,注射受精卵1586枚,移植卵数386枚,受体鼠32只,怀孕鼠4只,子代鼠18只,有4只为阳性。取2只首建鼠的胚胎,在荧光显微镜下观察GFP表达明显,表明初步获得了转绿色荧光蛋白基因小鼠。 徐艺玫 谢夏阳 刘丽均 谢恩 徐平 顾为望关键词:显微注射 绿色荧光蛋白 转基因小鼠 特色小鼠种质资源保存和保种新技术的研究 姚明 刘丽均 杨伟敏 邵伟娟 徐平 潘振业 徐晨 谢建云 倪丽菊 陈国强 闫明霞 张瑞忠 施恩 孔韩卫 陈荪红 谢夏阳 郁丽丽 顾锋 王敏 周勇 严国锋 随着生命科学研究的深入,越来越多基因被测序和克隆,各种疾病动物模型、基因敲除,基因导入和转基因动物模型的数目也不断增多,并且要求这些具有遗传学特性的小鼠模型能够长期保存,以满足生命科学相关研究特别是后基因组时代研究的需求...关键词:关键词:小鼠 种质资源 保种 小鼠卵巢异体移植研究 被引量:3 2007年 目的研究小鼠卵巢移植后,移植卵巢的功能。方法取出生10 d的仔鼠卵巢,移植到同品系或者遗传背景相同的品系的1月龄其它母鼠体内,观察移植受体是否有正常的繁殖功能,并且用PCR法,对移植受体鼠产生的后代进行检测。结果移植卵巢在受体内不但可以恢复正常功能,产生正常的仔鼠,而且仔鼠经过检测,来源于移植卵巢所产生的卵子。结论卵巢移植完全可行,移植卵巢功能完全可以恢复。 刘丽均 郁丽丽 谢夏阳 谢恩 张瑞忠 袁水娟 徐平关键词:小鼠 卵巢 PCR检测 高效制备转基因小鼠的优化试验 被引量:2 2006年 为了优化转基因小鼠的制备技术,试验着重对注射DNA的制备、高质量受精卵的获得、显微注射、胚胎移植及早期胚胎检测等各步骤中的主要影响因素进行了优化。移植后出生的小鼠经PCR及Southern Blot检测,阳性鼠检出率由1.85%(2/108)增加到23.36%(25/107)。由此说明,通过注射DNA的改良、技术优化以及GFP在转基因动物中的应用,转基因效率可以得到明显提高,为高效制作转基因动物提供基础。 谢夏阳 滕勇 刘丽均 徐艺玫 唐一岷 徐平关键词:显微注射 胚胎移植 转基因小鼠 两种含SV40T不同区段的基因构建及其转基因小鼠的建立 被引量:1 2005年 目的 为解决SV4 0T转基因小鼠高发瘤难保种的问题 ,构建了两种含有SV4 0T不同区段的外源基因 :Rb结合域点突变的SV4 0T基因 (SV4 0T DRb)和无p5 3结合域的SV4 0T基因 (SV4 0T Dp5 3)。方法 利用分子生物学的基因克隆手段 ,将改造的SV4 0T基因片段克隆测序 ,最终将这两个改造后的基因克隆进乳腺特异性的真核表达载体p2 0 5C3中 ,运用雄原核显微注射法制备转基因小鼠。结果 利用PCR方法检测出 6只双阳性转基因 (同时检测到SV4 0T DRb和SV4 0T Dp5 3两种基因 )小鼠 ,为避免检测结果中假阳性的发生 ,应用Southern blot方法检测出 1只双阳性转基因小鼠。结论 本试验的结果证明 ,构建的两种含SV4 0T不同区段的策略是成功的 ,其建立的阳性转基因小鼠确实是弱化了SV4 0T转基因小鼠高发瘤的特性。 谢夏阳 滕勇 孙强 徐平 孙怀昌 李厚达关键词:转基因小鼠 PCR 肿瘤模型 DNA肿瘤病毒 影响胞质内单精注射受精率的相关因素 被引量:3 2007年 作者简要综述了胞质内单精注射技术的影响因素,包括精子状态、卵子状态、受精激活及操作技术等方面的研究,为进一步提高胞质内单精注射的技术水平奠定基础。 赵丹凤 刘丽均 徐平 张守纯 赵立虎 谢夏阳关键词:受精 影响因素 RAPD分子标记技术用于实验兔品系鉴定的初探 被引量:4 2007年 本文选用新西兰白兔(New Zealand White Rabbit,NZWR)、青紫兰兔(Chinchilla Rabbit,CR)、日本白兔(Japanese White Rabbit,JWR)3个品系的血样提取基因组DNA,并应用随机引物扩增多态性DNA技术(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)进行遗传分析和比较。