王雪峰 作品数:65 被引量:40 H指数:4 供职机构: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 黑龙江省发展高新技术产业专项资金 黑龙江省自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 生物学 环境科学与工程 更多>>
马TRIM5α激活天然免疫信号通路的分子机制研究 <正>天然免疫是宿主抵抗外来病原的第一道防线。TRIM5α是存在于多种宿主细胞内抗逆转录病毒天然免疫限制因子,可通过其SPRY结构靶向降解逆转录病毒衣壳蛋白(CA)和激活天然免疫来发挥抗病毒功能。我们发现,相对其它动物而... 那雷 王翠辉 林跃智 王雪峰 杜承 王晓钧关键词:信号通路 分子机制 文献传递 马传染性贫血病毒弱毒疫苗env基因变异及其生物学意义 <正>马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗是唯一成功应用的慢病毒弱毒疫苗,为慢病毒疫苗研究提供了独特模型。EIAV囊膜蛋白(Env)是病毒与靶细胞受体结合的主要区域,同时也是病毒的主要免疫原,与诱导中和抗体的产生密切相关... 王雪峰 陈杰 林跃智 杜承 那雷 王晓钧关键词:马传染性贫血病毒 弱毒疫苗 基因变异 生物学 文献传递 马传染性贫血病毒囊膜基因gp90 V4区糖基化回复突变感染性克隆的构建 2009年 为了阐明我国马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗致弱及免疫保护的分子机制,本研究分析了疫苗株及其亲本强毒株共34个囊膜基因序列。结果发现疫苗株在膜基因gp90V4区潜在的N-连接糖基化位点出现了稳定的碱基替换,使该位点消失。为研究囊膜糖基化的作用,以疫苗株全长感染性克隆pLGFD3-8为亲本,利用反向遗传技术对该突变位点进行了糖基化序列回复突变操作,构建了全基因感染性克隆pLGFDg9。将其转染驴胎皮肤细胞(FDD),通过用逆转录酶活性、间接免疫荧光和RT-PCR方法检测而确定其感染性。结果表明,在FDD细胞中盲传3代后,在细胞培养物中可检测到逆转录酶活性,RT-PCR和间接免疫荧光检测均呈阳性,电镜下见到典型的EIAV颗粒。 韩秀娥 张萍 王雪峰 孔宪刚 周建华 相文华关键词:马传染性贫血病毒 定点突变 感染性克隆 马传染性贫血病弱毒疫苗免疫马血清对同源和异源病毒株中和活性的研究 2018年 为评价马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗免疫马血清对同源和异源病毒株的中和活性差异,本研究构建了不同EIAV株(EIAV_(FDDV3-8)、EIAV_(LN)、EIAV_(UK)和EIAV_(YN))Env的重组表达质粒,并将这些质粒与包装质粒(pUK-Gag-pol)及表达荧光素酶的转移质粒(pONY8.1)共转染293T细胞;将假病毒与疫苗免疫马(5#、8#)血清共孵育后接种于ELR1-293T细胞单层;通过检测细胞中荧光素酶活性,计算疫苗免疫马血清中和50%假病毒感染的血清稀释倍数,评价血清对病毒的中和活性。结果显示,疫苗免疫马血清对表达不同Env假病毒的中和滴度存在差异,从高到低依次是:pVR1012-FDDV-3-8-Env、pVR1012-LN-Env、pVR1012-UK-Env、pVR1012-YN-Env,而且免疫血清对不同病毒株的中和能力与不同病毒株Env的变异呈负相关(5#,R^2=0.99;8#,R^2=0.96)。虽然免疫马血清中和异源病毒株的能力显著低于同源病毒株,但其对异源病毒株仍具有良好的中和作用,本研究结果表明中国EIAV弱毒疫苗可以激发抗不同病毒株的广谱中和抗体。 刘影 王雪峰 王美月 陈杰 孙君帅 马建 王晓钧关键词:马传染性贫血病毒 囊膜蛋白 假病毒 感染马传染性贫血病毒的巨噬细胞差异表达蛋白质组分析 马传染性贫血病毒(EIAV)系逆转录病毒科,慢病毒属的一种线状单股正链RNA病毒,感染马属动物。目前对EIAV感染机制的研究主要集中在基因组学及病毒毒力和免疫原性方面,即通过反向遗传操作技术,免疫学实验等方法分析基因的组... 杜承 刘海芳 林跃智 王雪峰 周建华反向遗传学技术的应用 被引量:3 2008年 反向遗传学是直接从遗传物质入手研究生命现象与规律,其相应的操作技术已在生命科学研究的各个领域显示出了广泛的应用前景。