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ERK1/2信号通路的活化参与人脐静脉内皮细胞向间充质转分化的过程被引量：1: 2013年; 目的建立人脐静脉内皮细胞(HUVECs)向间充质转分化的模型并探讨其可能的信号转导途径。方法以HUVECs为研究对象,分组如下:对照组、转化生长因子-β1(TGF-β1)模型组、TGF-β1+DMSO组以及TGF-β1+抑制剂干预组。TGF-β1模型组应用5ng/mL TGF-β1刺激HUVECs 72h;TGF-β1+DMSO组应用5ng/mL TGF-β1及1μL/mL DMSO刺激HUVECs 72h;TGF-β1+抑制剂干预组分别应用p38MAPK抑制剂SB203580(5mmol/L)或ERK抑制剂U0126(10mmol/L)或JNK抑制剂SP600125(5mmol/L)干预TGF-β1诱导的内皮细胞,倒置显微镜观察内皮细胞形态,应用免疫荧光法检测VE-钙粘蛋白(VE-cadherin)和α-肌动蛋白(α-SMA)在细胞内的分布情况;并应用Western blot法检测VE-cadherin和α-SMA的蛋白表达情况。结果 TGF-β1(5ng/mL)刺激HUVECs 72h后,内皮细胞形态由卵圆形铺路石状向梭形转变,与0h相比,VE-cadherin蛋白表达显著下调(P<0.05),α-SMA蛋白表达显著上调(P<0.05)。抑制ERK1/2信号转导通路,可维持HUVECs内皮细胞表型以及VE-cadherin在内皮细胞的表达,抑制α-SMA蛋白表达,与TGF-β1模型组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);抑制p38MAPK和JNK通路,与TGF-β1模型组相比,HUVECs表型、VE-cadherin和α-SMA蛋白表达未见明显差异。结论 TGF-β1可诱导内皮细胞向间充质转分化,应用U0126抑制ERK1/2信号途径可抑制内皮细胞转分化的进展,提示ERK1/2的活化可能是该过程重要的信号转导途径。; 刘萍邓元俊裴广畅许楚瓯常晓燕曾锐姚颖徐钢韩敏; 关键词：人脐静脉内皮细胞胞外信号调节激酶

肾小管上皮细胞中Cdc42相关蛋白4对E-cadherin和Occludin表达的影响及调节: 肾间质纤维化是各种慢性肾脏疾病(Chronic kidney disease, CKD)进展到终末期所发生的不可避免的结果。肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化(EMT)被认为是其中重要的事件之一,在EMT的过程中,上皮标志...; 许楚瓯; 关键词：肾小管上皮细胞; 文献传递

CIP4对转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞-间充质转分化的影响被引量：3: 2011年; 目的观察骨架调节蛋白CIP4（Cdc42 interacting protein 4）对转化生长因子β1（TGF—β1）诱导的人肾小管上皮细胞-间充质转分化（EMT）的影响，并探讨其产生的机制。方法10μg／L TGF—β1刺激72h诱导人近端肾小管上皮细胞（HK-2细胞）向间充质转分化。Western印迹法检测各组细胞内E—cadherin和α-SMA蛋白的表达。倒置显微镜观察细胞形态的变化。根据GenBank人CIP4的完全cDNA序列，设计1条特异性干扰CIP4表达的RNA片段（CIP4-siRNA）和含野生型CIP4的重组真核表达质粒（pcDNA3．1-hCIP4），利用lipofactamine2000将其转染HK-2细胞。Western印迹法检测对照组、TGF—B1刺激组、CIP4-siRNA转染组、pcDNA3．1-CIP4转染组细胞内CIP4、E—cadhefin和α-SMA蛋白的表达，共聚焦显微镜观察E—cadhefin和仪．SMA蛋白的分布改变；用P13K—Akt特异性抑制剂渥曼青霉素（wortmannin）1panol／L干预TGF—β1刺激的HK-2细胞48h，Western印迹法检测对照组和干预组CIP4表达的变化。结果TGF一[31干预后HK一2细胞E—cadhefin蛋白表达显著减少（P〈0．05），α—SMA蛋白表达显著增多（P〈0．05），细胞形态由典型的上皮细胞向肌成纤维细胞转变，表明TGF-β1诱导。肾小管上皮细胞EMT模型成功。CIP4-siRNA抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞表达CIP4后，E—cadhenn蛋白表达显著增多（P〈0．05），α—SMA蛋白表达显著减少（P〈0．05），部分逆转了上述TGF—β1诱导的肾小管上皮细胞EMT。pcDNA3．1-hCIP4转染使CIP4高表达后，HK-2细胞E—cadhefin蛋白表达显著减少（P〈0．05），α-SMA蛋白表达显著增多（P〈0．05），诱导了肾小管上皮细胞EMT。用渥曼青霉素干预TGF—β1刺激的HK-2细胞48h，CIP4可能蛋白表达显著减少（P〈0．05）。结论TGF—β1通过P13K—Akt途径上调CIP4表达，CIP4可能进一步参与TGF—β1诱导的肾小管上皮细胞EMT过程。; 白寿军张亚敏曾锐许楚瓯刘丽丽周巧丹李彩霞裴广畅葛树旺徐钢刘晓城; 关键词：转化生长因子Β1 肾小管上皮细胞 CIP4 PI3K-AKT