结果表明,使用随机引物PCR扩增后,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测共发现78个条带,其中多态性片段25条,占32.1%,从7套共140个随机引物中筛选出10个多态性较高的引物,包括BH9、AD1、BH11、AN12、AN14、O19、AD3、AD19、O4和O14。其中BH9、AD1扩增效果最好,扩增产物有较大的共性和较好的多态性,可作为实验兔品系鉴定的分子依据。日本白兔和新西兰兔片段共享度最高为0.8268,青紫兰兔和日本白兔最低为0.6190,统计结果显示RAPD标记多态性丰富,3品系的种内相似度大于种间相似度。该技术可用于实验兔的遗传检测。 赵立虎 谢夏阳 赵丹凤 张春燕 狄敏 刘丽均 李晟阳 张守纯 徐平关键词:实验兔 RAPD 不同品系小鼠体外受精方法的研究 被引量:11 2004年 对CD 1、B6DF1和C57BL/6小鼠的卵母细胞采用直接、去卵丘细胞、切割透明带法处理后,分别进行体外受精、体外培养和胚胎移植试验。结果表明:CD 1和B6DF1小鼠体外受精率及受孕率均高于近交系C57BL/6小鼠。3个品系小鼠卵母细胞3种不同处理试验,受孕率差异均不显著;去卵丘细胞卵体外受精率(11%~23%)均显著低于卵丘卵母细胞复合体的受精率(34%~60%)和切割透明带卵的受精率(48%~65%),而C57BL/6小鼠的卵经切割透明带后体外受精率显著高于卵丘卵母细胞复合体的受精率。C57BL/6小鼠理想的体外受精方法为切割透明带法,而CD 1、B6DF1小鼠切割透明带卵受精率与其卵丘卵母细胞复合体的受精率差异均不显著,因此这2个品系可直接用卵丘卵母细胞复合体进行体外受精,其方法简单、有效。 吴红 孙强 范士明 茅慧华 谢夏阳 李厚达关键词:小鼠 体外受精 受精率 受孕率 SPF级金黄地鼠的主要生物学特性 被引量:12 2007年 目的测定SPF级金黄地鼠的生物学特性数据,为生物制品的生产、检定及科学研究提供标准化的SPF级金黄地鼠。方法在5周龄、10周龄和30周龄群体中随机抽样20只地鼠,雌雄各半。测定生长发育、繁殖性能、淘汰种鼠干物质及粗脂肪含量、解剖学特性以及血液生理生化指标等生物学特性指标。结果从SPF级金黄地鼠的生长和繁殖特性来看,通过严格的选择和淘汰,SPF级金黄地鼠的生长、繁殖等特性已保留下来,同比原种群得到进一步提高。其体重和主要脏器重量、脏器系数的数据在5、10和30这三个日龄段基本稳定一致,呈现正常的生长规律;该鼠群的血常规、血液生化指标和免疫指标也比较稳定一致,个体间的差异很小。结论本实验测定的SPF级金黄地鼠的主要生物学特性,将为SPF级金黄地鼠进一步标准化提供极其重要的依据。 谢夏阳 符杰 龚玉花 毛佳贤 陈国强 顾坚忠 徐平关键词:生物学 精原干细胞移植治疗不孕不育小鼠模型的初探 被引量:1 2007年 通过曲细精管显微注射法,将从雄性FVB/NJ-GFP转基因小鼠睾丸内分离得到的精原干细胞注射进不孕不育动物模型——BALB/c雄性裸鼠的睾丸曲细精管中,对其生精现象进行了深入的分析.为了进一步验证精原干细胞移植后的雄鼠重新获得生殖能力,这些雄鼠被用于自然交配,并以编码GFP荧光蛋白的cDNA为杂交探针,用Southern Blot方法分析其后代小鼠的基因型.实验结果表明,作为移植受体的不孕不育BALB/c裸鼠是一种免疫缺陷性小鼠,能较好地避免供体和受体之间的免疫排斥反应.供体精原干细胞可以在68.33%(41/60)进行移植实验的受体小鼠睾丸内存活、迁移和增殖,并在受体睾丸内腔中发育成成熟的精子,有5只杂交后代小鼠的基因型呈现为GFP阳性.本实验室建立了曲细精管显微注射技术,并在利用精原干细胞移植治疗不孕不育小鼠的实验中获得了初步成功.精原干细胞移植技术在探讨精子发生机理、重建不育个体的精子发生和恢复不育症患者的生育能力等方面有着重要的应用前景. 谢夏阳 滕勇 马良宏 刘丽均 王翔 宋云庆 徐平关键词:精原干细胞 显微注射 不孕不育 绿色荧光蛋白