蔡月琴
- 作品数：3 被引量：23H指数：2
- 供职机构：浙江大学动物科学学院动物预防医学研究所更多>>
- 发文基金：浙江省科技攻关计划浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 狂犬病病毒糖蛋白膜外区基因在大肠埃希氏菌中的高效表达被引量：11
- 2006年
- 为获得狂犬病病毒(RV)糖蛋白抗原,采用RT-PCR方法从狂犬病病毒ERA株中扩增了编码RV糖蛋白的全长基因,将其克隆于pMD18-T载体,再经PCR扩增出糖蛋白全长基因和膜外区基因,将其分别亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)、pET-32a(+)和pGEX-4T-1中,经PCR 和双酶切鉴定以及序列分析,表明已成功构建了重组质粒。将重组质粒转化到大肠埃希氏菌BL21 (DE3)中进行表达,结果显示,克隆到pET-32a(+)的糖蛋白膜外区基因表达量最高,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的45．4％。经Western-blotting检测,不同载体表达的糖蛋白膜外区产物均可与兔抗RV多抗发生特异性反应,表明,重组蛋白具有良好的反应原性。
- 蔡月琴叶菊秀李玲燕周继勇
- 关键词：狂犬病病毒
- 狂犬病病毒核蛋白基因在大肠杆菌中的高效表达被引量：14
- 2007年
- 为获得狂犬病病毒(RV)核蛋白抗原,采用RT-PCR方法从狂犬病病毒ERA株中扩增了RV核蛋白基因,分别亚克隆到原核表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+)中,经PCR和双酶切鉴定以及序列测定,重组质粒构建成功。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,表达的核蛋白再经Ni2+-NTA亲和层析纯化。结果显示,核蛋白在pET-32a(+)中的表达量(30.4%)高于在pET-28a(+)中的表达量(19.4%),培养物中的高纯度核蛋白产量分别为13.6和8.45 mg/L。经Western-blotting检测,不同载体表达的核蛋白均可被兔抗RV多克隆抗体特异识别,表明核蛋白具有良好的反应原性。
- 蔡月琴马益萍申会刚郭军庆周继勇
- 关键词：狂犬病病毒核蛋白蛋白纯化
- 传染性支气管炎病毒S1蛋白在Vero细胞的表达与分布被引量：1
- 2007年
- 将传染性支气管炎病毒(IBV)ZJ971 S1基因亚克隆到绿色荧光蛋白(GFP)表达载体pEGFP-C2中,成功构建重组表达质粒pEGFP-ZJ971-S1。重组质粒在脂质体的介导下转染Vero细胞,借助荧光显微镜在转染后4h观察到S1-GFP融合蛋白的瞬时表达。免疫细胞化学染色(ICC)结果显示,抗ZJ971 S1D蛋白单克隆抗体和鸡抗IBV ZJ971全病毒血清特异性识别了S1基因转染细胞,表明S1蛋白在Vero细胞中得到有效表达。荧光显微镜观察和ICC均表明,S1表达蛋白主要分布在转染细胞的胞浆内,而胞核中未见分布,提示IBV S1蛋白内可能存在与病毒装配相关的细胞定位信号。
- 胡金强蔡月琴李益飞郭军庆孙文博周继勇
- 关键词：传染性支气管炎病毒S1蛋白VERO细胞
