蒋文明
- 作品数：46 被引量：179H指数：9
- 供职机构：南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传变异与免疫控制新技术基础研究
- 姜平李玉峰王先炜蒋文明柏坤桃蔡宝祥黄娟王兴龙陈溥言杨宝收
- (1)在国内较早开展PRRSV遗传变异与分子流行病学研究，首先证明中国PRRSV流行毒株存在5种GP5糖基化位点变化类型，发现中国存在高致病性PRRSV，PRRSV流行毒株间存在自然基因重组现象；(2)利用重组腺病毒系统...
- 关键词：
- 关键词：兽药
- GSP:兽用生物制品的运输、贮存与使用
- 2006年
- 首先对兽用生物制品的命名和兽药GSP的涵义作了概述,然后对免疫预防用制品、诊断用制品、治疗用制品的运输、贮存与使用分别进行了阐述,最后对改善我国兽用生物制品的监管提出了一些建议。
- 张振兴李玉峰蒋文明
- 关键词：兽用生物制品兽药GSP诊断液抗血清微生态制剂
- 串联表达PRRSV M与GP5蛋白重组腺病毒的构建及其免疫特性研究被引量：14
- 2006年
- 利用PCR扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒的M基因,按正确的读码框与GP5基因串联,成功构建穿梭载体pShuttle-CMV-M-GP5,经PCR、测序鉴定正确。PmeⅠ线性化后在BJ5183大肠杆菌内与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组,产生重组腺病毒DNA。重组腺病毒DNA经PacⅠ线性化后用脂质体转染HEK-293A细胞,在细胞内包装成完整的腺病毒,通过IFA可以检测到M与GP5串联的重组腺病毒构建成功,可以正确地表达目的蛋白。将构建好的重组腺病毒免疫小鼠,结果表明可以诱导产生较强的体液免疫应答(ELISA抗体和中和抗体)和细胞免疫应答(淋巴细胞增殖和CTL反应)。证明该重组腺病毒具有较好的免疫原性,为下一步猪体免疫试验奠定了基础。
- 蒋文明姜平李玉峰汤景元王先炜杜以军
- 关键词：PRRSVMGP5重组腺病毒体液免疫
- 副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立与应用被引量：24
- 2007年
- 通过反应条件的优化、特异性和敏感性的测定,建立了一种快速、简便、准确的PCR方法,用于检测副猪嗜血杆菌(HPs)。PCR扩增片段大小为822bp,最小检测量为1080个HPs。与大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和链球菌无特异性反应。用该法检测人工感染猪的肺脏、心脏和肾脏抽提的DNA,结果为阳性;检测肝脏、脾脏、脑组织样品抽提的DNA,结果为阴性。用该法检测人工感染发病仔猪及自然感染仔猪肺组织,并结合细菌分离培养,证明以肺脏组织为病料,通过细菌分离培养,再用PCR法鉴定分离菌体,可有效地用于HPs的诊断。检测110份来自发病猪场的患病仔猪肺脏病料,其中有53份为阳性,表明HPs所致发的Glasser′s病已在我国部分地区发生和流行。
- 尹秀凤王艳姜平李玉峰蒋文明
- 关键词：副猪嗜血杆菌PCR
- Ubiquitin基因介导下的PRRSV GP5基因体液免疫特性研究
- 泛素-蛋白酶体途径是一种高效蛋白降解途径,主要负责真核细胞内蛋白选择性降解。GP5囊膜糖蛋白是PRRSV的主要结构蛋白,为了评价泛素基因对GP5基因免疫的影响,本研究将ORF5 DNA片段克隆到载体pCMV-Ub,构建成...