肾小管上皮细胞转分化中CIP4与β连环素的相互作用: 2012年; 目的探讨在大鼠肾脏纤维化组织中CIP4（Cdc42-interactingprotein4）的表达和分布，以及在转化生长因子B1（TGF-β1）诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）-间质细胞转分化（EMT）模型中，CIP4与β连环素（β—catenin）之间的相互作用关系。方法体内实验用sD大鼠5／6肾切除法建立肾纤维化模型，根据Masson染色结果观察肾脏组织纤维化程度；用免疫组织化学染色观察CIP4在模型组和假手术组的表达和分布。体外实验用HK-2细胞株作为研究对象，使用TGF-β1（10μg／L）刺激72h建立EMT模型。Western印迹法检测E钙黏蛋白（E—cadherin）和a平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白表达变化，同时检测CIP4和β—catenin的表达水平；免疫荧光法观察CIP4和β-catenin在两组细胞中的共定位关系；免疫共沉淀方法检测CIP4和β—catenin之间的相互作用关系；用脂质体2000将质粒pcDNA4．0-CIP4瞬时转染至HK-2细胞，Western印迹法检测高表达CIP4对上述指标的影响，以及高表达CIP4与TGF-β1刺激对β—catenin入核的影响。结果体内实验，CIP4在假手术组和5／6肾切除组大鼠肾组织中都有表达，在纤维化的肾脏组织中表达上调，主要分布在肾小管中，且在上皮细胞侧基底膜处聚集。体外实验，与对照组相比，EMT模型组HK-2细胞CIP4和OL—SMA蛋白表达明显增高，分别是对照组的1．8倍和2．5倍，同时E—cadherin表达量减少（均P〈0．05），B—catenin表达量无明显变化。免疫荧光结果显示对照组CIP4与β-catenin主要分布于细胞膜，且在细胞膜上存在部分共定位；模型组中，CIP4与β-catenin在细胞膜上分布减少，细胞核内表达增多，细胞核内存在部分共定位现象。免疫共沉淀结果表明在以上两组细胞中，CIP4和β—catenin均存在相互作用。单独转染CIP4目的基因质粒的HK-2细胞中，CIP4与α-SMA表达上调，分别为对照组的3．5倍与1．7倍，并; 许楚瓯张亚敏刘萍周巧丹曾锐白寿军裴广畅韩敏刘丽丽徐钢; 关键词：纤维化转化生长因子Β1 Β连环素 CIP4 转分化

