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α-芋螺毒素TxID对亚基不同配比α3β4乙酰胆碱受体的敏感性研究被引量：3: 2016年; 目的研究α-芋螺毒素TxID对具有不同亚基配比组成的大鼠α3β4乙酰胆碱受体(nAChRs)的阻断活性敏感性。方法利用非洲爪蟾卵母细胞表达大鼠α3β4乙酰胆碱受体亚型,将其亚基α3和β4的cRNA分别以3种不同比例,即1∶1、1∶10或10∶1注射到非洲爪蟾卵母细胞中进行表达,形成不同亚基配比的α3β4受体,分别检测和比较α-芋螺毒素TxID对这些不同亚基配比受体的阻断活性。结果成功表达了α3和β4亚基的3个不同配比的受体,且α-芋螺毒素TxID对它们的敏感性有较大差异,与常规的1∶1α3β4乙酰胆碱受体相比,1∶10α3β4乙酰胆碱受体对TxID的敏感度与之接近,其活性差异在2倍以内,而10∶1α3β4乙酰胆碱受体对TxID的敏感度显著下降,其活性差异超过了5倍。结论α-芋螺毒素TxID对不同亚基配比的α3β4乙酰胆碱受体有不同的敏感性,并能反应该受体的α和β亚基不同的组成方式,这对于研究α3β4乙酰胆碱受体的结构和生理功能具有很重要的指导意义。; 长孙东亭吴勇朱晓鹏罗素兰; 关键词：非洲爪蟾卵母细胞

毕赤酵母高效电转化条件的研究被引量：12: 2010年; 目的建立毕赤酵母的高效电转化方法,为利用毕赤酵母重组表达海洋药物功能基因提供方法基础。方法采用电穿孔的方法把外源DNA转化进毕赤酵母基因组中。通过对毕赤酵母生长状态,电击条件等影响因素进行探索。结果当采用对数生长中期的菌体制备感受态细胞、电压为1.5kV、质粒浓度为0.15g.L-1和0.2cm电转化杯时,转化效率达到最大值,为每微克质粒DNA 36个转化子。经抽样PCR鉴定所得到的转化子均为阳性克隆。结论通过对电转化各种条件的优化,获得了高效电转化技术方法。; 高炳淼高炳淼长孙东亭唐天乐; 关键词：毕赤酵母电转化转化率

利用SMART技术构建疣缟芋螺毒管cDNA噬菌体文库及芋螺毒素新基因的克隆被引量：4: 2012年; 利用RNA 5'末端移动反转录(switching mechanism at 5'end RNA transcription,SMART)技术构建及鉴定疣缟芋螺毒管cDNA噬菌体文库,克隆新型芋螺毒素基因.提取疣缟芋螺毒管总RNA,用RT-PC反转录成单链cDNA(single-stranded cDNA,ss-cDNA),长距离PCR(long-distance PCR,LD-PCR)扩增合成双链cDNA(double-stranded cDNA,ds-cDNA),依次用蛋白酶K和SfiⅠ酶进行酶切孵育,用CHROMA SPIN-400柱进行分级分离.得到的ds-cDNA与λTripIE×2噬菌体载体体外连接并体外包装,感染大肠杆菌E.coli XL1-blue,测定原始文库滴度和重组率.进行文库扩增,测定扩增文库滴度.用PCR鉴定插入cDNA片段的大小,构建的疣缟芋螺毒管cDNA噬菌体原始文库滴度为1.47×106pfu/mL,重组率为90.72%,扩增文库的滴度为4.07×108pfu/mL,插入cDNA片段为200～1 200 bp.利用SMART技术成功构建了疣缟芋螺毒管cDNA噬菌体文库并克隆出新型芋螺毒素基因,为芋螺毒素基因的筛选和鉴定奠定了基础.; 李宝珠高炳淼吴勇于津鹏吴潇洒罗素兰长孙东亭; 关键词：噬菌体 CDNA文库 SMART技术

桶形芋螺毒管蛋白质组双向电泳条件优化被引量：3: 2010年; 目的:优化双向电泳的条件,建立适用于桶形芋螺毒管蛋白质组分析的双向电泳方法。方法:对毒管蛋白的提取、上样量及SDS-PAGE凝胶浓度等影响因素进行优化。结果:乙酸提取法适宜于毒管蛋白的提取,对于pH3～10、17cm的IPG胶条,当上样量为0.75mg,聚焦70000Vhr,SDS-PAGE凝胶浓度为15%时,可提高双向电泳的分离效果,所得蛋白点清晰、数目达到1003个。结论:采用优化的条件进行双向电泳,能得到分辨率高、重现性好、完整的双向电泳图谱,为后续桶形芋螺毒管蛋白质组学研究打下基础。; 张容鹄冯建成彭超罗素兰; 关键词：蛋白质组双向电泳

烟碱型乙酰胆碱受体及其相关疾病被引量：2: 2017年; 烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs)属于配体门控离子通道,广泛分布于中枢神经系统、周围神经系统和肌肉组织非神经系统中,不同的亚基组成形式决定了其对激动剂或拮抗剂不同的亲和力。近期的研究表明,n ACh Rs与神经痛、帕金森病、阿尔茨海默病(老年痴呆症)以及小细胞肺癌、乳腺癌、宫颈癌等多种疾病的病理进程息息相关。该文就几种疾病与nAChRs结构、功能及其二者相关性进行综述,并重点阐述n ACh Rs介导的α-芋螺毒素抗肿瘤研究进展,以期为芋螺毒素的抗肿瘤药物的研发提供理论依据。; 孙志华罗素兰; 关键词：乙酰胆碱受体疾病芋螺毒素

