舒静
- 作品数：6 被引量：19H指数：3
- 供职机构：泸州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
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- 下调血管生成素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡的影响被引量：7
- 2014年
- 目的构建人血管生成素（angiogenin,ANG）基因siRNA干扰质粒,检测其对膀胱癌T24细胞增殖、凋亡的影响。方法将针对人ANG基因siRNA表达质粒和无同源性的对照质粒稳定转染T24细胞后经G418筛选出阳性克隆。根据转染质粒不同分为3组：T24组（未转染组）、T24-NC组（转染阴性对照质粒组）、T24-siANG组（转染干扰质粒组）。通过RT-PCR检测T24细胞中ANG的mRNA表达水平,Western blot检测ANG蛋白的表达;MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术、TUNEL及Hochest 33342检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达;构建BALB/c裸鼠[4-6周龄,体质量（20±3）g]移植瘤模型,组织HE染色和免疫荧光CD31检测微血管变化;组织免疫化学方法检测移植瘤中ANG、Bax、Caspase-3、Bcl-2的表达。结果酶切和测序结果证明重组质粒构建成功;T24-siANG组ANG的mRNA水平及蛋白表达水平显著降低（P〈0.05）;T24-siANG组细胞增殖活力明显下降（P〈0.05）;流式细胞仪检测结果显示：与T24-NC组和T24细胞组相比,T24-siANG组细胞的凋亡率明显升高（P〈0.01）;TUNEL检测结果显示：T24-siANG组出现大量凋亡细胞;Hochest检测结果显示：T24-siANG组出现典型的凋亡形态特征如染色质凝集、核碎裂和明亮的蓝色荧光等;Western blot结果显示,在T24-siANG组中,Bcl-2的表达明显降低（P〈0.01）,而Bax和激活的Caspase-3的表达明显升高（P〈0.05）;组织HE染色和组织免疫荧光显示：T24-siANG组肿瘤微血管生成较T24与T24-NC组明显减少（P〈0.01）;组织免疫化学结果也表明：T24-siANG组ANG、Bcl-2蛋白显著降低,而Bax、活化的Caspase-3蛋白明显升高。结论成功构建的干扰质粒通过降低ANG的表达、抑制膀胱癌T24细胞的增殖、调节凋亡关键蛋白的表达,从而促进膀胱癌T24细胞的凋亡。
- 舒静田文琳李林刘玉林陈俊霞
- 关键词：血管生成素膀胱癌增殖凋亡
- 过表达人RI抑制人膀胱癌T24细胞的侵袭、转移及EMT发生被引量：1
- 2012年
- 目的检测过表达人核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因的质粒pIRES2-EGFP-RI对人膀胱癌T24细胞侵袭转移及上皮细胞间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)现象的影响。方法将连有RI的质粒pIRES2-EGFP-RI稳定转染T24细胞后利用G418筛选出阳性克隆。根据转染的质粒不同分为3组:T24组(未转染组)、T24-0(转染pIRES2-EGFP质粒)和T24-RI组(转染pIRES2-EGFP-RI质粒)。RT-PCR检测T24细胞中RI的mRNA水平变化,细胞免疫荧光及Western blot检测RI蛋白的表达,利用HE染色观察其细胞形态的变化,Transwell方法检测细胞侵袭及转移能力的变化,Western blot检测侵袭转移及EMT相关蛋白Twist、MMP-9和Snail及E-cadherin的表达,构建移植瘤模型,利用HE染色观测肺组织切片癌细胞转移情况,组织免疫化学方法检测移植瘤中RI、Twist、Snail及E-cadherin的表达。结果 T24-RI组人RI的mRNA水平及蛋白表达显著升高(P<0.05);HE染色结果表明细胞铺展良好,核质比明显减小,细胞由间质形态向上皮形态转变;Transwell方法显示T24-RI组细胞的侵袭及转移能力较T24组、T24-0组明显下降;Western blot结果表明T24-RI组Twist、MMP-9和Snail较T24组、T24-0组显著降低(P<0.01),E-cadherin较T24组、T24-0组显著升高(P<0.01);HE染色肺组织切片显示T24-RI组较其他两组癌细胞转移降低,组织免疫化学结果表明T24-RI组RI、E-cadherin蛋白明显升高,而Twist、Snail显著降低。结论过表达人RI载体提高了RI蛋白的表达水平,并抑制了人膀胱癌T24细胞EMT的发生,从而抑制了膀胱癌T24细胞的侵袭、转移。
- 姚雪熊冬梅舒静李林陈俊霞
- 关键词：人核糖核酸酶抑制因子T24细胞细胞转移细胞侵袭EMT
- 人核糖核苷酸酶抑制因子表达下调对膀胱癌T24细胞在体内外发生上皮间质转化的影响
- 2013年