Erbin在肾纤维化中表达上调: 周巧丹许楚瓯寇沛裴广畅张亚敏刘丽丽曾锐徐钢

CIP4在肾间质纤维化中的表达及作用被引量：5: 2010年; 目的观察骨架调节蛋白CIP4（Cdc42 interacting protein-4）在肾纤维化过程中表达水平、细胞内定位及高表达的CIP4基因对人肾小管上皮细胞E钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（vimentin）的表达和β连环素（β-catenin）酪氨酸磷酸化水平的影响.方法体外实验以人近端肾小管上皮细胞（HK-2细胞）为研究对象,10 μg/L TGF-β1刺激72 h诱导HK-2细胞转分化;Western印迹法检测各组细胞内CIP4、E-cadherin、vimentin蛋白的表达;RT-PCR法检测细胞内CIP4 mRNA表达水平;激光共聚焦显微镜观察CIP4在细胞内定位.体内实验以SD大鼠为研究对象,5/6肾切除法制作慢性肾纤维化模型;常规检测BUN和Scr水平;Masson染色检测肾组织纤维化水平;免疫组化法检测肾组织内CIP4蛋白的表达和分布.脂质体法介导含野生型CIP4的重组真核表达质粒pcDNA3.1-CIP4或pcDNA3.1-Zeo（空载体）转染HK-2细胞,Wetern印迹法检查转染的效率.稳定转染成功后,Wetern印迹法检测正常组、pcDNA-CIP4转染组和空载体转染组细胞内E-cadherin、vimentin蛋白的表达和β-catenin酪氨酸磷酸化水平.结果正常HK-2细胞表达E-cadherin和少量的CIP4,几乎不表达vimentin.TGF-β1干预组细胞vimentin蛋白表达增加（P＜0.05）,E-cadherin蛋白表达减少（P＜0.05）,CIP4 mRNA和蛋白表达均显著增多（P＜0.05）.CIP4在正常细胞内大部分在细胞膜,少量在细胞质,在转分化的HK-2细胞表达显著增多,并向细胞质和细胞核聚集.假手术组大鼠肾功能正常,肾组织内未见明显纤维化组织,CIP4在肾小管表达较少,肾小球内几乎不表达;模型组大鼠BUN和Scr增高,肾组织内可见明显纤维化组织,CIP4在肾小管表达明显增加.pcDNA3.1-CIP4转染组较正常组和空载体转染组细胞内CIP4表达增多（P＜0.05）,β-catenin酪氨酸磷酸化水平和vimentin蛋白表达增加（P＜0.05）,而E-cadherin蛋白表达减少（P＜0.05）.结论 CIP4高表达可能参与肾�; 白寿军张亚敏周巧丹曾锐李彩霞裴广畅许楚瓯葛树旺周欢徐钢刘晓城; 关键词：纤维化肾小管上皮细胞 Β连环素 CIP4

Erbin基因沉默对乳腺癌细胞生物学行为的影响被引量：1: 2013年; 目的:观察Erbin基因表达沉默后对乳腺癌细胞形态及侵袭迁移生物学行为的影响。方法:通过慢病毒shRNA转染技术建立低表达Erbin的乳腺癌细胞模型。蛋白质印迹法检测基因沉默前后Erbin蛋白表达的效果;倒置显微镜观察基因沉默前细胞形态改变;Matrigel-Transwell小室法检测细胞侵袭能力改变;Transwell小室法检测细胞迁移能力改变。蛋白质印迹法检测转移相关基因基质金属蛋白酶-2(matrix metallopro teinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达改变。结果:成功建立了Erbin基因沉默乳腺癌细胞模型。蛋白质印迹法显示,稳定表达Erbin-shRNA细胞的Erbin蛋白表达明显被抑制,Erbin基因沉默后乳腺癌细胞变长、变梭,细胞间隙明显增宽,侵袭能力为56.3±7.6,明显高于空载体转染组的29.3±2.1,t=-5.908,P=0.004;迁移能力为83.6±7.2,较空载体转染组的52.6±8.3显著增强,t=-4.868,P=0.008。Erbin-shRNA转染后转移相关基因MMP-2表达为0.74±0.021,较空载体组的0.25±0.039明显上调,t=-19.23,P<0.001;MMP-9的表达为0.78±0.037,较空载体组的0.32±0.078也显著上调,t=-10.02,P=0.001。结论:Erbin基因的表达沉默对乳腺癌细胞的部分恶性生物学行为的发生有一定促进作用,可促进细胞变长、变梭,促进细胞侵袭迁移能力增强。; 曾巧周巧丹陈琳寇沛廖盼丽许楚瓯付会玲刘萍刘丽丽徐钢; 关键词：ERBIN RNA干扰乳腺肿瘤