不同因素对吗啡诱导的小鼠CPP实验的影响: 2015年; 为了比较不同因素对吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱(CPP)实验模型的影响,以建立理想的CPP模型,本实验首先筛选出符合条件的小鼠来注射吗啡(5 mg·kg-1),分为皮下注射和腹腔注射2种不同给药方式组,于不同给药时间组连续皮下注射吗啡3 d,5 d,7 d,并于不同测试时间(15 min或30 min)组,分别对小鼠进行CPP训练,然后进行测试,同时以小鼠在伴药箱(白箱)的活动时间为指标进行比较.结果表明:皮下注射和腹腔注射生理盐水组与吗啡组相比较,均存在极显著性差异(P<0.001);皮下注射吗啡组与腹腔注射吗啡组的差异性不显著(P>0.05),连续给药3 d,5 d,7 d均能成功建立CPP模型(P<0.001),CPP训练后,3 d吗啡组与5 d、7 d吗啡组相比较,均存在极显著差异(P<0.001),5 d与7 d吗啡组相比较,则存在显著性差异(P<0.05).在连续给药5 d的基础上,不同测试时间(15 min与30 min)吗啡组与生理盐水组相比较,小鼠在伴药箱的活动时间具有极显著差异性(P<0.001).由此得出结论:皮下注射和腹腔注射2种给药方式对吗啡诱导的小鼠CPP模型的建立无影响;连续注射5 d所建立的CPP模型更稳定,更经济,更理想;测试时间为15 min时更省时,更具代表性.; 李晓丹胡远艳邴晖于树润丁青罗素兰长孙东亭; 关键词：吗啡小鼠影响因素

信号芋螺基因组DNA提取方法的优化被引量：2: 2020年; 高质量的基因组DNA的获取是芋螺毒素基因克隆及基因组文库构建的关键。笔者采用4种方法提取信号芋螺(Conus litteratus)的不同组织器官的DNA,并综合比较了各组DNA的浓度和纯度、DNA片段的大小和完整性。结果表明,由改良的DNA快速提取试剂盒法提取的DNA纯度和浓度较好;4种组织器官中,腹足纯度较高,是更合适的提取组织;肝胰脏和毒管获取的DNA产率最高,但片段完整性差,污染严重;PCR反应获得了跟预期大小一致的特异扩增产物。因此,信号芋螺基因组DNA的提取最佳方法为改良的DNA快速提取试剂盒法,提取部位为腹足组织,可以获得高质量的基因组DNA,且符合后续实验要求。; 陈婉姨李新佳罗素兰长孙东亭; 关键词：基因组DNA

α-芋螺毒素TxID与α3β4乙酰胆碱受体相互作用机制研究: 芋螺毒素（Conopeptide,Conotoxin,CTx）是生长于热带海洋中的肉食性软体动物芋螺（genus Conus）分泌的一大类活性多肽,可以用来捕食、防御和威慑竞争者。自然界含有约700多种芋螺,每一种可以分...; 吴勇长孙东亭朱晓鹏罗素兰; 文献传递

ω-芋螺毒素MVIIA和MVIIC对α9α10乙酰胆碱受体的活性研究被引量：2: 2014年; 分析和检测了ω-芋螺毒素MVIIA和MVIIC对α9α10乙酰胆碱受体(nAChR)的结合活性,并用重组表达在非洲爪蟾卵母细胞膜上的大鼠α9α10 nAChR受体,分别评价了2个ω-芋螺毒素MVIIA和MVIIC在常规的ND96灌流液和不含钙离子的钡离子ND96灌流液(Ba2+ND96)中对该受体的阻断活性.研究表明,2个ω-芋螺毒素MVIIA和MVIIC在Ba2+ND96灌流液中对α9α10 nAChR没有抑制作用,而它们在常规的ND96灌流液中却表现出微弱的抑制活性,这应是受钙离子激活产生的氯离子电流影响的结果.因此,2个ω-芋螺毒素MVIIA和MVIIC并不是α9α10 nAChR的有效阻断剂,其作用机理与α-芋螺毒素Vc1.1和Rg IA完全不同.本研究阐明了芋螺毒素抑制α9α10 nAChR和钙离子通道的机理,这对研发新型的芋螺毒素镇痛药和更好地治疗顽固性疼痛具有很重要的科学意义.; 长孙东亭朱晓鹏吴勇胡远艳罗素兰; 关键词：神经痛

A-超家族芋螺毒素研究进展: 2015年; 芋螺毒素是一类芋螺毒液管和毒囊内壁的毒腺所分泌的活性多肽,能特异地作用于电压门控离子通道(Na+、K+、Ca2+)、配体门控离子通道(nAChRs、5-HT3R、NMDAR)、G蛋白偶联受体(神经降压素和血管加压素)和神经递质转运蛋白,已在神经科学领域和新药研制方面受到广泛关注。目前据其信号肽的保守性,将芋螺毒素分为26个超家族。其中A-超家族是研究较多的超家族之一,其作用靶标主要是乙酰胆碱受体,对疼痛、成瘾、抑郁症、帕金森综合症、老年痴呆症、多发性硬化症、癫痫、中风、肌无力等具有潜在的药用价值。本文就A-超家族芋螺毒素的基因结构、蛋白特征、功能等方面的研究进展进行综述。; 孟海玲屈静庞静邴晖吴勇朱晓鹏罗素兰长孙东亭; 关键词：基因结构乙酰胆碱受体

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罗素兰

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