作者对反向遗传学技术的应用进行了评述。 杨彬 王雪峰 王凤龙关键词:病毒基因组 疫苗 马鼻疽补体结合反应检测方法的改进 被引量:1 2017年 为配合国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020)对马鼻疽的监测任务,本研究对马鼻疽诊断技术(农业行业标准,NY/T 557-2002)中补体结合试验的体系进行了优化和改进。改进后的方法使用商品化的抗原、补体、溶血素,保证了实验体系的稳定;与原方法相比,该方法将反应的总体系从2.5 m L缩小为0.75 m L,阴阳性血清的稀释度从1∶10降至1∶20,阳性血清、阴性血清、抗原、溶血素、补体、红细胞的使用量均缩减了5倍左右,降低了检测成本,同时将检测用具由试管改为2 m L聚丙烯塑料管,方便了实验室的操作和生物废弃物的无害化处理。利用上述改进的方法和原方法分别对来自河北、北京、天津和上海的47份马血清进行了检测,结果相同,以此验证了两种方法在反应条件和稳定性方面是一致的。 陈杰 王雪峰 关平原 王文 李舵 郭巍 王晓钧关键词:马鼻疽 补体结合试验 牛初乳免疫球蛋白IgG单克隆抗体的制备 被引量:1 2011年 为了制备牛初乳免疫球蛋白IgG单克隆抗体,试验利用标准IgG蛋白作为免疫原,免疫6周龄Balb/c雌性小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术,通过间接ELISA法筛选,采用有限稀释法,经过3次克隆筛选,获得2株稳定分泌抗IgG蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为E7和D9,并进行了亚类鉴定。结果表明:该杂交瘤细胞培养上清液抗体效价抗体效价E7为1∶3.01×103,D9为1∶5.24×104;腹水抗体效价E7为1∶2.52×105,D9为1∶7.01×106;E7和D9分泌的单克隆抗体均为IgG1型,轻链为λ链抗体。 韩秀娥 李萌 张萍 王雪峰 相文华 姜金斗 刘鹏关键词:牛初乳 IGG 单克隆抗体 马传染性贫血病毒强毒株gag和gp45基因的体内进化分析 2012年 为研究马传染性贫血病毒(EIAV)强毒株体内进化规律,将3匹马分别以1×105 TCID50/匹接种EIAVLN40强毒株后,在不同时间点采取外周血,分离单核白细胞。提取白细胞中的DNA,并以其为模板,应用套式PCR技术分别扩增EIAV前病毒DNA的p15,p9和gp45基因,经克隆后进行序列分析。结果显示,与接种前EIAVLN40相比较,p15基因核苷酸和氨基酸平均差异率分别为1.8%(0~2.9%)和1.7%(0~3.6%);p9分别为2.5%(0.3%~3.8%)和2.9%(0~4.8%);gp45-Ⅰ分别为1.3%(0.3%~2.1%)和1.8%(0~3.2%),gp45-Ⅱ分别为2.1%(0~3.4%)和2.6%(0~4.7%)。在EIA发热期,每个基因核苷酸和氨基酸差异率最小;在亚临床阶段,每个基因平均差异率总体上相对较高。氨基酸变异位点分析发现,发病期(2-2、3-1)各基因氨基酸序列回复到亲本株EIAVLN40,其余时期p15基因氨基酸稳定变异位点16N/S、88T/S和112M/E;p9基因115E/G和122K/M;gp45-Ⅰ基因9T/F/L;gp45-Ⅱ基因21E/K和29G/S。此外,p15基因进化树结果显示,发热期(2-2、3-1)p15基因序列与EIAVLN40序列处于同一分支上,亚临床阶段大多数p15基因序列处于另一个大分支上;其他基因进化情况与p15基因类似。对EIAV p15、p9、gp45基因体内进化分析,有助于对EIAV在马体内感染进程的研究,为进一步研究EIAV持续感染和逃避免疫监视的机制提供参考。 刘强 王雪峰 王珊珊 韦华冕 杜承 林跃智 马建 周建华 王凤龙关键词:马传染性贫血病毒 P15基因 基于iTRAQ技术对甜菜块根膨大蛋白质组学的研究 甜菜(Beta Vulgaris L.)是全球主要的糖料作物之一,以其块根为制糖原料,种植以块根的大小和含糖为经济指标。研究甜菜块根膨大过程中的蛋白质组学变化对了解甜菜块根增长的分子机制有着重要作用。本研究采用同位素标记... 王雪峰关键词:甜菜 块根膨大 蛋白质组学