Cdc42相关蛋白4通过极性蛋白6参与肾间质纤维化被引量：2: 2012年; 目的探讨Cdc42相关蛋白4对闭合素表达的影响及与极性蛋白6之间的相互作用。方法体内实验用单侧输尿管结扎术建立小鼠的。肾脏纤维化模型，根据Masson染色观察肾脏纤维化，用免疫组织化学法观察Cdc42相关蛋白4的表达及分布。体外实验用转化生长因子81诱导大鼠近端肾小管上皮细胞向间质细胞转分化。瞬时转染pcDNA4．0／Cdc42相关蛋白4质粒至NRK52E细胞。Westernblot法检测相关蛋白的表达。免疫沉淀法检测Cdc42相关蛋白4与极性蛋白6的相互作用。结果Cdc42相关蛋白4在纤维化的肾组织中表达上调，主要分布于肾小管上皮细胞。高表达Cdc42相关蛋白4与转化生长因子81刺激后的细胞相关蛋白表达量的改变一致，且均存在Cdc42相关蛋白4与极性蛋白6的相互作用。结论Cdc42相关蛋白4可能通过与极性蛋白6相互作用，调节闭合素的表达，参与肾间质纤维化。; 许楚瓯刘萍周巧丹裴广畅刘丽丽徐钢; 关键词：小鼠转化生长因子上皮细胞

Erbin在肾间质纤维化中的表达和作用被引量：2: 2011年; 目的探讨Erbin在肾脏间质纤维化中表达量的变化及上调Erbin对转化生长因子β1（TGF—β1）诱导大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK52E）转分化的影响。方法体内实验采用SD大鼠5／6肾切除法建立肾纤维化动物模型，收集并检测各组血清中Scr、BUN水平；Masson染色观察肾问质纤维化程度；免疫组化及Western印迹检测Erbin的分布与表达。体外实验采用TGF—β1（10μg／L）刺激NRK52E细胞72h建立上皮细胞一间充质转分化（EMT）细胞模型；免疫荧光及Western印迹法检测E钙黏蛋白（E-cadhefin）和仪平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达变化；RT—PCR及Western印迹法检测Erbin的表达变化。用脂质体2000将质粒Prk5-mye-Erbin瞬时转染至NRK52E细胞，Western印迹法观察上调Erbin表达后对上述各种指标的影响。结果（1）假手术组大鼠肾功能正常[Scr（33．96±7．28）μmol／L、BUN（8．11±2．55）mm01／L]，Masson染色未见肾间质纤维化，Erbin在肾小管表达较少；模型组大鼠Scr[（140．52±61．11）μmol／L1、BUN[（34．23±7．66）mmol／L]均显著高于假手术组（均P〈0．05），肾间质可见明显纤维化，Erbin在肾小管表达也明显增加，是假手术组的2．9倍（P〈0．01）。（2）正常NRK52E细胞表达E—cadhefin，少量表达Erbin和α-SMA。TG-β 1刺激后，NRK52E细胞E—cadhefin表达显著减少，Erbin和α-SMA则表达增加（均P〈0．05）；而转染质粒Prk5-myc-Erbin可逆转TGF-β1诱导的NRK52E细胞E-cadhefin表达下调，并可抑制d—SMA表达上调（均P〈0．05）。结论Erbin在肾间质纤维化中表达增加，上调Erbin表达可抑制TGF—B1诱导NRK52E发牛EMT,提示Erbin在肾脏纤维化中可发挥保护作用。; 周巧丹寇沛许楚瓯曾锐白寿军裴广畅张亚敏韩敏刘丽丽徐钢; 关键词：纤维化肾小管上皮细胞 ERBIN

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许楚瓯

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