许巧仙 作品数:7 被引量:42 H指数:5 供职机构: 北京中医药大学中药学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 更多>>
甘草HMGR基因cDNA的克隆及功能鉴定(英文) 被引量:18 2013年 甘草为常用中药材,具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛和调和诸药等作用。甘草酸是甘草中的主要活性成分,其生物合成途径受到许多酶的调控,其中3-羟基-3-甲基戊二酰CoA还原酶(3-hydroxy-3-methylglutary CoA reductase,HMGR)催化3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(3-hydroxy-3-methylglutary CoA,HMG-CoA)生成甲羟戊酸(MVA),是该途径中的第一个限速酶。本文克隆了甘草HMGR基因cDNA序列,对其进行序列分析,并与其他物种进行序列比对。构建了原核表达载体,诱导其外源表达及酶促反应,并利用TLC及GC-MS对产物进行检测。结果表明本文克隆得到的HMGR序列能很好的完成特定的酶促反应任务。由于HMGR基因在甘草酸生物合成途径中的重要作用,因此本实验的研究结果对于在分子水平上揭示高品质甘草的形成机制具有一定的意义。 刘颖 许巧仙 席培宇 陈宏昊 刘春生关键词:甘草 HMGR CDNA GC MS 皖赣两省野生粉防己资源调查报告 被引量:5 2010年 目的:调查安徽、江西两省的野生粉防己资源现状,为制定政策、采取保护措施提供依据。方法:走访调查和样地调查相结合,将调查所得数据进行整理,综合分析各地资源状况。结果:两省野生粉防己资源都受到较为严重的破坏。结论:应立即采取多种有效措施保护野生粉防己,同时大规模推广人工栽培,保证药材的市场供应,实现资源合理、持续利用。 呙未 沈湛云 刘春生 许巧仙关键词:粉防己 云南大理民间验方对糖尿病模型血糖的影响 被引量:3 2009年 目的:观察云南大理民间验方对实验性糖尿病小鼠血清中葡萄糖含量的变化。科学的评价验方对血糖浓度的影响和对糖尿病的治疗机理。方法:采用腹腔注射四氧嘧啶造成糖尿病动物模型。选择血糖含量大于16mmol/L的小鼠随机分为五组,三个不同剂量的验方组即大剂量组(0.2g/kg生药),中剂量组(0.4g/kg生药),小剂量组(0.8g/kg生药),分别相当于临床成人用药量的10、20、40倍。阳性对照优降糖组(25mg/kg),相当于成人用量的20倍。模型组。每日喂食前灌胃给药,每日一次,持续10d。10d后测定各组小鼠血糖含量。结果:验方高剂量组、中剂量组和低剂量组降糖作用与模型组比较具有显著性差异(P<0.05);低剂量组的效果尤为明显。降糖作用与阳性对照组相当。结论:实验结果显示,验方确实可降低实验性糖尿病小鼠血清的血糖浓度,且效果比优降糖组的明显。其中,验方组中相当于成人用量的10倍(0.2g/kg生药)的药效最明显。证实了云南大理民间治疗糖尿病的验方的疗效。 孙华颖 席超 韩慧 白小刚 许巧仙 张秋菊关键词:糖尿病 血糖浓度 小鼠 乌拉尔甘草HMGR基因cDNA的克隆与序列分析 被引量:6 2011年 目的:对乌拉尔甘草3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3methylglutary CoA reductase,HMGR)的cDNA克隆并进行序列分析。方法:根据NCBI数据库中的豆科其他物种HMGR的cDNA保守区设计引物,利用同源扩增和cDNA末端快速扩增技术从甘草根中获得目的基因;利用BLAST进行序列比对,ORF Finder寻找开发阅读框,Prosite分析蛋白质的基本结构域,Clustal x比对已有HMGR的氨基酸序列,并构建进化树。结果:得到1个全长为1 842 bp的HMGR的cDNA序列,含有1 722 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码573个氨基酸,具有HMGR家族的特异序列,推测的氨基酸序列与豌豆、蒺藜苜蓿的氨基酸序列一致性分别为84%,76%。结论:对甘草HMGR基因的cDNA进行了克隆,为进一步研究3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A在甘草酸生物合成途径中的作用提供了理论依据。 荣齐仙 许巧仙 刘春生 黄璐琦关键词:甘草 HMGR RACE 甘草HMGR基因多态性及其对产物MVA积累的影响研究 甘草是我国著名的传统中药,兼有“国老”的尊号,甘草酸(glycyrrhizie acid,GA)作为甘草中的主要有效成分具有重要的药理学功效,也是衡量甘草质量最重要的指标.随着野生甘草的日益匮乏,人工栽培甘草的甘草酸含量... 许巧仙关键词:甘草 甘草酸 甲羟戊酸 原核表达 甘草3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因多态性对其编码酶催化效率的影响 被引量:6 2012年 目的:利用GC-MS方法分析甘草不同3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)基因型表达蛋白的催化效率,为揭示甘草HMGR多态性在优质甘草药材形成中的作用奠定基础。方法:以从甘草中克隆的4种HMGR基因突变型构建表达载体,转化Escherichia coli BL21,进行诱导表达、检测、纯化及体外酶促反应,采用TLC及GC-MS对反应产物进行定性及定量分析。结果:L/V型突变(-HSL,-HSV)催化活性近似,GA插入型突变(GALLV,GALSV)催化活性近似,但插入型突变的催化活性显著高于前者,是前者的2倍左右。结论:甘草功能基因HMGR基因多态性可能是甘草优质药材形成的分子基础。 刘颖 许巧仙 王学勇 刘春生 陈宏昊关键词:甘草 基因多态性 MVA 甘草3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因多态性与甘草酸含量的相关性分析 被引量:7 2012年 目的:揭示甘草3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)基因的多态性,并阐述HMGR基因多态性与甘草酸含量的相关性。方法:以甘草酸含量差异显著的甘草个体为材料,通过RT-PCR法扩增其HMGR基因编码区;与载体pMD19-T连接后克隆测序;通过多重比对进行HMGR基因多态性分析,及与甘草酸含量之间的关联分析。结果:HMGR基因编码区多态性包括整码突变、碱基置换突变、拷贝数多态性及等位基因杂合;HMGR编码氨基酸序列中存在以下4种类型变异,即-HSL,-HSV,GALLV,GALSV,其中-HSV型为甘草中普遍存在类型,-HSL型为甘草酸低含量甘草的特有类型,GALSV型为甘草酸高含量甘草特有类型。结论:甘草HMGR基因编码区具有丰富的多态性,和甘草酸含量之间具有相关性。 刘颖 许巧仙 王学勇 刘春生 陈宏昊关键词:甘草 基因多态性 逆转录 生物信息学