- 目的探讨人核糖核苷酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor,hRI)表达下调对膀胱癌T24细胞在体内外发生上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法干涉质粒pGensil-1-RI稳定转染T24细胞,经G418筛选阳性克隆,并设实验组、空质粒对照组及未转染对照组,RT-PCR检测各组细胞中RI基因mRNA的转录水平、细胞免疫荧光和Western blot检测RI蛋白的表达水平;HE染色检测细胞形态的变化;Western blot检测各组细胞中E-cadherin、Twist、Slug和Vimentin等相关蛋白表达水平;将3组细胞注入BALB/c裸鼠皮下,35 d后取瘤并称重;免疫组织化学检测瘤组织中RI、E-cadherin和Vimentin蛋白的表达水平。结果荧光显微镜下观察可见,干涉质粒pGensil-1-RI转染成功;实验组RI基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平较两对照组分别降低了63.31%和64.11%、49.6%和49.5%(P<0.001);实验组细胞呈梭形,核质比增大;与实验相比,两对照组E-cadhein蛋白表达水平分别增加52.76%和46.93%(P<0.001),而Twist、Slug和Vimentin蛋白分别降低了50.49%和54.63%、43.74%和51.55%、60.35%和53.77%(P<0.001);两对照组的瘤重明显低于实验组,分别低84.91%和80.89%(P<0.01),其RI和E-cadherin蛋白表达水平降低,而Vimentin蛋白表达水平则增加。结论沉默RI基因能明显增加T24细胞的转移、侵袭及EMT的能力。
- 熊冬梅姚雪李林舒静陈俊霞
- 关键词：膀胱癌T24细胞上皮间质转化
- 核糖核酸酶抑制因子与血管生成素的相互作用被引量：3
- 2014年
- 目的探讨核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)与血管生成素(angiogenin,ANG)的相互作用。方法利用免疫荧光标记结合共聚焦显微镜技术来确立RI与ANG蛋白在细胞内的共定位。利用激光共聚焦显微镜的荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术验证RI和ANG蛋白的相互作用。构建原核表达质粒pGEX-4T-RI,转化E.coli BL21大肠杆菌(DE3)表达,并经谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B(glutathione sepharose4B)纯化GST-RI蛋白,考马斯亮蓝染色和免疫印迹鉴定表达情况,利用GST蛋白沉降技术检测RI与ANG蛋白在体外的结合作用。应用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)实验检测两蛋白在真核细胞内的结合作用。结果细胞内免疫荧光标记的RI和ANG蛋白在激光共聚焦显微镜观察下存在共定位现象。FRET结果显示RI与ANG在细胞内存在相互作用。另外酶切和测序结果证明原核表达质粒pGEX-4T-RI构建成功,GST-RI蛋白诱导表达正确,GST蛋白沉降结果显示RI和ANG蛋白在原核细胞反应体系中存在相互作用。结论 RI和ANG蛋白在原核细胞反应体系和真核细胞中均存在相互结合作用。
- 李林舒静刘玉林陈俊霞
- 关键词：核糖核酸酶抑制因子血管生成素相互作用
- 下调血管生成素基因表达对膀胱癌移植瘤生长及p-AKT、p-GSK3β、p-mTOR表达的影响被引量：8
- 2015年
- 目的探讨下调血管生成素(ANG)基因表达,对膀胱癌移植瘤生长及p-AKT、p-GSK3β、pm TOR表达的影响。方法采用ANG mRNA的特异性siRNA表达载体和无同源性的对照载体,在脂质体介导下稳定转染膀胱癌T24细胞,根据转染质粒不同分为3组:T24组为正常T24细胞,T24-NC组为转染阴性对照质粒T24细胞,T24-si ANG组为转染干扰质粒T24细胞。通过筛选、鉴定后,将各组细胞皮下注射到BALB/c裸鼠中,观察肿瘤生长和肿瘤微血管密度、肺上肿瘤转移灶的变化,利用免疫组化技术检测CD31、p-AKT、p-GSK3β、pm TOR的表达。结果与T24-NC组相比,T24-si ANG组瘤体质量显著降低(P<0.01),抑瘤率为57.46%。HE染色显示,T24-si ANG组肿瘤微血管较T24和T24-NC组明显减少,T24-si ANG组CD31、p-AKT、p-GSK3β、p-m TOR表达呈弱阳性反应。结论下调ANG基因的表达能显著抑制膀胱癌移植瘤生长,并通过降低CD31、pAKT、p-GSK3β、p-m TOR表达抑制膀胱癌裸鼠移植瘤增殖及转移的潜能。
- 涂业桃舒静田文林陈俊霞
- 关键词：血管生成素膀胱癌移植瘤
- 过表达核糖核酸酶抑制因子对膀胱癌移植瘤侵袭转移及上皮细胞间质转化的影响被引量：1
- 2015年
- 目的研究过表达核糖核酸抑制因子(RI)对膀胱癌移植瘤侵袭转移及上皮细胞间质转化(EMT)的影响。方法将RI过表达质粒(pIRES2-EGFP-RI)和阴性对照质粒(pIRES2-EGFP)稳定转染膀胱癌T24细胞,稳定表达细胞株分别命名为:T24-RI组、T24vector组、T24组。将各组T24细胞分别接种至BALB/C裸鼠左腋皮下,观察移植瘤的生长、微血管密度及肺组织转移灶的变化;进一步分析RI、MMP-2、MMP-9、EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug、Twist蛋白)在肿瘤组织中的表达水平。结果 T24-RI组较T24组与T24vector组,瘤体质量显著降低(P<0.01),抑瘤率分别为26.67%和38.85%;与对照组比较,T24-RI组瘤组织微血管密度明显减少,肺组织未见明显转移灶,同时CD31在瘤组织中表达减少;免疫组织化学染色显示:T24-RI组瘤组织中RI、E-cadherin蛋白的表达明显升高,而MMP-2、MMP-9、N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug、Twist蛋白表达明显降低。结论过表达RI可能通过调节侵袭转移EMT关键蛋白的表达,显著抑制了膀胱癌移植瘤生长、侵袭和转移的潜能。
- 舒静姜源姚雪陈俊霞
- 关键词：T24细胞移植瘤肿瘤侵袭转移