- 汤玉瑜李玉峰蒋文明姜平
- 关键词：PRRSVGP5UBIQUITIN体液免疫应答
- 猪口蹄疫病毒多抗原表位的原核表达与纯化被引量：4
- 2006年
- 利用限制性酶切从重组质粒pShuttle-CMV-VP中得到猪O型口蹄疫病毒VP1(21-60)-(141-160)-(200-213)位氨基酸的基因。将此多抗原表位基因克隆至原核高效表达载体pET43.1 a(+),在E.coliBL21中用IPTG诱导表达了含有猪口蹄疫病毒多抗原表位的融合蛋白,并用镍柱亲和层析法获得了纯化蛋白。W estern-b lot结果表明融合蛋白可被猪O型口蹄疫病毒标准阳性血清所识别,从而为进一步研究FMDV多表位抗原的免疫特性和诊断方法奠定了基础。
- 杜以军姜平蒋文明李玉峰
- 关键词：口蹄疫病毒表位原核表达
- 兽用生物制品的运输、贮存与使用被引量：1
- 2006年
- 对兽用生物制品的命名作了概述,并对免疫预防用制品、诊断用制品、治疗用制品的运输、贮存与使用分别进行了阐述,同时对改善我国兽用生物制品的监管提出了建议。
- 张振兴李玉峰蒋文明
- 关键词：兽用生物制品疫苗诊断液抗血清微生态制剂
- 不同引物RT-PCR方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的比较研究被引量：22
- 2006年
- 用3对分别针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF7、ORF5和ORF5的PCR引物N1/N2、AdGP5.1/AdGP5.2和RFLP5.1/RFLP5.2进行RT-PCR,检测PRRSV,从其敏感性、特异性和临床样品检出率等方面进行比较,在此基础上进一步建立一步法RT-PCR检测方法。结果显示:3对引物对PRRSV均有很高的特异性;应用N1/N2引物病毒最低检测量为7.9 TC ID50,而AdGP5.1/AdGP5.2引物和RFLP5.1/RFLP5.2引物PCR最低检测量为79 TC ID50;运用N1/N2、AdGP5.1/AdGP5.2和RFLP5.1/RFLP5.2引物分别进行RT-PCR扩增检测临床样品,PRRSV检出率分别为28/48、27/48和25/48,且用AdGP5.1/AdGP5.2和RFLP5.1/RFLP5.2引物检测的阳性样品,用N1/N2引物检测也都呈阳性。运用N1/N2引物,通过一步法RT-PCR成功地从PRRSV S1株中扩增出374 bp的目的基因片段。结果表明,用N1/N2引物扩增PRRSV目的基因,其敏感性和临床样品检出率更高,更适合临床样品PRRSV的检测。
- 邓雨修李玉峰姜平蒋文明汤景元
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR一步法RT-PCR
- M蛋白基因shRNA抑制PRRSV在Marc145细胞中复制的研究被引量：4
- 2008年
- 【目的】通过靶向PRRSV基因组中的M基因的siRNA来抑制PRRSV在Marc145细胞中的复制。【方法】构建4个能转录小发夹RNA(shRNA)的质粒,将其与靶蛋白表达质粒共转染HEK293A细胞,观察荧光或进行半定量PCR;或将其转染Marc145细胞,感染PRRSV后进行IFA、TCID50和实时PCR检测。【结果】shRNA表达质粒对M融合蛋白表达的抑制率约为50%,使M真核质粒表达蛋白的mRNA水平降低54%～64%,表达的shRNA在PRRSV感染后48h使病毒的TCID50和mRNA水平均降低到1/10～1/100倍,间接免疫荧光结果表明shRNA表达质粒转染孔的荧光细胞数显著减少。【结论】shRNA表达质粒特异性的抑制了靶蛋白M和PRRSV的复制,靶向PRRSV基因组M基因不同区域的siRNA可以作为控制该病毒传播的候选策略。
- 黄娟姜平李玉峰蒋文明
- 关键词：PRRSVRNA干扰
- 猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白重组腺病毒的构建、鉴定与免疫原性的研究
- 猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)是近年来新发现的引起仔猪多系统衰弱综合征(PMWS)的必需病原,含有两个主要的阅读框ORF1和ORF2,分别编码复制相关蛋白(Rep蛋白)和核衣壳蛋白(Cap蛋白),其中Cap蛋白含有病毒主要抗...
- 王先炜姜平李玉峰蒋文明
- 关键词：猪圆环病毒CAP蛋白腺病毒免疫原性
- 文献传递
